全 文 ：的 ED50分别为 13. 99 ( 7. 60～ 19. 27) mg /kg , 15. 53
( 7. 30～ 20. 08) mg /kg 及 44. 05 ( 25. 32～ 76. 65)
mg /kg。结果见表 2。
4　讨论
表 2　夏天无胶囊剂 、口服液及片剂对小鼠扭体反应的影响 (x± s, n= 10)
Table 2　 Ef fects of Xiatianwu capsule, oral liquid and tablet on wr ithing body response in mice ( x± s , n= 10)
组　别 剂　量
/ (mg· kg- 1)
给药后扭体次数 /(次· 10 min- 1)
30～ 40 min 抑制率 /% 40～ 50 min 抑制率 /%
对照 - 　 　 22. 90± 6. 77 - 　 　 16. 20± 2. 66 -
夏天无片剂 63. 68 8. 50± 3. 84* * 62. 88 6. 20± 3. 19* * 61. 73
31. 84 13. 70± 6. 17* * 40. 17 10. 20± 5. 60* * 37. 04
15. 92 19. 53± 6. 02 14. 72 14. 65± 5. 82 9. 57
夏天无胶囊剂 24. 20 6. 30± 3. 47* * 72. 49 5. 20± 3. 01* * 67. 90
12. 10 12. 90± 4. 46* * 43. 67 10. 20± 4. 21* * 37. 04
6. 05 18. 70± 6. 48 18. 34 13. 20± 6. 02 18. 52
夏天无口服液 24. 20 7. 40± 3. 47* * 67. 69 5. 40± 2. 46* * 66. 67
12. 10 13. 80± 5. 03* * 39. 74 11. 60± 5. 58* * 28. 40
6. 05 19. 10± 5. 63 16. 59 15. 20± 4. 00 6. 17
　　　与对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
　　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01 vs cont rol group
　　实验结果表明: 夏天无胶囊剂及口服液在热板
法及扭体法两种疼痛模型上均呈现出与夏天无片剂
相似的镇痛作用 ,镇痛作用于给药后 30～ 60 min达
高峰 ,维持 120 min;且夏天无胶囊剂及口服液在两
种疼痛模型上测得的 ED50均明显小于夏天无片剂 ,
说明夏天无胶囊剂及口服液的镇痛作用均强于夏天
无片剂。这可能是夏天无胶囊剂及口服液与夏天无
片剂的制备方法、工艺的差异而引起它们的生物利
用度不同所致。
References:
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补肾方对去卵巢大鼠学习记忆的调整作用
王悦芬 1 ,王彦刚 2 ,葛喜珍 1 ,李　恩 1
( 1. 河北医科大学中西医结合研究所 ,河北 石家庄　 050017; 2. 河北医科大学中医院 ,河北 石家庄　 050011)
摘　要:目的　探讨补肾方对去卵巢大鼠学习记忆的调整作用 ,为中医 “肾”与“智”的关系及补肾治疗阿尔茨海默
病 ( Alzheimer s disea se , AD)提供实验基础。方法　将雌性 SD大鼠 40只 ,随机分成卵巢切除组、假手术组、卵巢
切除+ 补肾方治疗高、低剂量组。治疗 12周 ,测定各组动物血清雌二醇 ( E2 )、血清钙含量 ; Y-电迷宫检测学习记忆
能力 ;测定海马组织乙酰胆碱 ( Ach)含量、乙酰胆碱酯酶 ( AchE)活性 ; HE染色观察海马组织形态学变化。 结果
去卵巢 18周 ,大鼠学习记忆力明显下降 ;海马组织 Ach含量下降 ;海马锥体细胞层、分子层、多形细胞层细胞浓
缩 ,出现大小不同空泡 ,锥体细胞顶树突消失 ,细胞排列紊乱 ,嗜银染色可见神经纤维增粗 ,大脑皮质颞叶出现老年
斑。 补肾方能提高血清 E2、血清钙水平 (P < 0. 05) ,明显提高学习记忆成绩 ,并能提高海马组织 Ach含量及 Ach E
活性 (P < 0. 05) ,对海马神经元的变性具有明显的改善作用。 结论　补肾方对雌激素缺乏所致的学习记忆能力下
降具有明显的改善作用 ,其机制可能是通过提高血清 E2水平 ,调节 Ca , P代谢 ,从而提高中枢胆碱能神经系统功能
实现的。
关键词: 补肾方 ; 卵巢切除 ; 阿尔茨海默病
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 12 1119 04
