全 文 ：大孔吸附树脂富集茵陈蒿汤中蒿属香豆素的工艺研究
刘太华, 毕 元,肖小河,袁海龙
(解放军第 302 医院 药学部,北京 100039)
摘 要: 目的 研究大孔吸附树脂富集茵陈蒿汤中蒿属香豆素的工艺条件及参数。方法 以蒿属香豆素为指标,考
察大孔吸附树脂富集茵陈蒿汤中蒿属香豆素的最佳工艺条件。结果 提取液上大孔吸附树脂柱,吸附 30 min 后,以
5 倍树脂量的蒸馏水洗去杂质, 再以 3～4 倍树脂量的 70%乙醇洗脱蒿属香豆素为最佳工艺。结论 此法可较好地
富集茵陈蒿汤中的主要有效成分蒿属香豆素。
关键词: 茵陈蒿汤;蒿属香豆素; 大孔吸附树脂;富集
中图分类号: R284. 2; R286. 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2003) 07 0603 02
Enrichment process of scoparone from Yinchenhao Decoction with macroporous resin
LIU T ai-hua, BI Yuan, XIAO Xiao-he, YUAN Hai-long
( Depart ment of Pharmacy , No. 302 Hospital of PLA , Beijing 100039, China)
Abstract: Object T o study the opt imal condit ions and parameters for the enrichment process of sco-
parone in Yinchenhao Decoction ( YCHD) with macroporous resin. Methods With the enrichment deg ree
of scopar one in YCHD as an index , the opt imal condit ions of the enrichment process w ere invest igated.
Results T he opt imal conditions w ere that the aqueous ext ract of YCHD was taken into the macropor ous
resin column, and kept fo r 30 m in, then the resin w as w ashed by f ive t imes o f dist illed w ater to g et r id of
impurity and three — fo ur t imes o f 70% ethanol to elute scopar one. Conclusion T he process is feasible
to enrich ef fect ive ingredient scopar one from YCHD.
Key words : Yinchenhao Decoct ion ( YCHD) ; scoparone; macropor ous r esin; enrichment
茵陈蒿汤始载于《伤寒论》,由茵陈蒿、栀子、大
黄组成,具有清热利湿、利胆等功效,临床上用于治
疗湿热黄疸型肝炎、周身颜面发黄、发热、大便秘结、
小便短赤、胆石症等疾病[ 1]。茵陈蒿活性成分主要为
蒿属香豆素、茵陈色原酮、绿原酸、黄酮、挥发油等。
蒿属香豆素是茵陈蒿中的主要利胆成分,并有抗炎、
镇痛、心血管作用等[ 2] ,在秋季的花蕾和果实中含量
最高[ 3]。本实验采用大孔吸附脂对茵陈蒿汤提取液
进行精制,并以蒿属香豆素为指标,考察 D101型大孔
吸附树脂富集蒿属香豆素的工艺条件与参数。
1 仪器和材料
HP1100色谱仪(美国惠普公司)。茵陈蒿( 2001
年采自山东青岛,经本部肖小河博士鉴定为菊科植
物茵陈蒿 A rtemisia cap illars T hunb. ,蒿属香豆素
对照品(自制,经军事医学科学院仪器中心 UV, IR,
M S, HNMR 等波谱分析确定为蒿属香豆素,经高效
液相色谱归一化法计算,纯度为 99. 67%) , D101型大
孔吸附树脂(天津农药厂)。甲醇(色谱纯)。
2 色谱条件
色谱柱: BonapakTMC18 ( 250 mm×4. 6 mm , 5
m) ;流动相:甲醇-水( 40∶60) ;检测波长: 280 nm ;
流速: 1 mL/ min;柱温:室温。理论塔板数按蒿属香
豆素峰计算应不低于 4 000。
3 方法与结果
3. 1 对照品溶液的制备:精密称取蒿属香豆素对照
品15. 40 mg, 置100 mL 容量瓶中,加甲醇超声溶解
并稀释至刻度。精密量取 1. 0 mL 置 10 mL 容量瓶
中,加甲醇稀释至刻度,摇匀即得。
3. 2 供试品溶液的制备: 根据茵陈蒿汤配方比例,
称取茵陈蒿 150 g、栀子 75 g、大黄 50 g ,以 10倍量
水煎煮 2次, 每次煎煮 1 h, 合并滤液, 减压浓缩至
500 mL。
3. 3 线性关系考察: 精密吸取对照品溶液 1, 2, 4,
8, 12, 16, 20 L 分别进样,按上述色谱条件测定蒿
属香豆素峰面积。进样量为横坐标, 峰面积为纵坐
标, 绘制标准曲线。结果表明, 蒿属香豆素在
0. 015 4～0. 184 8 g 呈良好的线性关系, 其回归方
