全 文 ：复方丹参片对阿尔茨海默病大鼠脑内氨基酸类神经递质含量的影响
覃仁安1 ,罗佳波2 ,陈 　矛3 ,黄竹英3 ,王 　虹3 ,杨东升3 ,陈松光3 Ξ
(11 第一军医大学 博士后科研流动站、广州医药集团博士后科研工作站、广州白云山中药厂研发中心 ,广东 广州 　510515 ;
21 第一军医大学 中医系 ,广东 广州 　510515 ; 31 广州白云山中药厂 ,广东 广州 　510515)
摘 　要 :目的 　研究复方丹参片对实验性阿尔茨海默病 (AD) 大鼠脑内氨基酸类神经递质含量的影响 ,揭示其防
治 AD 的作用机制。方法 　采用 HPLC 方法检测实验性 AD 大鼠脑内天冬氨酸 (Asp) 、谷氨酸 ( Glu) 、甘氨酸
( Gly) 和γ2氨基丁酸 ( GABA) 等氨基酸类神经递质的含量。结果 　复方丹参片能明显降低实验性 AD 大鼠脑内
兴奋性氨基酸 Glu 的含量 ,升高抑制性氨基酸 Gly 和 GABA 的含量。结论 　复方丹参片降低兴奋性氨基酸含量 ,
以对抗兴奋性氨基酸的毒性 ,这可能是其防治 AD 的机制之一。
关键词 :复方丹参片 ; 阿尔茨海默病 ; 氨基酸类神经递质 ; 高效液相色谱
中图分类号 :R28611 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2004) 08 0905 03
Effect of Compound Danshen Tablets on amino acid neurotransmitters
in brain of Alzheimer’s disease rats
Q IN Ren2an1 , L UO Jia2bo2 , CHEN Mao3 , HUAN G Zhu2ying3 , WAN G Hong3 ,
YAN G Dong2sheng3 , CHEN Song2guang3
(11Postdoctoral Programme , First Military Medical University , Postdoctoral Programme Station , Guangzhou Pharma2
ceutical Group Co. , Ltd. , Research and Development Center of Materia Medica , Guangzhou Bai YunShan
Factory of Traditional Chinese Medicine , Guangzhou 510515 , China ; 2. Department of Traditional
Chinese Medicine , First Military Medical University , Guangzhou 510515 , China ; 3. Guangzhou
Bai YunShan Factory of Traditional Chinese Medicine , Guangzhou 510515 , China)
Abstract : Object 　To study the effect of Compound Danshen Tablets (CDST) on the contents of amino
acid neurotransmitters in brain of experimental Alzheimer’s disease (AD) rats to reveal the mechanism of CDST
in the prevention and treatment to AD. Methods 　Contents of amino acid neurotransmitters Asp , Glu , Gly ,
GABA in AD rat brain were determined by HPLC. Results 　CDST significantly decreased the excitatory Glu
content , and increased the inhibitory Gly and GABA contents. Conclusion 　CDST could lower the toxicity of
excitatory amino acid by decreasing its contents , which may be one of the mechanisms of CDST in prevention
and treatment to AD.
Key words : Compound Danshen Tablets ( CDST) ; Alzheimer’s disease ; amino acid neurotransmitters ;
HPLC
　　随着人类寿命的普遍延长 ,老年痴呆发病率也
在大大增加 ,已成为严重威胁老年人健康的疾病之
一。老年痴呆主要包括阿尔茨海默病 (Alzheimer’s
disease , AD) 和血管性痴呆 ( Vascular dementia ,
VD) 。AD 又名早老性痴呆 ,是一种多源性因素引
起的原发性大脑神经退行性病变 ,多伴有乙酰胆碱
酯酶 (AchE) 活性降低、氨基酸类神经递质含量改