·1119·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-03-21作者简介:王悦芬 ( 1968— ) ,女 ,河北省人 ,河北医科大学中西医结合研究所在读博士生 ,专业方向为老年退行性疾病。
Tel: ( 0311) 6265639　 E-mail: WYF1222@ eyou. com
Regulation of Tonifying Kidney Recipe on memory of ovariectomied rats
W ANG Yue-fen
1 , WANG Yan-gang
2 , GE Xi-zhen
1 , L I En
1
( 1. Institute o f Integ ra ted T raditional and Weste rn Medicine, Hebei Medical Univ e rsity , Shijiazhuang 050017, China;
2. Hospital o f T raditiona l Chinese Medicine, Hebei Medical Unive rsity , Shijia zhuang 050011, China)
Key words: to nifying kidney recipe ( TKR) ; ov ariectomy; Alzheimer s disease ( AD)
　　阿尔茨海默病 ( Alzheimer s disease, AD)是一
种随年龄增长发生的由于神经系统进行性退变引起
的痴呆性疾病 ,在 AD的预防和治疗中 ,目前尚无
疗效明确的药物 ,因此筛选有效的中药复方延缓神
经系统退行性病变 ,在预防和治疗 AD中具有重要
意义。资料表明 [1 ] ,女性 AD患病率为男性的 1. 5～
3倍 ,排除男女年龄构成不同之后 ,女性患病率仍高
于男性。绝经后特别是有心肌梗死、髋部骨折等病史
的妇女 , AD发病率比无前述病史者高 ,提示雌激素
缺乏在女性 AD发生发展中具有重要意义。中医学
认为“肾为先天之本 ,主骨生髓、主藏精和生殖”、“脑
为髓之海” ,绝经后妇女出现的骨质疏松、 AD等疾
病的发生往往与肾虚有关 ,因此治疗上多采用补肾
填精之法。本实验通过切除大鼠双侧卵巢造成雌激素
缺乏 ,观察雌激素迅速丢失后学习记忆能力的变化及
补肾方对学习记忆的调整作用 ,为中医“肾主智 ,肾虚
则智不足”与补肾治疗 AD提供理论基础。
1　材料
1. 1　动物: 选用 8月龄 SD雌性大鼠 ,体重 320～
380 g ,由河北省实验动物中心提供。
1. 2　药物: 补肾方:熟地、淫羊藿、肉苁蓉、川芎等 ,
由石家庄地区药材公司提供 ,经本校药用植物教研
室鉴定为正品 ,水煎取汁。
2　方法
2. 1　动物模型的建立和分组: 将 40只 SD雌性大
鼠随机分为假手术组 ( Sham 组 )、卵巢切除组
( OVX组 )、卵巢切除+ 补肾方低剂量治疗组 ( T1
组 )和卵巢切除+ 补肾方高剂量组 ( T2组 ) ,每组
10只。 OVX组、 T1组、 T2组行背部切口切除双侧
卵巢 , Sham组切除同样大小的脂肪。 6周后 T1, T2
组每日 ig中药 1次 ,剂量为 6. 3, 32 g (生药 ) /kg;
OVX组和 Sham组 ig等体积自来水。 治疗 12周
后 ,将全部大鼠股动脉放血处死 ,分离血清 ,分装 , -
20℃ 放置备用。于 4℃迅速剥离大脑 ,左半侧脑组
织置于 4% 的多聚甲醛中 ;迅速剥离右侧海马组
织 ,并置于 - 70℃ 冰箱保存备用。
2. 2　各项指标的测定: 雌二醇 ( E2 )的测定采用放
射免疫法 ,试剂盒由中国科学院核医学研究所提供。
血清钙的测定采用甲基麝香草酚蓝比色法 ,试剂盒
由石家庄试剂公司提供。 Y-迷路学习记忆能力检
测 [2 ]:实验采用 Y-电迷路箱 (江苏张家港生物医学
仪器厂产品 )在暗室中进行。训练开始时 ,给予灯光
信号使之适应 60 s,然后操纵电击控制器 ,予以 90
V, 10次 / s的电刺激 ,以大鼠直接逃避至安全区为
正确反应 ,训练 15次 ,记录正确与错误次数及达正
确反应时所需的时间。中枢胆碱能功能检测: 海马组
织乙酰胆碱酯酶 ( Ach E) 活性和乙酰胆碱 ( Ach )
含量的测定 ,采用改良的微量羟胺比色法 [3 ] ;蛋白测
定采用考马斯亮蓝法。脑组织病理分别作 HE常规
染色和嗜银 (改良的 Bielschow-sky法 )染色 ,光镜
下观察皮层及海马各区的病理变化。
2. 3　统计学方法: 所有数据均以 x± s表示 ,组间比
较用 SPSS统计软件进行 t检验。
3　结果
