全 文 ：收稿日期:2011-01-08; 修订日期:2011-05-05
基金项目:国家自然科学基金(No． 30860364)
作者简介:郭红玲(1985-) ，女(汉族) ，湖南东安人，现为贵阳中医学院在
读硕士研究生，学士学位，主要从事天然药物化学研究工作．
* 通讯作者简介:梁光义(1952-) ，男(汉族) ，四川岳池人，现任贵阳中医
学院教授，硕士学位，主要从事天然产物化学研究工作．
不同制法茵陈蒿汤中栀子苷、
对羟基苯乙酮、大黄酸的含量比较
郭红玲2，曹佩雪1，潘卫东1，梁光义1，2*
(1．贵州省中科院天然产物化学重点实验室，贵州 贵阳 550002; 2．贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)
摘要:目的 对茵陈蒿汤经方颗粒汤剂、配方颗粒汤剂与传统汤剂中成分栀子苷、对羟基苯乙酮、大黄酸的含量进行比较。
方法 采用高效液相色谱法，Elite SinoChrom ODS － AP色谱柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇(A)－ 0． 02%醋酸
水溶液(B) ，梯度洗脱(0 ～ 27 min，19 %→28 % A;28 ～ 32 min，28 %→80 % A;32 ～ 42 min，80 % A)。结果 栀子苷、对
羟基苯乙酮、大黄酸的线性范围分别为 9． 200 ～ 1． 840 0μg，0． 102 0 ～ 0． 020 4 μg，0． 188 2 ～ 0． 037 6 μg呈良好线性关系。
结论 3 种剂型中的栀子苷、对羟基苯乙酮、大黄酸的含量均有差异，可为茵陈蒿汤的进一步研究提供科学依据。
关键词:茵陈蒿汤; 高效液相色谱; 含量比较
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 11． 018
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2011)11-2614-02
To Compare the Determination of Geniposide、Hydroxy － acetophenone and the Rhein in
Different Methods of the Three Different Forms of Decoction of Yinchenhao Decoction
GUO Hong-ling2，CAO Pei-xue1，PAN Wei-dong1，LIANG Guang-yi1，2*
(1． The Key Laboratory of Chemistry for Natural Products of Guizhou Province and Chinese Academy of Sciences，
Guiyang 550002，China;2． Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China)
Abstract:Objective To compare the determination of Geniposide，Hydroxy － acetophenone and the Rhein in traditional decoc-
tion，the single － flavor granules and formula granules of Yinchenhao decoction． Methods The samples were separated on Elite Si-
no Chrom ODS － AP column(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)by gradient elution with methanol(A)－ 0． 02% acetic acid(B) (0 ～ 27
min，19 %→28 % A;28 ～ 32 min，28 %→80 % A;32 ～ 42 min，80 % A)as the mobile phase． Results The linear ranges of
Geniposide，Hydroxy － acetophenone and the Rhein were 9． 200 ～ 1． 840 0 μg，0． 1020 ～ 0． 020 4 μg，0． 1882 ～ 0． 037 6 μg，re-
spectively． Conclusion The contents of Geniposide，Hydroxy － acetophenone and the Rhein are significantly different in the differ-
ent formulations． It can provide the scientific basis for further research of Yinchenhao decoction
Key words:Yinchenhao decoction; HPLC; The comparation of the determination
