全 文 ：·药剂与工艺·
葛根芩连汤不同配伍对黄芩苷含量的影响
谭晓梅 ,戴开金 ,罗佳波 ,吴朝晖
(第一军医大学 中药制剂重点实验室 ,广东 广州　 510515)
摘　要: 目的　建立 RP-HPLC法测定葛根芩连汤各配伍组合中的黄芩苷的含量测定方法 ,研究配伍对黄芩苷含量
的影响。方法　采用 L8 ( 27 )正交设计及统计方法 (统计软件 SPSS10. 0) ,以 HPLC法测定黄芩苷的含量。结果　葛
根、黄连对方中黄芩苷含量的影响差异具有显著性 (P < 0. 05) ,甘草对黄芩苷含量的影响差异无显著性 (P>
0. 05) ,葛根、黄连、甘草对黄芩苷含量的影响不存在两两交互作用。 凡是黄连与黄芩的配伍组合皆有沉淀产生 ,并
且沉淀中含有较多的黄芩苷。结论　葛根芩连汤配伍中葛根、黄连能降低黄芩苷的含量 ,甘草没有增加黄芩苷的溶
出的作用。 p H值的改变可能是含黄连和黄芩配伍煎液产生沉淀的主要原因之一。
关键词: 葛根芩连汤 ;配伍 ;黄芩苷 ;高效液相色谱
中图分类号: R283. 2; R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 07 0598 03
Influence of compatibility on content of baicalin in Gegen Qinlian Decoction
T AN Xiao-mei , DAI Kai-jin, LUO Jia-bo, WU Zhao-hui
( Key Labor ato ry o f Pha rmaceutics of Chinese Materia Medica,
Fir st M ilita ry Medica l Univ er sity , Guang zhou 510515, China )
Abstract: Object　 To set up the quantitativ e method of baica lin in Gegen Qinlian Decoction ( GQD)
by RP-HPLC and to determine the change of baicalin contents in decoctions prepa red f rom va rious combi-
nations of GQD. Methods　 By L8 ( 27 ) o rthogonal design and sta tistics analysis ( SPSS10. 0) , eight decoc-
tions wi th Radix Scutellariae ei ther alone o r incombination wi th one or mo re o f the o ther three components
w ere prepa red o r analy zed. Contents o f baicalin in them were determined by RP-HPLC. Results　 It w as
signi ficant ( P < 0. 05) to the dif ference on the content o f baicalin caused by Radix Puerariae and Rhizoma
Copt idis , but fo r Radix Glycyrrhizae Preparata , the dif ference was insignificant ( P> 0. 05) and interac-
tions betw een two o f three w ere insignificant ei ther. In this experiment , the sedimentation w as found in
the decoctions contained Radix Scutellariae and Rhizoma Coptidis . Conclusion　 The content of baicalin is
reduced by Radix Puerariae and Rhizoma Coptidis , The reso lution of baicalin is no t increased by Radix
Glycyrrhizae Preparata. Maybe the change of pH leads to the sedimenta tion in decoctions contained Radix
Scutellariae and Rhizoma Coptidis .
