全 文 ：·1616· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
姬松茸菌丝体多糖体外抗肿瘤活性的研究及结构初探
姜荷，谷文英。
(江南大学食品学院．江苏无锝214036)
姬松茸(AgaHcusb／azeiMurill，ABM)，又名
巴西蘑菇，是近年来在日本、美国和我国各地区掀起
栽培热潮的一种重要的药食兼用菌种[I]。近些年来，
姬松茸作为抗癌剂、免疫调节剂、抗突变剂和抗菌物
质引起了人们的极大关注。国内外学者已经证明姬
松茸中丰富的多糖是发挥抗肿瘤作用的最主要的成
分之一口～“。深层发酵获得的菌丝体多糖的生理活
性接近于子实体多糖o。]，并且由于深层发酵具有生
产工艺简便、培养材料易得、生产成本低、易于实现
工业化等优点，从而成为开发姬松茸活性多糖的一
种有效手段。对于姬松茸多糖发挥抗肿瘤作用的机
制，目前尚无定论，一种观点是多糖作为一种理想的
免疫调节剂，通过激活免疫反应起到抗肿瘤作
用o“]：但也有一些研究报告指出姬松茸多糖对肿瘤
细胞具有一定的细胞毒作用口“]，这可能是由于不同
学者采用的菌种、培养、分离纯化条件不同所致。
真菌多糖生物活性的研究表明，真菌多糖的化
学结构对其生物活性起着至关重要的作用。多糖的
构效关系是指多糖一级结构和高级结构与其生物活
性的关系，它可为活性多糖的目的性筛选提供必要
的理论指导，是当前糖化学和糖生物学共同关注的
焦点问题。本实验对深层发酵所得的姬松茸菌丝体
进行了热水浸提，得到了水溶性多糖HWSP。采用
了两种肿瘤细胞，对HWSP的体外抗肿瘤活性进行
了研究。采用凝胶柱色谱，按相对分子质量分布对
HWSP进行了初步分离，结合体外细胞实验筛选活
性组分，对各分离组分的抗肿瘤活性与相对分子质
量分布及单糖组成之间的关系进行了研究。
1材料与设备
1．1多糖：菌丝体是由本实验室筛选、保存的菌种
AgaricusblazeiMurill经深屡发酵获得。菌丝体干
耪经90℃热水提取3次，每次3h，水提物浓缩至原
体积的1／5，加入乙醇至终体积分数为85％，离心得
沉淀，冻干得HWSP。
1．2 主要试剂：MTT[3一(4，5-dimethyiazol一2一y1)一
2，5-diphenyherrazolium]，Sigma公司产品；RPMI
一1640培养液，Gibeo产品；小牛血清，杭州四季青
生物工程材料有限公司；刀豆蛋白A(ConA)，上海
华美生物工程公司；注射用盐酸多柔比星(Doxoru—
bicinHydrochloridef rinj ction，DHI)，浙江海正
药业股份有限公司。
1．3细胞：鼠结肠癌细胞CT一26由上海第二军医
大学惠赠，人肝癌Bel一7402由本校医学系提供。
1．4主要仪器：c02培养箱，Harris公司}Thefmo-
labsystemsMultiskanMK3酶联免疫检测仪，上海
雷勃分析仪器有限公司。
1．5凝胶柱材料：SepharoseCL·6B：DextranT-10
T一40T一70T一500，Pharmacia产品。
2实验方法
2．1姬松茸多糖对癌细胞的抑制作用：将癌细胞
Bel．7402或CL一26置5％C02、37℃培养箱内，在台
有10％小牛血清的RPMI一1640培养液中贴壁生
长。用含0．125％胰蛋白酶和O．01％DETA的消化
液消化处于指数生长期的癌细胞，以3×10‘／mL密
度接种于96孔培养板上，每孔150PL，培养24h
后，倾去培养液，然后加入不同质量浓度的多糖(终
浓度分别为0．0100、O．0500、0．100、0．200g／
L)，每个质量浓度3孔重复，每孔加50pL样品，对
照组加同量培养液。培养48h后，每孔加入MTT
(5g／I。)20p．L，继续培养4h，离心，弃去上清液，每
孔加入二甲基亚砜150止，平板振荡仪振荡10
rain，酶联免疫仪570nm波长下检测各孔吸光度