茵陈蒿汤出自《伤寒论》，由茵陈蒿、栀子、大黄 3 味药组成，
具有清热除湿、保肝利胆之功效，是临床上治疗黄疸的要药［1］。
现代研究表明它具有利胆、保肝、护胰、解热、抗炎、镇痛、抗菌、抗
病毒等药理作用［2］。由于传统中药复方汤剂在使用上的不便等
原因，近年来配方颗粒汤剂已用于临床。本项目组前期研究发现
配方颗粒汤剂与传统汤剂可能由于分煎与合煎的影响，虽然主要
药效物质种类相近，但含量和部分药效往往有较大的差别［3，4］，
可能影响其临床疗效。经方颗粒剂已在台湾、日本、韩国等长期
广泛用于临床，但在我国还未用于临床。经方颗粒剂与传统汤剂
均采用合煎制备，其药效物质组成、含量、药效和临床疗效应有更
好的相似性，在临床上推广应用有较好的前景。鉴于目前未见相
关的深入研究报道，因此，本项目对茵陈蒿汤的经方颗粒汤剂、配
方颗粒汤剂、传统汤剂中的化学成分栀子苷、对羟基苯乙酮、大黄
酸进行了比较研究，探索经方颗粒汤剂的化学组成、药效和临床
疗效与传统汤剂是否存在较好的等效性，为经方颗粒在我国应用
提供一定的科学依据。
1 仪器与试药
HP1100型高效液相色谱仪 (在线脱气机、二元泵、自动进样
器、柱温箱、DAD检测器，ChemStation 色谱工作站) ，KQ － 300DA
型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
茵陈 Artemisia capillaris Thunb、栀子 Fructus Chardeniae Ellis、
大黄 Rheum palmatum L． 药材样品共 3 批，均购于贵州济仁堂药
店，经贵阳中医学院第一附属医院贺祝英主任药师鉴定。栀子苷
(批号 749 － 200108)购于中国药品生物制品检定所(纯度 ＞ 98
%)。大黄酸(批号 0796 － 200005)购于中国药品生物制品检定
所(纯度 ＞ 98 %)。对羟基苯乙酮(批号 2989)购于四川省维克
奇生物科技有限公司(纯度 ＞ 98 %)。甲醇为色谱纯，水为乐百
氏纯净水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 对照品溶液的制备 精密称取栀子苷、对羟基苯乙酮、大黄
酸对照品，加适量甲醇溶解稀释成浓度分别为 1． 840 0，0． 510 0，
0． 117 6 mg·ml －1的溶液，作为初始浓度对照液;制成混合对照
品溶液，其浓度分别为栀子苷(0． 920 0 mg /ml)、对羟基苯乙酮
(0． 010 2 mg /ml)、大黄酸(0． 011 8 mg /ml)。
2． 2 供试品溶液的制备
2． 2． 1 传统汤剂的制备 根据茵陈蒿汤原文献收载用量及制备
方法，称取茵陈 18 g，加 720 ml水煎煮到 360 ml，再加入栀子 9 g，
大黄 6 g，煎煮 30 min，过滤，用纯净水定容到 200 ml［5］，超声
10min，冷却后补足重量。取 5 ml 传统汤剂于容量瓶中，用水定
容到 10ml，再用 0． 45μm微孔滤膜过滤，即得传统汤剂的供试液。
2． 2． 2 经方颗粒汤剂的制备 取 5 ml传统汤剂减压、浓缩干燥，
制粒，即得经方颗粒剂，用水溶解，超声 10 min，冷却后补足重量，
用水定容到 10 ml，再用 0． 45 μm微孔滤膜过滤，即得经方颗粒汤
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 11 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 11
剂的供试液。
2． 2． 3 配方颗粒汤剂的制备 按照制药企业(贵州宏宇药业有限
公司)提供的煎煮提取方法取 3 味组方药材茵陈 18 g、栀子 9 g、
大黄 6 g，组方药材分别加水煎煮两次。第一次加 8 倍量的水，浸
泡 30 min，煎沸后改文火慢煎 60 min，第二次加 6 倍量的水，煎沸
后改文火慢煎 40 min，趁热过滤，合并两次滤液，分别干燥、溶解，
然后混合，混合液定容到 200 ml，超声 10 min，冷却后补足重量，
取 5 ml配方颗粒汤剂于容量瓶中，用水定容到 10 ml，再用 0． 45
μm微孔滤膜过滤，既得配方颗粒汤剂的供试液。
2． 3 色谱条件 色谱柱:大连依利特分析仪器有限公司 Sino-
Chrom ODS － AP色谱柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ;柱温 25 ℃;
流动相:甲醇(A)－ 0． 02%醋酸水溶液(B) ，梯度洗脱(0 ～ 27
min，19 %→28 % A;28 ～ 32 min，28 %→80 % A;32 ～ 42 min，80
% A) ;流速 0． 9 ml·min －1;进样量 10 μl;检测波长 263 nm。色
谱图见图 1。
1 －栀子苷 2 －对羟基苯乙酮 3 －大黄酸
图 1 对照品(a)、茵陈蒿汤传统汤剂(b)的 HPLC
2． 4 线性关系考察 分别精密吸取“2． 1”项下的混合对照品溶
液 0． 2 ，0． 3 ，0． 4，0． 5 ，0． 6，1 ml 于 1 ml 的容量瓶中，加甲醇稀