变等 ,目前仍无良好的防治措施。复方丹参片由丹
参、三七、冰片 3 味中药组成 ,前期研究中发现复方
丹参片对实验性 AD 大鼠的空间认知障碍有明显改
善作用。本实验采用高效液相色谱法检测 AD 大鼠
大脑额叶皮层兴奋性氨基酸与抑制性氨基酸含量 ,
探讨复方丹参片改善脑功能的中枢机制。
1 　材料
111 　药品与试剂 :石杉碱甲片 ,上海医科大学红旗
制药厂生产 ,批号 020603 ;复方丹参片 ,广州白云山
中药厂生产 ,批号 030435 (每片含丹参酮 ⅡA 0144
mg、丹参素 1193 mg) ,实验前粉碎 ,过 80 目筛 ,溶
于新鲜蒸馏水中 ,配成 613 % 的水溶液贮存于 4 ℃
冰箱中备用 ; D2半乳糖 ,Amrsco 公司分装 ;鹅膏蕈
氨酸 (ibotenic acid , IBO) , Sigma 公司产品 ;氨基酸
[天冬氨酸 (Asp) 、谷氨酸 ( Glu) 、甘氨酸 ( Gly) 、γ2
·509·中草药 　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 35 卷第 8 期 2004 年 8 月
Ξ 收稿日期 :2003211213
基金项目 :广州市企业博士后基金资助项目 (200202)
作者简介 :覃仁安 (1964 —) ,男 ,博士 ,副主任中药师 ,注册执业中药师 ,主要研究方向为中药药理与中药制剂工艺。
Tel : (020) 87200301 　Fax : (020) 87200876 　E2mail : QRA @813zy. com
氨基丁酸 ( GABA) ] 对照品 ,进口分装 ;乙腈 (色谱
醇) ,美国 Tedia 公司 ;无水乙酸钠、甲醇、冰醋酸等
试剂均为国产分析纯 ;检测用水为双蒸水。
112 　动物 : SD 大鼠 ,体重 300～380 g ,雌雄各半 ,
SPF 级 ,由第一军医大学实验动物中心提供 ,动物
合格证号 :粤检证字第 2002A040 号。
113 　仪器 : SN —2 型大鼠立体定位仪 ,日本产 ;
307 —6 型牙科钻车 ,上海医用分析仪器厂 ;高速冷
冻离心机 ,Beckman 公司 ;超声波细胞破碎机 ,宁波
新芝生物科技有限公司 ; Agilent 1100 系列高效液
相色谱仪 ,Agilent 自动进样品 ,Agilent DAD 检测
器 ;依利特 Hypersil C18色谱柱 (416 mm ×250 mm ,
10μm) 。
2 　方法
211 　造模及给药 :取 SD 大鼠 60 只 ,其中 10 只作
为假手术对照组 ,其余 52 只大鼠 ip D2半乳糖 48
mg/ (kg·d - 1) ,连续 6 周 ,第 7 周开始以 IBO 损毁
双侧 Meynert 基底核 ,具体操作见文献方法[1 ,2 ] ;假
手术对照组按同样操作 ,予以等量生理盐水。术后
缝合皮肤 ,3 d 内 im 青霉素抗感染。将假手术组以
外的存活动物随机分为 4 组 :模型对照组 ,石杉碱
甲组 ,复方丹参片大、小剂量 (生药 01630、01315 g/
kg ,其中大剂量相当于成人临床等效剂量) 组 ,各组
连续 ig 给药 2 个月。实验结束后 ,各组动物同期断
头处死 ,在冰台上快速取出左侧额叶皮层 ,置于低温
冰箱 ( - 80 ℃) 待测。
212 　色谱条件 :流动相由 A (011 mol/ L 乙酸钠 ,
p H 614) 及 B (乙腈) 组成 ,体积流量 110 mL/ min ,
采用梯度洗脱 ,0 时为 A 90 %2B 10 % ,经 25 min 至
A 40 %2B 60 % ,柱温为室温 ,检测波长 360 nm。
213 　对照品溶液的制备 :精密称取氨基酸对照品适
量 ,分别置棕色瓶中 ,用双蒸水配成 1 mg/ mL 的对
照品溶液 ,4 ℃冰箱保存。
214 　衍生化反应 :取氨基酸对照品混合液 200μL
(每种氨基酸各取 50μL ) ,加 100μL 015 mmol/ L
NaHCO3和 2 ,42二硝基氟苯衍生剂 25μL ,置 60 ℃
水浴 60 min ,再加入 011 mmol/ L 磷酸盐缓冲液稀
释至 1 mL ,混合后 12 000 r/ min 离心 10 min ,取上
清液过 0145μm 孔径滤膜 ,进样 5μL ,按 212 项色
谱条件进行梯度洗脱。
215 　样品测定[3 ] :取待测样品用 011 mmol/ L HCl
按 1∶10 超声粉碎 ,蛋白测定采用考马斯亮蓝法。
将样品液于 12 000 r/ min、4 ℃离心 10 min ,取上清
液 200μL ,按 214 项方法进行衍生化反应后 ,取上
清液过 0145μm 孔径滤膜 ,进样 10μL ,按 212 项色
谱条件进行梯度洗脱 ,定量方法采用峰面积外标法
(各氨基酸在 011～112μg 呈良好线性 , r = 01999 3
～01999 9) 。
216 　数据处理 :数据以 x ±s 表示 ,采用 SPSS1010
统计软件包处理。
3 　结果
311 　色谱结果 :在上述色谱条件下 ,经 25 min 梯度
洗脱则将 Asp、Glu、Gly、GABA 分离 ,其保留时间依
次为 417、612、1216、1412 min ,见图 1。
