全 文 ：表 3　不同树龄忍冬不同采收时间花蕾的绿原酸含量
Table 3　Con ten ts of chlorogen ic ac id of f lower bud of L. j ap on ica in d ifferen t harvest time at d ifferen t tree ages
树龄ö年 不同时间绿原酸含量ö%
05212 05214 05216 05219 05221 06221 06223 06224 06227 06229
3 51296 51356 51788 61094 41382 51774 51514 61042 61118 61214
6 51300 51982 61066 61074 41196 51826 51540 51884 61246 61162
9 41994 51724 51900 51542 61220 51776 61110 61876 51150 61346
15 71328 61176 61392 51774 71002 81058 71024 61732 61840 71180
22 51364 51680 61050 61346 61220 41484 61054 51682 61578 61480
产、高效益, 对种植 20 年以上的忍冬, 要有计划更新
植株。
3　讨论
311　不同树龄忍冬, 萌发新枝能力与开花情况不
同, 其质量变异较大。而每茬花质量相对稳定, 在
GA P 基地建设中, 对不同树龄植株要分类管理, 对
20 年以上忍冬, 要有计划更新植株。本研究对人工
栽培多年生药材的研究与管理具有指导意义。
312　忍冬是多年生植物, 长期受多种因素影响, 年
际间环境因子的时空分布不同, 同样影响药材的质
量, 需进行长期定位观测实验。有关器官建成、内含
成分的积累动态、次生物质代谢规律尚待进一步
研究。
References:
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HPLC 测定龙血竭中对羟基苯甲酸乙酯的含量
张庆云, 崔兰贵, 胡迎庆Ξ
(中国人民武装警察部队医学院, 天津　300162)
摘　要: 目的　建立测定龙血竭中对羟基苯甲酸乙酯含量的方法。方法　以 C18反相键合硅胶为固定相, 乙腈21%
冰醋酸 (31∶69) 为流动相, 检测波长为 257 nm , 用外标法定量。结果　对羟基苯甲酸乙酯在 01206～ 21884 ng 有
良好线性关系, r= 0. 999 8, 平均回收率为 96102% , R SD 为 1187%。结论　本方法是测定龙血竭中对羟基苯甲酸
乙酯含量的快速、简便、准确可靠的定量方法。
关键词: H PL C; 龙血竭; 对羟基苯甲酸乙酯
中图分类号: R 28216　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 02 0197 03
HPLC determ ina tion of ethyl p -hydroxybenzoa te in D ragon’s Blood
ZHAN G Q ing2yun, CU IL an2gu i, HU Y ing2qing
(M edical Co llege of Ch inese Peop le’s A rm ed Po lice Fo rces, T ian jin 300162, Ch ina)
Abstract: Object　To estab lish a H PL C m ethod fo r determ inat ion of ethyl p 2hydroxybenzoate in
D ragon’s B lood. M ethods　U sing C 18 reverse phase co lum n and aceton it rile21% acet ic acid (31∶69) as
mob ile phase, detect ing at 257 nm and quan t ita t ing w ith ex ternal standard m ethod. Results　T he standard
cu rves of ethyl p 2hydroxybenzoate show ed good linearity over the range of 0. 206—2. 884 ng, r= 0. 999 8.
T he average recovery w as 96. 02% and R SD w as 1. 87%. Conclusion　T he m ethod is qu ick and simp le,
and it is accu ra te and reliab le fo r the determ inat ion of ethyl p 2hydroxybenzoate in D ragon’s B lood.
