全 文 ：HPLC法测定木香中去氢木香内酯的含量
徐 宇 1 ,方鲁延 2 ,谈 红 3 ,孟 莉 3
( 1. 四川大学华西药学院 ,四川 成都 610041; 2. 四川大学分析测试中心 ,四川 成都 610041;
3. 四川华星中医药有限公司 ,四川 成都 610041)
木香为菊科植物木香 Aucklandia lappa Dec-
ne. 的干燥根。为常用中药 ,木香的主要有效成分为
挥发性木香内酯和去氢木香内酯 ,这些有效成分具
有松弛平滑肌和解痉作用 ,《中华人民共和国药典》
2000年版一部中的含量测定为木香内酯 [1 ]。本实验
采用 HPLC法测定了 10批木香药材中去氢木香内
酯的含量 ,为木香药材的质量控制提供另一种含量
测定方法。
1 仪器、试剂和样品
日本岛津 LC- 9A高效液相色谱仪 , SPD-
6AV紫外可见检测器 , C- R4A数据处理机 , SIL-
6B自动进样器 , HS6150D超声波清洗仪 ,台式离心
机 ;甲醇 (色谱纯 ) ,高纯水 (成都西物所 ) ,去氢木香
内酯对照品 (日本和光纯药工业株式会社 ) ,纯度
98%以上 ( 040-21881) ,木香药材 (四川 )粉碎 ,过 40
目筛备用 ,由本院生药教研室王天志教授鉴定 ,其余
试剂均为分析纯。
2 实验部分
2. 1 色谱条件: 色谱柱: Shim-packCLC-ODS( 150
mm× 6. 0 mm, 5μm) ,预柱: Shim-packCLC-ODS
( 4) ;流动相: 甲醇-水 ( 70∶ 30) ;体积流量: 1 mL /
min,柱温: 常温 ,灵敏度: 0. 04 AU FS,检测波长:
225 nm。 理论板数按去氢木香内酯峰计不低于
3 000。
2. 2 线性关系考察:精密称取去氢木香内酯对照品
一定量 ,加醋酸乙酯 5 mL溶解 ,再加甲醇至刻度 ,
制成浓度分别为 0. 052、 0. 087、 0. 173、 0. 260、 0. 433
mg /mL,摇匀。精密吸取 10μL注入色谱仪 ,记录色
谱图 ,以峰面积为纵坐标 ,进样量为横坐标 ,绘制标
准曲线 ,得线性回归方程: Y= 615. 984+ 488 879X ,
r= 0. 999 9。去氢木香内酯在 0. 05～ 0. 5μg具有良
好的线性关系。
2. 3 精密度试验: 在选定的色谱条件下 ,取木香样
品 ( 8号 )连续进样 5次 ,按去氢木香内酯质量分数
计算 RSD为 0. 47% 。
2. 4 重现性试验: 取同一批木香样品 ( 8号 ) ,精密
称取 5份 ,按含量测定方法测定 ,按去氢木香内酯质
量分数计算 RSD为 1. 99%。
2. 5 稳定性试验:取同一批木香样品进行不同时间
段的考察 ,以 0、 8、 24、 30、 48 h分别进样 10μL,按去
氢木香内酯质量分数计算 RSD为 1. 12% , 48 h内
木香药材中的去氢木香内酯质量分数稳定。
2. 6 加样回收试验:精密称取已知去氢木香内酯含
量的木香样品 ( 8号 ) 0. 05 g ,加去氢木香内酯对照
品溶液 10 mL,按样品测定项下的方法同样操作 ,平
均回收率为 99. 42% , RSD= 1. 30% (n= 3)。
2. 7 样品含量测定:取木香药材 0. 05 g ,精密称定 ,
置 50 mL磨口锥形瓶中 ,加入乙醇 ( 1→ 2) 15 mL,
超声提取 30 min,离心分取上清液 ( 3 000r /min, 10
min ) ,残留物再加乙醇 ( 1→ 2) 10 mL超声提取 30
min,离心分取上清液 ,合并两次清液于 25 mL量瓶
中至刻度 ,摇匀 ,过 0. 45μm微孔滤膜 ,进样 10μL
测定。结果见表 1,图 1。
表 1 木香中去氢木香内酯的含量 (n= 3)
Table 1 Dehydrocostuslactone in root of A. lappa (n= 3)
批号 去氢木香内酯 /% 批号 去氢木香内酯 /%
1 1. 57 6 2. 22
2 1. 64 7 2. 06
3 2. 03 8 1. 18
4 2. 08 9 1. 51
5 2. 01 10 1. 62
3 讨论
3. 1 在提取条件的筛选中 ,采用氯仿、乙醇 ( 1→ 2)、
乙醇 95%分别进行回流提取 30 min和超声提取 2
次各 30 min的比较 ,其含量测定结果差异很小。由于
氯仿作提取溶剂毒性较大 ,所以选择了乙醇 ( 1→ 2)
超声提取作为该实验的提取溶剂及提取方法。
3. 2 对含量测定的木香内酯峰及相邻峰进行了分
离度的测定 ,两峰分离度为 R= 3. 39。
·1416· 中草药 Chinese T raditional and Herba l D rugs 第 35卷第 12期 2004年 12月
收稿日期: 2004-02-12作者简介:徐 宇 ( 1953- ) ,女 ,浙江人 ,副教授 , 1980年毕业于四川大学 ,现主要从事中药新药研究开发。 Tel: (028) 85503028
1-去氢木香内酯
1-deh yd rocos tus lactone
图 1 对照品 ( A)和样品 ( B) ,色谱图
Fig. 1 Chromatograms of ref erence substance (A)
and sample (B)
3. 3 《中华人民共和国药典》规定木香内酯的含量
不得低于 0. 6% ,该实验测定的木香内酯平均含量
为 1. 79% ,另文献报道 [2 ]对 19个产地中木香的去
氢木香内酯含量测定的结果平均值为 1. 65% ,木香
内酯含量和去氢木香内酯含量比较 ,后者的含量高
于前者 ,建立去氢木香内酯含量测定方法更有利于
药材及产品的质量控制。
References:
[1 ] Ch P (中国药典 ) [S ]. VolⅠ . 2000.