Key words: Gegen Qinlian Decoction ( GQD); compa tibili ty; baicalin; HPLC
　　葛根芩连汤由葛根、黄连、黄芩、甘草 4味中药
组成 ,出自《伤寒论· 太阳篇》 ,有解表清里、升清止
利之功。该方主要化学成分的变化及配伍的影响研
究报道较少。 本实验研究了配伍对黄芩苷含量的影
响 ,对黄连与黄芩产生的沉淀及其原因进行了分析 ,
为该方的研究提供参考。
1　仪器与试药
美国惠普 HP-1100高效液相色谱仪 , G1315A
紫外 -可见光二级管阵列检测器 ; 410A型 pH计 (美
国 ORION ) ;甲醇 (分析纯、色谱纯 ) ,磷酸 (分析
纯 ) ;黄芩苷对照品 (中国药品生物制品检定所 ) ;葛
根、黄芩、黄连、甘草药材由广东省药材公司提供 ,经
本校中药鉴定教研室刘传明讲师鉴定 ,分别为豆科
植物野葛 Pueraria lobata ( Willd. ) Ohwi ,唇形科植
物黄芩 Scutellaria baicalensis Georgi干燥根茎 ,毛
茛科植物黄连 Coptis chinensis Franch.干燥根茎 ,豆
科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.干燥根茎
(经蜜制 )。
2　方法与结果
2. 1　葛根芩连汤中黄芩苷的含量测定 [1, 2 ]
2. 1. 1　色谱条件: 色谱柱: Zorbax ODS C18柱
( 250 mm× 4 mm , 5μm) ;流动相: 甲醇 -0. 2%磷酸
·598· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 7期 2003年 7月
收稿日期: 2002-09-23基金项目:国家自然科学基金面上重点项目:葛根芩连汤的配伍规律研究 ( 39970886)
( 48∶ 52) ;流速: 1. 0 mL /min;柱温: 室温 ;检测波
长: 280 nm。色谱图见图 1。
1-葛根芩连汤全方沉淀　 2-黄芩苷对照品
3-葛根芩连汤　　　　　 4-缺黄芩阴性对照
1-deposi ti on of GQD　 2-baicalin reference subs tance
3-GQD　 4-sample wi th out Rad ix Scutellariae
图 1　 HPLC色谱图
Fig. 1　 HPLC chromatograms
2. 1. 2　标准曲线:精密称取黄芩苷对照品约 6 mg ,
置 50 mL容量瓶中 ,流动相溶解 ,定容制成对照品
溶液。 精确吸取对照品溶液 1, 2, 4, 6, 8 mL于 10
m L量瓶中 ,流动相定容。各精密吸取 5μL进样 ,测
定峰面积。以浓度对峰面积进行线性回归 ,得回归方
程: Y= 15. 867 236X- 4. 534 687, r= 0. 999 95。结
果表明黄芩苷在 12. 04～ 96. 32μg /mL与峰面积线
性关系良好。
2. 1. 3　供试品溶液及缺黄芩阴性对照液的制备:按
处方配比取葛根芩连汤各味药 (葛根 15 g ,黄芩 9 g ,
黄连 9 g ,甘草 6 g )饮片 3份及缺黄芩方 3份 ,加水
400 mL,先煎葛根 20 min,余药共煎 30 min,煎两
次 ,合并 , 90℃水浴中定容至 1 000 mL。取 10 mL,
用 70 mL甲醇超声提取 30 min,过滤 ,洗涤 ,用甲醇
定容至 100 mL。 取 5 mL吹干 ,流动相定容至 10
m L,即得。 进样 ,测定浓度 ,计算得供试品中黄芩苷
含量为 0. 751 g /剂 ,RSD= 2. 62% (n= 3)。
2. 1. 4　精密度试验:取黄芩苷对照品溶液、全方供
试品溶液重复进样 5次 ,每次 10μL,黄芩苷峰面积
的 RSD分别为 0. 45%和 1. 28% 。
2. 1. 5　稳定性考察:取黄芩苷对照品溶液和供试品
液各一份 ,在配制后 4, 8, 12, 16, 24 h进样 ,测定黄
芩苷浓度 , RSD分别为 0. 54%和 0. 28%。结果表明
24 h内溶液稳定。
2. 1. 6　加样回收率试验:精密量取葛根芩连汤水煎
液 10 mL ( 90℃ ) ,置 100 mL量瓶中 ,加入黄芩苷
对照品约 6 mg ,按 2. 1. 3项下从“用 70 mL甲醇超
声提取……”起 ,制得加样供试溶液 ,进样 ,测定浓
度 ,计算含量。 求得黄芩苷平均回收率为 100. 8% ,
RSD= 1. 075% (n= 4)。
2. 2　配伍对葛根芩连汤中黄芩苷含量的影响
2. 2. 1　正交设计: 选葛根、黄连、甘草作为 3个因