3. 1　动物的一般表现: 实验中 OVX组动物体重明
显增加 ,毛发干枯 ; T1, T2组和 Sham组状况均较
好 ,毛发光泽 ,体重增加不明显。
3. 2　血清钙、血清 E2的变化: 与 Sham 组比较 ,
OVX组血清 E2明显降低 (P < 0. 05) ,血清钙差异
不显著 ( P> 0. 05) ;与 OVX组比较 , T1组血清
E2、血清钙均明显升高 ( P < 0. 05) , T2组血清 E2明
显升高 ( P < 0. 05) ,血清钙差异不显著 ,见表 1。
表 1　治疗 12周后血清钙、血清 E2的变化 ( x± s , n= 10)
Table 1　 Changes of Ca2+ and E2 level in serum
after 12-week treatment (x± s , n= 10)
组　别 剂量 /( g· kg- 1 ) 血清钙 /(μmo l· mL- 1 ) 血清 E2 /( pg· mL- 1 )
Sh am - 　　 2. 456± 0. 467 　　 23. 842± 8. 407
OVX - 2. 071± 0. 503 10. 723± 6. 777*
T1 6. 3 2. 504± 0. 283△ 20. 173± 9. 492△
T2 32. 0 2. 364± 0. 205 23. 171± 7. 170△
　　与 Sham组比较: * P < 0. 05; 与 OVX组比较: △ P < 0. 05
　　* P < 0. 05 vs Sh am group; △ P < 0. 05 vs OVX group
3. 3　学习记忆能力的变化:与 Sham组比较 , OVX
组 Y-电迷宫测试逃避正确率明显降低 ( P < 0. 01) ,
逃避潜伏期差异不显著 ;与 OVX组比较 , T1组 Y-
迷路测试逃避正确率明显提高 ( P < 0. 01) ,逃避潜
伏期明显缩短 ( P < 0. 01) ; T2组 Y-迷路测试逃避
正确率明显提高 (P < 0. 05) ,逃避潜伏期差异不显
·1120· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
著 (P> 0. 05) ,见表 2。
表 2　治疗 12周后各组大鼠学习记忆能力
的变化 ( x± s , n= 10)
Table 2　 Changes of learning and memory ability in rats
af ter 12-week treatment ( x± s , n= 10)
组　别 剂量 /( g· kg- 1 )逃避正确率 /% 逃避潜伏期 /s
Sham 　 - 　 65. 00± 13. 30 　　 8. 91± 8. 71
OVX 　 - 45. 33± 15. 42* * 8. 73± 7. 91
T1 　 6. 3 63. 08± 15. 53△△ 6. 92± 4. 35△△
T2 32. 0 59. 55± 11. 78△ 9. 02± 5. 48
　　与 Sh am组比较: * * P < 0. 01;
　　与 OVX组比较: △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01
　　* * P < 0. 01 vs Sham group;
　　△ P < 0. 05　△△ P < 0. 01 vs OVX group
3. 4　中枢胆碱能系统的变化: 与 Sham组比较 ,
OVX组海马组织 Ach含量明显降低 (P < 0. 01) ;
海马组织 AchE活性差异不显著 ( P> 0. 05)。 与
OVX组比较 , T1组海马组织 Ach含量及 AchE酶
活性明显升高 (P < 0. 05) ; T2组海马组织 AchE酶
活性明显升高 ( P < 0. 05) , Ach含量有升高的趋势
(P> 0. 05) ,见表 3。
表 3　治疗 12周后各组大鼠海马组织 Ach含量、
AchE酶活性的变化 (x± s, n= 10)
Table 3　 Changes of Ach and AchE in rat hippocampal
af ter 12-week treatment ( x± s , n= 10)
组　别 Ach /(μmol· mg- 1) AchE / (μmol· min- 1· mg- 1)
Sham 　　 224. 18± 39. 72 　　　 0. 712± 0. 436
OVX 166. 56± 62. 48* * 0. 742± 0. 302
T1 205. 80± 58. 01△ 1. 084± 0. 084△△
T2 181. 65± 48. 72 0. 923± 0. 474△