Key words: H PL C; D ragon’s B lood; ethyl p 2hydroxybenzoate
·791·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
收稿日期: 2003205215
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (30070088)
作者简介: 张庆云 (1968—) , 女, 山西绛县人, 硕士, 讲师, 主要从事药物化学的研究。T el: (022) 60578048
　　1999 年国家药品监督管理局颁布的国家标准
中收载了一类新药材“龙血竭”——剑叶龙血树
D racaena coch inch inensis (L ou r. ) S. C. Chen 树脂
的乙醇提取物[1 ]。血竭为名贵中药材之一, 含多种黄
酮类、皂苷类、甾醇类、萜类、　类和其他化合物, 具
有活血散瘀、消炎止痛、收敛止血、生肌敛疮、补血益
气等功效; 药理研究显示其具有抗细菌、真菌和其他
微生物、抗氧化作用, 止血、活血、雌激素样等作
用[2 ]。对羟基苯甲酸乙酯为龙血竭中抗细菌、真菌和
其他微生物的主要成分之一, 在测定龙血竭中主要
有效成分龙血素A、B 和紫檀　后, 首次建立了龙血
竭中对羟基苯甲酸乙酯的含量测定方法。
1　仪器与药品
111　仪器: 日本岛津 UV —1601 紫外分光光度仪;
日本岛津 L C—10A T 高效液相色谱仪, SPD—10A
紫外检测仪, C—R 8A 记录仪, CTO —10A S 柱箱。
Gillson 微量移液器 (法国)。
112　药品: 柬龙牌血竭 (中国医学科学院版纳华胜
制药厂生产, 批号 960515) ; 芒果牌广西血竭 (广西
中医学院药厂生产, 批号 990505) ; 大观牌血竭 (昆
明大观制药厂, 批号 20001017) ; 对羟基苯甲酸乙酯
对照品 (自制, 归一化法含量> 9815% ) ; 乙腈 (色
谱纯, 特级品, 天津市康科得科技有限公司, 批号
010405) , 冰醋酸 (分析纯, 天津市化学试剂一厂)。
2　方法
211　对照品溶液的制备: 精密称取 60 ℃ 干燥恒重
的对羟基苯甲酸乙酯 1013 m g, 置 100 mL 容量瓶
中, 甲醇超声溶解定容, 摇匀, 作为对照品储备溶液
(浓度为 01103 m gömL )。
212　供试品溶液的制备: 精密称取 10 m g 血竭样
品于 1 mL 量瓶中, 甲醇超声溶解定容, 在以羧甲基
纤维素为黏合剂的硅胶 GF254薄层板 (10 cm ×10
cm ) 上, 于左边距 1 cm , 底边距、右边距 2 cm 处呈
条状点样, 于右边距 1 cm 处点 5 ΛL 对照品溶液,
以石油醚2醋酸乙酯 (5∶1) 为展开剂展开, 置紫外
灯 (254 nm ) 下观察荧光, 并与对照品斑点对照, 标
记供试品与对照品相应位置的色斑。按标记刮取色
斑, 于 5 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 用 015 Λm 滤膜
滤过, 作为供试品溶液。
213　色谱条件: 色谱柱: Phenom enex C18 (250 mm ×
416mm , 5 Λm ) , 北京先明乐施科技发展有限公司;
流动相: 乙腈21% 冰醋酸 (31∶69) ; 流速为 1 mL ö
m in; 检测波长为 257 nm ; 灵敏度: 0102AU FS; 柱
温: 40 ℃; 上述色谱条件下, 对羟基苯甲酸乙酯的保
留时间为 16 m in 左右; 柱效以对羟基苯甲酸乙酯计
算, 理论塔板数为 4 100。
3　结果
311　线性关系: 将对羟基苯甲酸乙酯对照品储备溶
液分别配置成浓度为 01010 3, 01020 6, 01041 2,
01061 8, 01103 0 和 01144 2 ΛgömL 的对照品溶液,
经微孔滤膜 (0145 Λm ) 滤过, 在上述色谱条件下,
进样 20 ΛL , 记录色谱图, 进样量 (X ) 与峰面积
(Y ) 的回归方程为: Y = 20 143 X + 3 02816; r =
01999 8; 线性范围为 01206～ 21884 ng。
312　精密度试验: 精密吸取同一对照品溶液, 重复
进样 5 次, 每次 20 ΛL , 以对羟基苯甲酸乙酯的峰面
积计, R SD 为 1134%。
313 　重复性试验:“柬龙”牌 (批号 960515) 取 5
份, 分别按 212 项下操作测定, 结果对羟基苯甲酸
乙酯含量的 R SD 为 1183%。
314　稳定性试验: 供试品溶液每隔 24 h 测 1 次, 共
测 4 次样品稳定, 对羟基苯甲酸乙酯峰面积的 R SD
为 115%。
315　加样回收率试验: 取已测含量的“大观”牌血竭
5 m g, 精密加入浓度为 01020 6 ΛgömL 的对羟基苯
甲酸乙酯对照品溶液 1 mL , 按样品测定方法测定,
对羟基苯甲酸乙酯回收率在 94182%～ 98198% , 平
均回收率为 96102% , R SD 为 1187% (n= 5)。
316　样品测定: 精密吸取经微孔滤膜 (0145 Λm )
滤过后的样品溶液 20 ΛL , 在上述色谱条件下进行
分析, 以外标法计算样品中对羟基苯甲酸乙酯含量,
结果见表 1。
表 1　样品中对羟基苯甲酸乙酯的含量测定结果 (n= 3)
Table 1　D eterm ination of ethyl p -hydroxybenzoate
in samples (n= 3)
样品来源及批号 对羟基苯甲酸乙酯含量ö(ng·m g- 1) RSD ö%
“柬龙”牌 (960515) 3192 1134