素 ,选用药和不用药为 2个水平 ,并考虑两两交互作
用。 因素水平表见表 1。
表 1　因素水平表
Table 1　 Factors and levels of orthogonal design
水平 因　　素
A葛根 B黄连 C甘草
1 用药　 用药　 用药　
2 不用药 不用药 不用药
2. 2. 2　试验安排:供试品溶液的制备按 2. 1. 3项下
方法 ,试验安排及测定结果见表 2。
表 2　 L8 ( 27 )正交设计及结果
Table 2　 L8 ( 27 ) orthogonal design and result
试验号 A B A× B C A× C B× C 空白 黄芩苷 / ( g· 剂 - 1)
1 1 1 1 1 1 1 1 0. 748
2 1 1 1 2 2 2 2 0. 754
3 1 2 2 1 1 2 2 0. 943
4 1 2 2 2 2 1 1 0. 893
5 2 1 2 1 2 1 2 0. 790
6 2 1 2 2 1 2 1 0. 908
7 2 2 1 1 2 2 1 1. 032
8 2 2 1 2 1 1 2 1. 123
2. 2. 3　统计分析:采用 SPSS10. 0统计分析软件 ,
结果黄连、葛根对黄芩苷含量的影响差异具有显著
性 (P < 0. 05) ,甘草对其影响的差异无显著性 ( P>
0. 05) ,三者的两两交互作用的差异无显著性。
2. 3　含黄连、黄芩各煎液 pH及沉淀中黄芩苷含量
的测定:药液的煎法按 2. 1. 3项下至“……合并滤
液” ,加热至近沸 ,热过滤 ,滤液放冷 ,离心 ,上清液用
pH计测 pH,沉淀用水洗 3次 , 60℃干燥至恒重。精
确称取约 0. 05 g ,加 70%甲醇 40 mL超声提取 30
min,过滤 ,洗涤 3次 ,定容至 50 mL。取 5 mL吹干 ,
流动相溶解 ,定容至 10 mL,测定 ,结果见表 3。从表
3中可以看出含黄连、黄芩的配伍煎液中产生的沉
淀中含有大量的黄芩苷。 各配伍煎液的 pH值比单
煎液不同程度地降低。
表 3　产生沉淀的各煎液 pH及沉淀中黄芩苷含量
Table 3　 pH of decoctions and content
of bacalin in sedimentation
　　配伍组合 pH 黄芩苷含量 / ( g· 剂 - 1 )
　黄芩 5. 45 0. 014 0
　黄连 3. 73 -
　黄芩+ 黄连 4. 14 0. 610 8
　黄芩+ 黄连+ 葛根 4. 36 0. 131 6
　黄芩+ 黄连+ 甘草 4. 31 0. 179 7
　葛根芩连汤 4. 48 0. 119 5
3　讨论
·599·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 7期 2003年 7月
3. 1　本实验采用正交设计及统计软件对葛根芩连
汤方进行分析 ,结果表明 ,在 0. 05水平下 ,葛根、黄
连对黄芩苷的含量的影响差异具有显著性 ,这说明
葛根、黄连在该汤中使黄芩苷含量降低。甘草对黄芩
苷的含量的影响差异无显著性 ,黄连、葛根、甘草三
者两两交互作用影响差异不显著。
3. 2　黄连使黄芩苷的含量降低 ,有一些文献报道认
为降低的原因系小檗碱与黄芩苷形成复合物所致。
鉴于目前没有人真正获取复合物并确定其结构 ,因
此是否产生了复合物还有待进一步的研究证实。实
验中发现含黄连、黄芩煎液 pH值低于黄芩单煎液。
由于黄芩苷在较低 pH值下由盐的形式转化为酸的
形式导致溶解度降低 ,因此导致黄芩苷含量降低的
原因也有可能是 pH值的降低之故。
3. 3　在本实验色谱条件下没有发现新的色谱峰。
3. 4　实验中发现凡是含黄连、黄芩的配伍煎液在放
冷的过程中均产生大量的沉淀 ,而单煎液在同样的
条件下沉淀很少。对含黄连、黄芩各配伍产生沉淀的
分析表明 ,沉淀中所含的主要成分之一为黄芩苷 (约
占沉淀物的 30%～ 40% ) ,其原因可能是由于黄连
中小檗碱主要以盐酸盐的形式存在 ,煎液为酸性 ,而
黄芩中的黄芩苷也有部分以盐的形式存在 ,在 pH
值较低的情况下转化为黄芩苷而析出。
3. 5　葛根能降低方中黄芩苷的含量 ,其原因可能是
葛根中含有和黄芩苷结构相似的成分 ,与黄芩苷存
在竞争溶剂的作用 ,其机制有待进一步的研究证实。
References:
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st ituent in Phytomed icine (植物药有效成分手册 ) [M ] . Bei-
jing: People s Medical Publishing House, 1986.