释至刻度，制成混合对照品溶液，摇匀，即得。精密吸取上述混合
对照品溶液和“2． 1”项下的混合对照品溶液各 10 μl注入液相色
谱仪，按“2． 3”项下色谱条件测定，记录峰面积。以峰面积为纵
坐标，浓度为横坐标，得回归方程分别为栀子苷:Y = 3 167． 3X －
19． 3，r = 0． 999 8;对羟基苯乙酮:Y = 58 578． 4X － 1． 61，r = 0． 999
9;大黄酸:Y = 58 660． 5X + 0． 65，r = 0． 999 9。栀子苷、对羟基苯
乙酮、大黄酸分别在 9． 200 ～ 1． 840 0 μg，0． 102 0 ～ 0． 020 4 μg，
0． 188 2 ～ 0． 037 6 μg呈良好线性关系。
2． 5 精密度实验 分别精密吸取同一混合对照品溶液 10 μl，连
续进样 6 次，测定峰面积，计算。栀子苷、对羟基苯乙酮、大黄酸
的 RSD值分别为 0． 20%，0． 07%，0． 32%，该方法精密度良好。
2． 6 重复性实验 取同一批号的样品，按“2． 2． 1”项下方法平行
制备 6 份供试品溶液，在同一色谱条件下测定。样品中栀子苷、
对羟基苯乙酮、大黄酸的 RSD分别为 0． 27%，0． 29，0． 56%，表明
该方法重复性良好。
2． 7 稳定性实验 取同一供试品溶液分别于 0，2，4，6，8，10 h 进
样，测定峰面积，栀子苷、对羟基苯乙酮、大黄酸的 RSD 分别为
0． 11%，0． 42%，0． 52%。供试品溶液在 10 h内稳定。
2． 8 加样回收率实验 精密称取已知含量经方颗粒 0． 135 g共 9
份，平均分为 3 组，以高、中、低 3 水平质量浓度分别精密加入 3
种对照品溶液栀子苷(0． 630 0，0． 550 0，0． 470 0 mg /ml)5． 0 ml;
对羟基苯乙酮(0． 008 5，0． 007 2，0． 006 3 mg /ml)5． 0 ml;大黄酸
(0． 008 9，0． 007 8，0． 007 1 mg /ml)5． 0 ml，结果见表 1。
2． 9 验证 取 3 个批次茵陈蒿汤的各药材，每批药材按“2． 2”项
下方法制备各种剂型的供试液，按上述色谱条件测定，计算含量。
结果见表 2。
以上研究结果表明，传统汤剂与经方颗粒汤剂中的栀子苷、
对羟基苯乙酮、大黄酸的含量较为接近。
3 讨论
通过以上研究，经方颗粒和传统汤剂中栀子苷、对羟基苯乙
酮、大黄酸的含量较为接近，相似度较好。从化学成分的角度为
经方颗粒剂、配方颗粒剂与传统汤剂应用于临床提供依据，由此
可见，经方颗粒剂、配方颗粒剂均可用于临床，且经方颗粒剂的临
床作用可能更与传统汤剂浓缩剂相符。
表 1 样品加样回收率实验结果
标准品 样品含量 加标量 测得量 回收率 RSD(%)
栀子苷 2． 600 3． 125 5． 790 101． 050 0． 690
2． 750 5． 390 100． 070 0． 250
2． 350 4． 980 99． 780 0． 690
对羟基苯乙酮 0． 041 0． 043 0． 083 98． 890 2． 030
0． 036 0． 077 99． 890 1． 970
0． 032 0． 073 99． 530 1． 890
大黄酸 0． 036 0． 045 0． 082 101． 600 1． 100
0． 039 0． 076 101． 470 0． 990
0． 036 0． 072 101． 090 0． 790
表 2 不同制法茵陈蒿汤中栀子苷、对羟基苯乙酮、大黄酸的含量比较
样品 批号 传统 /mg 经方 /mg 配方 /mg
栀子苷 第 1 批 25． 40 25． 50 28． 40
第 2 批 20． 20 20． 80 25． 40
第 3 批 23． 60 23． 80 28． 80
对羟基苯乙酮 第 1 批 0． 74 0． 72 0． 84
第 2 批 0． 64 0． 64 0． 96
第 3 批 0． 68 0． 68 0． 98
大黄酸 第 1 批 0． 78 0． 76 0． 94
第 2 批 0． 52 0． 52 0． 88
第 3 批 0． 72 0． 68 0． 80
洗脱条件的选择:本实验比较了等度洗脱和梯度洗脱对指纹
图谱的影响，结果发现等度洗脱得到的峰分离效果不好，故确定
使用梯度洗脱使样品中不同极性组分获得了合适的保留值;本实
验考察了甲醇 －水梯度洗脱、甲醇 － 0． 05 %磷酸水溶液梯度洗
脱、乙腈 －水梯度洗脱、甲醇 － 0． 02%醋酸水溶液梯度洗脱。比
较色谱图，甲醇 － 0． 02 %醋酸水溶液系统出峰峰形较好，无拖尾
现象，分离度较好。故选择甲醇 － 0． 02%醋酸水溶液系统梯度洗
脱分离。
检测波长的选择:通过 DAD 检测器比较样品在紫外波长范
围内扫描的色谱图，峰形及分离度相对较好的 263 nm 作为检测
波长。
参考文献:
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洗脱分析［J］．抗感染药学，2006，3(2) :54．
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