全 文 ：·1726· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第1i期2005午11月
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反相离子对色谱法测定黄杨木中环维黄杨星D
谢昀1，于治国”，徐新盛2，文艳秋2
(1．沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳110016；2．北京中丰天恒医药技术开发有限公司，北京100012)
黄杨木是黄杨科植物小叶黄杨Buxusmicro-
phfllaSieb．etZucc．var．sinicaRehd．etWils．的
茎枝，明代《本草纲目》中已有记载。黄杨木粉是治疗
心血管病的有效药物，其主要活性成分为甾体生物
碱环维黄杨星D(cyclovirobuxiumD)，具有行气活
血、通络止痛之功效。目前，环维黄杨星D已从黄杨
木及其同属植物中提取分离“]，并与其制剂黄杨宁
片一起收载于《中国药典／(2005年版)。黄杨木中环
维黄杨星D的测定，目前尚无文献报道。本实验建
立了一种反相离子对液相色谱法，测定了黄杨木中
环维黄杨星D的量。
1仪器、试剂与材料
岛津LC一10ATvp液相色谱仪，岛津SPD一
10Avp紫外检测器，Anastar色谱工作站，DT一100
光电天平。环维黄杨星D对照品(质量分数99．o％，
HPLC—MS归一化法标定，北京中丰天恒医药技术
开发有限公司提供)；黄杨木(购自浙江，经沈阳药科
大学生药鉴定教研室孙启时教授鉴定){十二烷基硫
酸钠(AerosOrganics，Belgium公司)；磷酸、三乙
胺、氨水、氯仿均为分析纯(北京化工厂)；甲醇、乙腈
均为色谱纯(Merk公司)，水(为二次蒸溜水)。
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱：ApolloC18柱(250mm×
4．6mm，5pm，美国奥泰公司)；流动相：0．005mol／
L十二烷基硫酸钠溶液(内含0．15％三乙胺，磷酸
调节pH值至3．10)一乙腈(54：46)；体积流量：1．0
mI。／min；检测波长：203nm；柱温：45℃；进样量：
20儿。在此色谱条件下，对照品与样品的色谱图
见图1。
2．2对照品溶液的制备：取环维黄杨星D对照品
约60mg，精密称定，置50mL量瓶中，用流动相溶
收稿日期{2005—02一ll
*通讯作者于治国
f／rain
*环维黄扬星D
*一eyclovirobuxiumD
圈1环维黄杨墨D对照品(A)和黄杨木(B)的HPLC图谱
Fig．1HPLCchromatogramsfcyclovlrobuxhm
D(A)andbranchofB．microphflla
解并稀释至刻度，摇匀，得1．2mg／mL的对照品储
备液。精密吸取对照品储备液2．0ml，，于10mL量
瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得0．24rag／
mL对照品溶液。
2．3供试品溶液的制备：取黄杨木粗粉约5．0g，精
密称定，置250mL圆底烧瓶中，加浓氨水5mL，拌
匀，静置30min。精密加入氯仿i00mL，精密称定，
水浴加热回流3h，放冷，精密称定，用氯仿补足质
量。滤过，精密吸取续滤液50mL，水浴蒸干，残渣用
0．5％醋酸溶液i0mL溶解后，稀氨水调节pH值至
7．0，分别用氯仿10mL、醋酸乙酯8mL萃取，分离
收集水相，水浴蒸干，残渣用流动相溶解并转移至
10mL量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，0．45pm
微孔滤膜滤过，即得。
2．4线性范围考察：分别精密吸取对照品储备液
(1．2mg／mL)0．5、1．0、2．0、3．0、4．0和5．0mL置
10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；进样20
止，以峰面积为纵坐标(y)，质量浓度(mg／mL)为
横坐标(x)，用最小二乘法计算，得线性方程为：】，一
9．09×10sX+8．29×103b一0．9993)，环维黄杨星
D在0．062～0．62mg／mL与峰面积呈良好的线性
关系。
一
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月· 727·
2．5精密度试验：精密吸取对照品溶液(o．24rag／
mL)，连续进样5次，记录环维黄杨星D峰面积，计
算其RsD为0．8％(”一5)。