蜂毒素的 SDS-PAGE质控方法研究
翟东霞 ,刘　岭 ,张亚妮 ,凌昌全
(第二军医大学附属长海医院 中医科 ,上海　 200433)
摘　要: 目的　建立以 SDS-PAGE进行蜂毒素质量控制的方法。方法　将通过凝胶色谱法从蜜蜂毒中分离纯化所
得到的蜂毒素 ,以 SDS-PAGE法测定其相对分子质量 ,并通过凝胶成像扫描测定蜂毒素纯度。 结果　蜂毒素样品
电泳后在凝胶块上显示为均一条带 ,相对分子质量约为 2 800,含量为 ( 90. 59± 0. 85)% ,与 HPLC测定结果平行。
结论　 SDS-PAGE法作为蜂毒素的质控方法 ,结果准确、可靠、简便。
关键词: 蜂毒素 ; SDS-PAGE;银染 ;凝胶扫描
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 07 0600 03
Study on quality control of melittin by SDS-PAGE method
ZHAI Dong-xia, LIU Ling , ZHANG Ya-ni, LIN G Chang-quan
( Depa rtment o f TCM , Changhai Hospital, Second M ilitary Medical Univ er sity , Shanghai 200433, China )
Abstract: Object　 To establish a SDS-PAGE method on quality cont rol o f meli ttin. Methods　 Meli t-
tin w as ex t racted and purified f rom bee venom by gel chromatog raphy. Puri ty and molecular mass of meli t-
tin were determined by SDS-PAGE. Results　 In the gelatinous boa rd, the sample was a single peptide-
chain wi th a molecular mass of about 2 800 dal ton as revealed by SDS-PAGE. The purity w as ( 90. 59±
0. 85)% , w hich w as in parallel wi th the result tested by HPLC. Conclusion　 SDS-PAGE is accura te, reli-
able and simple fo r the determina tion of meli t tin.
Key words: meli t tin; SDS-PAGE; silv er-dyed; gel image scanning
　　蜜蜂毒是中华蜜蜂 Apis cerana Fabricius或意
大利蜜蜂 A. melli fera Linnaeus尾部蛰刺腺内分泌
的有毒液体 ,含有多种不同化学结构的活性物质。蜂
毒素 ( melit tin)是蜜蜂毒中的主要成分 ,约占蜂毒含
·600· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 7期 2003年 7月
收稿日期: 2002-09-26基金项目:军队“九五”重点课题 ( 98JD-3269) ;上海市科学技术委员会资助项目 ( 02DE19109)作者简介:翟东霞 ( 1977— ) ,女 ,江苏扬州人 ,硕士研究生 ,研究方向:中西医结合。 Tel: ( 021) 25070720　 E-mail: zhaidongxia@ 163. net