“芒果”牌 (990505) 4153 1130
“大观”牌 (20001017) 5115 1144
4　讨论
　　本实验首次建立龙血竭中对羟基苯甲酸乙酯的
含量测定方法 (图 12A , B ) , 本方法快速、简便, 具良
好的精密度、稳定性和重复性。
对羟基苯甲酸乙酯为龙血竭中具有抗菌活性作
用的化合物之一, 对龙血竭化学成分含量测定[3, 4 ]的
研究中得知, 龙血竭中的化学成分主要为黄酮类化
合物, 大多为苷元, 极性小, 在对羟基苯甲酸乙酯的
正相薄层色谱条件中, 对羟基苯甲酸乙酯的 R f 值
大于龙血素A、B , 并有良好的分离; 其反相薄层色
·891· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
A 2对照品　B2样品　C2“大观”牌血竭　12对羟基苯甲酸乙酯　22龙血素A 　32龙血素B　42紫檀　
A 2reference standards　B2samp le　C2“D aguan”D ragon’s B lood　12ethyl2p 2hydroxybenzoate　22lou reirin A 　32lou reirin B　42p tero stillben
图 1　HPLC 图谱
F ig. 1　HPLC chromatogram s
谱条件中对羟基苯甲酸乙酯 R f 值也大于龙血素
A、B , 但与黄酮类化合物相近不易分离; 若使用本实
验中 H PL C 条件测定未经前处理的龙血竭样品进
行时, 则测定对羟基苯甲酸乙酯时所有样品峰全部
检出约需 90 m in (图 12C) , 分析时间过长, 不适合
样品快速分析, 因此, 在进行 H PL C 法分析前, 对样
品进行薄层色谱分离的预处理, 既可使对羟基苯甲
酸乙酯与黄酮类和紫檀　化合物分离, 又可以减少
样品测定时间, 同时也减少各种杂质对色谱柱污染,
延长色谱柱的使用寿命。
References:
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药品监督管理局标准) 1W S32082 (Z2016) 299 (Z) 1
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杜仲原生皮与再生皮次生代谢物含量分析
董娟娥1, 赵德义1, 张康健1, 王　邈2Ξ
(11 西北农林科技大学林学院 陕西省经济植物资源开发利用重点实验室, 陕西 杨凌　712100;
21 咸阳市秦都区农林局, 陕西 咸阳　712000)
摘　要: 目的　探讨杜仲原生皮与再生皮的次生代谢物含量的差异性。方法　利用游标卡尺测量 17 龄杜仲树的原
生皮与再生皮的厚度, 采用分光光度法测定桃叶珊瑚苷和总黄酮含量, 采用高效液相色谱法测定绿原酸含量。结果
杜仲原生皮和再生皮的内皮厚度分别为 11646 和 11631 mm ; 原生皮中绿原酸、桃叶珊瑚苷和总黄酮的含量分别为
01402% , 01781% 和 01484% , 再生皮中绿原酸、桃叶珊瑚苷和总黄酮的含量分别为 01436% , 01849% 和 01516%。
结论　原生皮与再生皮的厚度基本相同; 原生皮与再生皮的次生代谢物含量无显著差异。
关键词: 杜仲; 原生皮; 再生皮; 次生代谢物含量
中图分类号: R 28216　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 02 0199 03
Ana lysis of secondary m etabol ite con ten ts in or ig ina l and reborn bark of E ucomm ia u lm oies
DON G Juan2e1, ZHAO D e2yi1, ZHAN G Kang2jian1, W AN G M iao 2
(11T he Key L abo rato ry of Exp lo rat ion and U tilizat ion of Econom ic P lan t R esources in Shaanx i P rovince, N o rth2w est
Sci2T ech U niversity of A gricu ltu re and Fo restry, Yangling 712100, Ch ina; 2. T he A gricu ltu re
and Fo restry Bureau of Q indu D istrict of X ianyang, X ianyang 712000, Ch ina)
Abstract: Object　To invest iga te the con ten t d ifferences of secondary m etabo lites betw een E ucom m ia
u lm oid es O liver o rig inal and rebo rn bark s. M ethods　To m easu re the th ickness of 172years bark by vern ier
ca liper, determ ine aucub in and flavono ids by spectropho tom eter, and ch lo rogen ic acid by H PL C. Results　
·991·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
Ξ 收稿日期: 2003204216
基金项目: 陕西省重大科技项目 97K042G2
作者简介: 董娟娥 (1968—) , 女, 陕西人, 讲师, 在读博士, 主要从事天然产物提取的研究和教学工作。T el: (029) 7082592