　　与 Sh am组比较: * * P < 0. 01;
　　与 OVX组比较: △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01
　　* * P < 0. 01 vs Sham group;
　　△ P < 0. 05　△△ P < 0. 01 vs OVX group
3. 5　脑组织病理形态改变: Sham组海马锥体细胞
排列整齐 ,海马组织层次清楚 ,胞膜核膜完整 ,顶树
突突起直、粗而长 ; OVX组海马锥体细胞层、分子
层、多形细胞层细胞浓缩 ,并且出现大小不同空泡 ,
锥体细胞顶树突消失 ,细胞排列紊乱 ,嗜银染色可见
神经纤维增粗 ,大脑皮质颞叶出现老年斑。与 OVX
组相比 , T1, T2组海马组织锥体细胞、颗粒细胞核
仁清楚可见 ,胞膜、核膜完整 ,细胞排列比较整齐 ,颗
粒变性细胞减少但仍有空泡 ,嗜银染色神经纤维增
粗现象得到改善。
4　讨论
　　雌激素水平与老年妇女认知能力变化有关 , AD
是一种由于神经系统进行性退变引起的痴呆性疾
病 ,通常以进行性记忆丧失为首发症状。 AD妇女患
者血浆中雌激素水平较同龄妇女低 ,手术绝经常伴
有亚临床认知功能障碍等 [4 ]。 雌激素对胆碱能系统
具有重要的作用 [ 1, 5]: AD患者 Ach和 AchE活性明
显降低 ,表明胆碱能神经系统处于低代谢状态。而神
经生长因子 ( NGF)是对中枢胆碱能神经元具有生
长分化和形态分化作用的生长因子 ,在大鼠和人的
海马等神经细胞同时具有 NGF受体 ( NGFR) 和
雌激素受体 ( ER) , NGFR受雌激素调节 ,而且 ER
反应元件在 NGFR基因的启动子区域。因此去卵巢
后 ,由于雌激素水平下降 ,反馈性导致 ER表达下
降 , NGFR表达下调 ,影响胆碱能神经系统功能 ,海
马组织 Ach含量和 AchE活性明显降低 ,学习记忆
力明显下降。
本实验大鼠去卵巢 18周 ,模型组大鼠学习记
忆力明显下降 ,海马组织 Ach含量明显降低 ,海马
神经元出现颗粒空泡变性 ,嗜银染色可见神经纤维
增粗 ,大脑皮质颞叶出现老年斑 ,这些表现与 AD
患者记忆力下降、胆碱能神经功能低下及脑组织特
征性病理改变 (老年斑、颗粒空泡性、神经纤维缠
结 )有许多相似之处。本实验为去除双侧卵巢复制
AD动物模型提供参考 ,为进一步深入研究雌激素
缺乏学说在 AD中的作用及预防 AD提供了依据。
“肾主智、肾虚则智不足” (《医学心悟》 ) ,说明脑
髓也有赖于肾精不断化生和充养 ,如果肾中精气不
足 ,气血两亏则脑失滋养而枯萎 ,萎则神机失用 ,愚
笨呆痴 ,遇事遗忘 ,出现思维缓慢、兴趣减退、易疲劳
等 AD症状。 因此对于老年性疾病 ,多采用补肾壮
阳、填补精血疗法。补肾方是在此疗法指导下研制的
复方。现代药理研究表明:熟地具有性激素样作用 ,
能降低血清胆固醇和甘油三酯 ,并能改善脑灌流量 ,
降低血清中过氧化脂质含量 ,具有清除自由基作用 ;
淫羊藿具有提高动物耐缺氧能力和降低血清胆固醇
和甘油三酯的作用 ;肉苁蓉含有雌二醇类似物 ;川芎
中川芎嗪具有扩张血管、改善脑灌注的作用 , H-川
芎嗪能透过血脑屏障 ,并具有钙离子通道阻滞作用 ,
可能为一种新的钙离子拮抗药 ,并具有清除自由基
的作用。 本研究表明补肾方治疗 12周能明显改善
卵巢切除大鼠体内的代谢紊乱状态 ,提高血清 E2水
平 ,增强胆碱能神经元活性 ,使海马组织 Ach含量
及 AchE活性明显提高 ,并延缓神经细胞退行性变 ,
从而提高学习记忆能力及反应的灵敏性。
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甘草苷对四氯化碳肝脏毒性的保护作用
丁选胜 ,戴德哉
(中国药科大学 药理研究室 ,江苏 南京　 210009)
　　离体肝灌流技术最初由英国生理学家 Trow ell
于 1942年创立 , 1951年 Miller等人改进了灌流方
法 ,首次以此技术进行了血浆蛋白质合成的研究。近
年来 ,离体肝灌流技术得到普遍使用 ,被广泛用于药
理毒理学研究 ,适用于研究药物或化学物质引起的
肝毒性 [1 ]。本实验采用离体肝灌流技术 ,通过灌流一
定量的 CCl4造成肝脏毒性 ,同时给予一定量的甘草
苷 ,观察甘草苷对肝脏毒性的保护作用 ,据此分析甘
草解毒的物质基础及机制。
1　材料
1. 1　药品与试剂:甘草苷由本实验室分离纯化制
得 ,经 UV , IR, 1H-NMR, 13 C-NMR等结构测定与
文献报道甘草苷一致 , HPLC检测为单一成分 ,纯度
达到 98% 以上。 RPM I Medium 1640, GIBCO BRL
( Life Techno logies, Inc. Grand Island N. Y.