图 1 　混合对照品( A) 、混合对照品 + 正常大鼠
样品( B) 、模型组( C) 、复方丹参片大剂
量组( D)和溶剂空白( E)的色谱图
Fig11 　Chromatograms of reference substance ( A) ,
reference substance + samples for normal
rats ( B) , model group ( C) , high CDST
group ( D) and solution blank ( E)
312 　精密度试验 :取混合氨基酸对照品溶液 (4 种
对照品溶液等体积混合) 5μL ,重复进样 5 次 ,按
212 项色谱条件测定 ,其精密度 RSD 均不高于
118 %。
313 　样品测定结果 :见图 1 和表 1。结果表明 ,复
方丹参片对实验性 AD 大鼠大脑皮层 Glu 升高有明
显的抑制作用 ,能增加 AD 大鼠大脑皮层抑制性氨
基酸 Gly 及 GABA 的含量 ,与模型组比较差异均有
显著性 ( P < 0105 ,0101)
4 　讨论
　　复方丹参片由丹参、三七、冰片 3 味中药组成。
丹参主要含有脂溶性的丹参酮类成分和水溶性的丹
参素、丹酚酸两大类成分。现代研究表明 ,丹参酮对
原代大鼠神经细胞缺血性损伤有明显的保护作
用[4 ] ;丹参能明显改善单侧颞叶缺血性损害大鼠的
空间认知能力障碍[5 ] ,总丹酚酸有抗脑缺血和抑制
Glu 释放的作用[6 ]。三七的主要成分为三萜皂苷 ,是
与人参皂苷类似的一类成分 ,其对实验性脑缺血有明
显的保护作用 ;三七醇提物对樟柳碱造成的小鼠
·609· 中草药 　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 35 卷第 8 期 2004 年 8 月
表 1 　复方丹参片对 AD 大鼠大脑氨基酸类神经递质含量的影响 ( x ±s)
Table 1 　Effect of CDST on contents of amino acid neurotransmitters in brain of AD rats ( x ±s)
组　别
动物数
/ 只
剂量
/ (g·kg - 1)
蛋白
/ (g·L - 1)
Asp
/ (μmol·g - 1)
Glu
/ (μmol·g - 1)
Gly
/ (μmol·g - 1)
GABA
/ (μmol·g - 1)
假手术 8 - 17193 ±2191 3 14184 ±3153 20125 ±7170 9180 ±2137 3 36127 ±10183
模型 9 - 14172 ±2128 13108 ±2133 15162 ±5182 7152 ±1190 31169 ± 5160
石杉碱甲 7 213 ×10 - 5 17152 ±3115 13130 ±2186 14122 ±3120 10154 ±3131 28102 ± 7190
复方丹参片 7 01315 16185 ±2179 15137 ±5125 10178 ±3183 10179 ±2101 3 3 38197 ± 8192
7 01630 16141 ±2141 15185 ±2102 3 10144 ±2167 3 # 11156 ±3187 3 41175 ± 8172 3 # #
　　　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101 ; 　与石杉碱甲组比较 : # P < 0105 　# # P < 0101
　　　3 P < 0105 　3 3 P < 0101 vs model group ; # P < 0105 　# # P < 0101 vs Huperzine A group
记忆障碍、对 NaNO2造成的小鼠记忆障碍均有明显
的改善作用[7 ] 。冰片有改善血脑屏障通透性的作
用[8 ] ,从而能提高脑部的药物浓度 ,增强丹参、三七
的神经药理作用。目前复方丹参片主要用于冠心
病、心绞痛的治疗 ,从目前的研究结果来看 ,复方丹
参片今后在脑血管疾病及老年退行性脑病的防治方
面将会发挥积极的作用。
Asp、Glu、Gly 和 GABA 是神经药理中常涉及
到的 4 种递质 ,前两种为兴奋性氨基酸 ( EAAs) ,后
两种为抑制性氨基酸 ( IAAs) 。近年来 ,有关 EAAs
和 IAAs 与 AD 发病及学习记忆的密切关系已引起
重视 ,一般认为 EAAs 具有神经毒性 ,其大量释放可
致神经细胞损伤 ,与 Ca2 + 超载有关[9 ] ; IAAs 具有突
触后抑制作用 ,可通过减少 Ca2 +内流而发挥神经保
护作用。本研究发现 ,复方丹参片能明显降低实验
性 AD 大鼠大脑皮层中兴奋性氨基酸 Glu 的含量 ,
升高抑制性氨基酸 Gly 和 GABA 的含量 ,这可能是
复方丹参片防治 AD 的机制之一。本实验还观察到
模型组动物脑内 4 种氨基酸含量都普遍低于假手术
对照组 ,这可能与造模过程加速了动物的衰老和进
一步的神经元损伤及退行性病变有关 ,而复方丹参
片能阻止这种由造模引起的氨基酸含量的改变 ,提
示复方丹参片可能有一定的神经保护作用 ,有关研
究正在进一步进行。
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