2．6重现性试验：精密称取同一批黄杨木粗粉5
份，按2，3项方法平行制备5份供试品溶液，分别进
样20pL，用峰面积按外标法计算环维黄杨星D的
量，RsD为1．5％h一5)。
2．7稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0、2、
4、8、12和24h进样20pL，记录色谱图，结果环维
黄杨星D峰面积RSD为1．1％，表明在24h内溶
液稳定。
2。8加样回收率：取已知量(1．04mg／g)的黄杨木
粗粉约2．5g，精密称定，共9份，分别加入环维黄杨
星D对照品1．24、2．48、3．72rag(取1．2mg／mL的
储备液1．0、2．0、3．0mL加入)各3份，按2．3项方
法制备供试品溶液，分别进样测定，计算回收率，结
果平均回收率为98．12％，RSD为1．18％。
2。9样品测定；取3批黄扬木样品，制备供试品溶
液，分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各20
pL，进样测定，记录色谱图，用峰面积按外标法计
算，结果见表l。
3讨论
襄I 3批黄榻术中环罐黄橱量n的羹定精幂抽嚣3)
Table1 Determinationofcyd virobuxlumDInthree
batches0fB．microp^y盯4(^=3)
《中国药典》(2005年版)分别采用非水滴定法
和酸性染料比色法测定环维黄杨星D原料及制剂
的量，测定的是总生物碱，专属性差。由于环维黄杨
星D结构不含双键，笔者曾采用HPLC-ELSD检
测，但受检测器对流动相的限制，未能获得理想的色
谱系统，色谱峰拖尾严重。经在流动相中加入离子对
试剂，在末端吸收203nm处直接进行紫外检测，色
谱条件分离效果良好，色谱峰形对称。
在供试品溶液的制备过程中，曾对甲醇、酸性乙
醇、氯仿、石油醚等不同溶媒，超声、回流、索氏提取等
不同提取方法进行比较，最终确定碱性条件下氯仿加
热回流提取为最佳条件，提取效率高、且于扰少。
Reference：
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(上接第1662页)
桑自皮总提取物，按公式：收率=提取物质量／药材
质量×100％，计算其收率。总黄酮的测定按照本课
题组制定方法(另文报道)，测定提取物中总黄酮的
质量分数，计算总黄酮的实际得量，总黄酮得量=提
取物质量×总黄酮的质量分数。经综合分析：以实际
提取物中相当于总黄酮的质量为考察结果，用统计
分析软件SPSS计算多元回归方程，找出加水量、煎
煮时间，聚酰胺用量、乙醇洗脱体积分数和乙醇用量
5种因素与提取得到总黄酮的质量(y)之间的关系。
结果y一0．329x3+0．188x5～0．198，r=0．948。
可见X。x；前的系数为正数，表明聚酰胺用量、乙
醇用量与综合评分呈正相关。考虑到在具体的10组
试验中3号条件下提取得到的总黄酮的质量分数是
最高的，同时也考虑到能效的关系。因此，综合分析
选择3号试验中的各个试验条件基本为最佳选择，
同时适当增加药材的煎煮时阃，从而得到本试验中
的最佳提取工艺即桑白皮100g，加12倍量的水授
泡并煎煮1．5h，滤过，药渣再加10倍量水煎煮1h，
滤过，合并两次水提取液，通过100g的30～60目
聚酰胺色谱柱，用2个保留体积的水洗脱，然后用6
个保留体积的80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回
收乙醇，得桑白皮总黄酮提取物。
按优选方案安排试验，验证5批，桑白皮总黄酮
的提取率、总黄酮的质量结果见表2。
衰2桑白皮样品总黄酮的摄取结果
Table2 Resultsoftotalf avonoldsinM．alba
3讨论
本实验采用均匀设计法安排试验进行优选，利
用多元回归分析确定了桑白皮总黄酮的最佳提取工
艺参数，可以为桑白皮总黄酮工业化生产条件提供
参考。
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万方数据
反相离子对色谱法测定黄杨木中环维黄杨星D
作者： 谢昀， 于治国， 徐新盛， 文艳秋
作者单位： 谢昀,于治国(沈阳药科大学药学院,辽宁,沈阳,110016)， 徐新盛,文艳秋(北京中丰天恒医
药技术开发有限公司,北京,100012)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(11)
被引用次数： 1次
参考文献(1条)
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