程为Y = 0. 108 4+ 1 098. 17X , r= 0. 999 8。
·603·中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 34 卷第 7 期 2003年 7月
收稿日期: 2002-10-13作者简介:刘太华( 1970—) ,男,山东济宁人,军事医学科学院硕士研究生,研究方向:中药药效物质基础及新药开发。Tel: ( 010) 66933324
3. 4 精密度考察: 精密吸取供试品溶液, 重复测定
5次, 得蒿属香豆素峰面积RSD 为 0. 31% ( n= 5)。
3. 5 稳定性考察:供试品溶液于 2, 4, 8, 12, 24 h分
别测定。结果表明,供试品溶液室温保存, 24 h 内蒿
属香豆素含量稳定, RSD 为 1. 36%( n= 5)。
3. 6 加样回收率试验: 精密吸取 1 mL 供试品溶液
5份,每份中加入一定量的对照品溶液, 依法测定,
结果蒿属香豆素平均回收率为 99. 66%, RSD 为
1. 15% ( n= 5)。
4 大孔吸附树脂纯化条件考察
4. 1 大孔吸附树脂的预处理与装柱:取 D101大孔吸
附树脂(含水 70% )以 95%乙醇浸泡 24 h 后, 装入
树脂柱, 95%乙醇冲洗,同步检测流出液。当流出液
与水混合( 1∶1)不产生白色浑浊时,再用蒸馏水冲
洗至无醇味即可。
4. 2 吸附容量的确定: 精密量取茵陈蒿汤水煎液
70 mL 上 D101大孔吸附树脂柱( 1. 5 cm×20 cm ,干
树脂 9 g ) , 控制流速 1～2 mL/ m in, 过柱液流出后
重吸附 1次,柱上保留吸附 30 min,收集过柱液, 平
行操作 3次,计算吸附容量(吸附容量为单位质量干
树脂吸附蒿属香豆素的质量) [ 4] , 结果蒿属香豆素吸
附容量为 20. 77 mg / g ( n= 3)。
4. 3 洗脱溶媒的选择: 精密量取 50 mL 茵陈蒿汤
水煎液(含蒿属香豆素 148. 65 mg) 4份, 分别上预
处理好的 D101大孔吸附树脂柱(干树脂各 12 g ) , 流
速1～2 mL/ m in, 过柱流出液重吸附 1次,柱上保留
吸附 30 min 后,收集过柱液。用蒸馏水冲洗树脂柱
至流出液近无色, TLC 检测未见蒿属香豆素荧光斑
点。分别用 30%, 50% , 70%, 90%乙醇洗脱, 每 25
mL 收集一份, 共计 8份, 以 T CL 检测各流份中蒿
属香豆素的出现情况,并结合颜色变化, 合并 TLC,
相同或相似的流份,浓缩, 干燥称重, 并以 HPLC 测
定有蒿属香豆素存在的流份。结果见表 1。
由表1可见, 30%乙醇虽能洗下蒿属香豆素, 但
表 1 不同溶媒洗脱蒿属香豆素的考察结果
Table 1 Result of scoparone eluted by dif f erent solvents
洗脱溶媒 蒿属香豆素洗脱量/ mg
0～50 mL 50～150 mL 150～200 m L
蒿属香豆素
洗脱率/ %
醇洗液
固形物/ g
醇洗液中蒿属
香豆素含量/ %
上柱液固
形物/ g
上柱液中蒿属
香豆素含量/ %
精制程
度/ %
30%乙醇 4. 90 22. 75 15. 64 29. 12 1. 56 2. 78 6. 75 2. 20 126. 36
50%乙醇 22. 18 84. 44 20. 19 85. 13 2. 11 6. 01 6. 75 2. 20 273. 18
70%乙醇 35. 87 102. 21 - 92. 89 2. 36 5. 85 6. 75 2. 20 265. 91
90%乙醇 37. 23 102. 81 - 94. 21 2. 45 5. 72 6. 75 2. 20 260. 00
洗脱能力弱。50%乙醇洗脱能力稍强, 但洗脱速度
慢,需要的溶媒多, 有效成分洗脱不集中, 洗脱率也
不高。70%, 90%乙醇效果好,洗脱快,且洗脱率均在
90%以上。本实验选用 70%乙醇, 因其与 90%乙醇
相比较经济, 且在醇洗液固形物中的含量及精制程
度都略高于 90%乙醇。
5 工艺验证
取茵陈蒿 60 g ,栀子 30 g, 大黄 20 g ,按前法制
备茵陈蒿汤水煎液,均分 4份,其中 3份分别上大孔
吸附树脂柱(干树脂各 12 g ) , 70%乙醇液 150 mL
洗脱, HPLC 法测定蒿属香豆素含量。原药液、醇洗
液分别浓缩,干燥,称重。结果原药液固形物为 7. 24
g ,蒿属香豆素含量为 2. 15% ,醇洗液固形物为 2. 63
g ,蒿属香豆素含量为 5. 37% ,蒿属香豆素洗脱率为
91. 96% ,精制程度为 249. 92%。
6 讨论
中药中有效成分的传统精制方法多为水醇法,
但有效成分损失多,乙醇消耗量大,周期长。大孔吸
附树脂技术的引进成为中药有效单体成分或复方中
某一单体成分分离纯化的有效手段, 具有高效、快
速、方便、选择性好等优点。
研究表明 D 101型大孔吸附树脂对茵陈蒿汤中有
效成分蒿属香豆素具有很好的吸附能力,且解吸附
快, 洗脱率大于 90% ,经过大孔吸附树脂柱处理的
药液固形物比上柱前原药液显著降低, 有效成分含
量提高,精制程度在 200%以上。验证结果表明利用
D 101型大孔吸附树脂精制纯化蒿属香豆素, 工艺稳
定、方法可行。
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