14072 U. S. A)。 AL T /GPT测试盒 ,南京建成生物
工程研究所 ,批号 20000908。 AST /GO T测试盒 ,南
京建成生物工程研究所 ,批号 20000909。
1. 2　仪器: SHZ— B水浴恒温振荡器 ,上海跃进医疗
器械厂。 BT03— 200恒流泵 ,河北保定兰格恒流泵有
限公司。 754型分光光度计 ,上海第三分析仪器厂。
1. 3　动物: SD大鼠 ,体重 200～ 250 g ,雌雄各半 ,
由南京医科大学实验动物中心提供。
2　方法
2. 1　离体大鼠肝灌流模型制备 [1 ]: 取健康大鼠 ,体
重 200～ 250 g,雌雄兼用 ,用 3% 戊巴比妥钠 0. 3
mL /100 g ip麻醉 ,将麻醉大鼠仰置手术板上 ,沿腹
部正中作工字型切口 ,翻开腹部两侧皮肤 ,将肠管推
向左侧 ,充分暴露肝门区域。用玻璃分离针分离出门
静脉 ,同时分离出肾静脉。 在离肝门及门下约 5～ 6
mm处分别用 2根线穿过门静脉底部 ,各扣一个松
节 ,用 1根线穿过肾静脉并从肾静脉注入 6% 肝素
钠 0. 1 mL /mg ,稍后关闭灌流泵 ,将离肝门远端下
约 6 mm处的线结扎 ,系紧门静脉 ,并同时结扎肾静
脉的线。 迅速在近端用手术剪剪一斜形切口 (防止
剪断 ) ,立即插入口径约 0. 5 mm塑胶管 ,深度约
3～ 4 mm ,经检查插管确已入门静脉 (塑胶管内有
血液进入 ) ,调节深浅合适后即行节扎 ,开动蠕动泵
剪断腹部下静脉 ,肉眼观察肝脏内血液基本冲洗将
尽时随后分离肝脏 ,以正常位置置肝脏于水浴恒温
37℃ 灌流杯 (防止门静脉扭曲 )。
2. 2　离体肝灌流:先以经过纯度> 99. 5% 氧气饱
和、水浴恒温 37℃ 的 Krebs-Henseleit等渗缓冲
液 ,非循环性的灌流冲洗肝脏中的血液。 流速约 2
mL /( g· min) ,灌至肝脏颜色呈土黄色 ,稳定 5 min
后 ,将塑胶管插入经过纯度> 99. 5% 氧气饱和、水
浴恒温 37℃ 的 RPM I-1640缓冲灌流液中 ,看到从
肝脏中流出液呈红色 ( 1640灌流液呈红色 ) 时 ,将
肝脏从盛 Krebs-Henselei t的杯中移至盛 1640灌
流液的杯中 ,循环性前向性的灌流 (顺流 ) ,流速约
2 mL /( g· min)。不同剂量的药物用严密消毒的注
射器缓慢注入盛 1640灌流液的杯中 ,分别在给药
·1122· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-04-15基金项目:江苏省教育厅自然科学基金资助课题 ( K JB360003)作者简介:丁选胜 ( 1962— ) ,男 ,安徽省广德人 ,博士 ,现在中国药科大学药学博士后流动站从事博士后研究工作。
Tel: ( 025) 3271270　 E-mail: dxs0162@ sina. com