[2 ] Wang Y B, Xu H, Zh ang Y F. Quali ty evaluation study of
Rad ix Aucklan diae determination of tw o sesquiterpene lac-
tones in Aucklandia lappa Decne. by HPLC [ J] . Chin J
Pharm Anal (药物分析杂志 ) , 2000, 20( 6): 366 -367.
HPLC-ELSD法测定山楂中熊果酸和齐墩果酸含量的研究
谢 颖 1 ,吴春红 2 ,谢宝金 3
( 1. 四川省第四人民医院 药剂科 ,四川 成都 610016; 2. 四川省成都卫生学校附属医院 药剂科 ,四川 成都 611830;
3. 四川省成都市制药十二厂 质检科 ,四川 成都 610213)
山楂为蔷薇科植物山里红 Crataegus pinnati f i-
da va r. major N. E. Br. 或山楂 C. pinnat if ida
Bge.、野山楂 C . cuneata Sieb. et Zucc. 的干燥成
熟果实。前者药材称“北山楂” ,后两者称“南山楂”。
文献报道 ,山楂含有熊果酸和齐墩果酸等多种有机
酸 [1 ]。熊果酸和齐墩果酸是多种药材和制剂的质量
控制指标。因其紫外吸收为末端吸收 ,目前多采用薄
层扫描法经硫酸乙醇显色后对其进行定量 ,但熊果
酸和齐墩果酸在薄层板上不易分离 ,且操作繁琐 ,重
现性差。笔者参考有关文献 [1, 2 ] ,建立了基于蒸发光
散射检测 ( ELSD)的 HPLC法 ,对山楂中熊果酸和
齐墩果酸进行含量测定的研究。
1 仪器与试药
美国 Agilent 1100型色谱仪 ,美国 All tech
2000型蒸发光散射检测器。
山楂药材购自四川省中药材公司成都分公司 ,
经四川大学华西药学院植物化学教研室李正邦博士
鉴定为北山楂。熊果酸和齐墩果酸对照品由中国药
品生物制品检定所提供。 水为重蒸水 ,甲醇为色
谱纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件: 色谱柱: Alltima C18色谱柱 ( 250
mm× 4. 6 mm , 5μm);流动相:甲醇-水 ( 87∶ 13) ;体
积流量: 1 mL /min;柱温: 25℃ ;漂移管温度: 70℃ ;
气体流量: 2. 0 L /min。
2. 2 对照品溶液的制备:精密称取熊果酸和齐墩果
酸对照品适量 ,用甲醇分别配制成含熊果酸 1. 0
mg /mL,含齐墩果酸 1. 0 mg /mL的对照品溶液 ,及
含熊果酸 0. 5 mg /mL、齐墩果酸 0. 25 mg /mL的对
照品混合溶液。
2. 3 供试品溶液的制备: 山楂果肉经 70℃干燥 1
h,粉碎。精密称取 10 g ,加乙醚 250 mL,置索氏提取
器中提取至近无色 ,将乙醚提取液抽滤后浓缩至干 ,
残渣用甲醇溶解 ,转移至 25 mL量瓶中 ,用甲醇定
容至刻度。
2. 4 系统适用性试验: 按前述色谱条件 ,分别吸取
熊果酸对照品溶液、齐墩果酸对照品溶液、熊果酸和
齐墩果酸对照品混合溶液、供试品溶液 10μL,进
样 ,记录色谱图 ,结果见图 1。 熊果酸保留时间为
24. 3 min,理论板数为 12 916;齐墩果酸保留时间为
23. 1 min,理论板数为 11 283。两者分离良好 ,分离
度大于 1. 5。
·1417·中草药 Chinese T raditional and Herba l D rugs 第 35卷第 12期 2004年 12月
收稿日期: 2004-02-12作者简介:谢 颖 ,女 ,江苏南京人 ,主管药师 ,长期从事医院药房工作。