(^)，按下公式计算抑制率(R，)。
RI=(1一万#＆／一A,目_)×100％
2．2凝胶柱色谱洗脱：HWSP10mg溶解于3mL
磷酸盐缓冲液(pH7．0)中，3000r／min离心10
min，取上清液上样：柱型号：1．6cm×80cm；体积
流量：9mI。／h；每管收集体积3mL，；洗脱剂：含10
mmol／LNaCI的磷酸盐缓冲液；温度：室温。
2．3单糖组成分析：单糖组成[7]。
箨薯品羿：霎05蔷智嚣6一)．女．满族，辽宁人，在读博士研究生，研究方向为天热药食科学。
*通讯作者谷文英Tel!(0510)5879957E—mail：wygu(亘sytu．edu．Cn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第1i期2005年11月· 617·
3实验结果 时Rf达到了最高，为39．90％。HWSP对肝癌细胞
3．1姬松茸菌丝体多糖HWSP对CT一26及Bel一的生长具有较高程度的抑制作用，在0．2000g／L
7402细胞的体外作用效果：姬松茸菌丝体多糖的剂量下，R，高达62．59％，与临床常用的化疗药
HWSP对CT一26的体外抑制效果较明显，但并不呈物DHI的抑制水平相近，而且具有剂量依赖关系。
单纯的剂量效应关系，在0。1000g／L的作用剂量 结果见表l。
裹1 HWSP组分对体外培养的CT-26和Bel．7402的抑制作用
T-hie1 InhibttionofHWSPfractionsonCT、26andBel一7402／nv／tro
组 别 质量赦度／(g．L—t)———=一!竺一 型：!!些
^570(j士j) R，／％ ^5w(；士5)Rf／％
与对照跟比较：。_P<0．08‘‘P
肿瘤活性：基于上述结果，为昵确HWSP中具抗癌
括性的关键组分，首先采用凝胶柱色谱对HWSP进
行分离。洗脱结果如图1所示。将洗脱的糖蜂按相
对分子质量分布分成3部分，根据标准相对分子量
多糖在相同的柱子和洗脱条件下的洗脱体积与相对
分子质量的关系，确定分别收集相对分子质量分布
大于7X105的组分P，、相对分子质量分布在
7×104～7×105的组分P2以及相对分子质最分布
低于5．5×104的组分Pa，并对3个组分进行体外活
性跟踪实验，结果见表2。组分P，具有显著的抑制
CT-26生长酌生物活性，在0．10、0．z0g／L酌质量
浓度时，其RI均高于65％。P，、P。对CT一26的抑制
活性较低，RI均低于30％。即HWSP对CT一26起
抑制作用的关键活性组分为P。。组分P。则对Bel—
7402细胞无抑削作用，组分P。、P3体外对BeI一7402
细胞均具有显著的抑制效果。在相同质量浓度下，P，
组分的抑制效果要优于P；，但二者单独用药时的抑
制效果并没有明显高于HWSP粗品，推测二者之间
毒誊一毒毛一圈1 HWSP的凝胶柱色谱洗脱圈请
FI窖．1ElutlonpatternofHWSPORgelcolumn
chromatography
裹2 HWSP经凝脏柱色鲞洗脱的3十擐分对体外培养的结局癌搁膪CT一26和肝瘤细胞Bel．7402的抑制作用
Table2 Inhibitionotthreefractionselutedbygelcolumnchromatography0nCT．26andBeI．7402妇mm
组别 质量浓度／(g·L叫)
CT一26 &l一7402
^Ⅲ(j士5) 尺，／％ A57。(；士j) 五，／％
与对照组比较。。P
·1618· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第1l期2005年11月
在药效上可能存在着某种程度上的协同增效作用。
3．3凝胶分离的各组分的单糖组成分析：由表3可
以看出，P-和P。两个组分均是以葡萄糖为主，此外
均含有较多的甘露糖：P2则是以甘露糖为主。对
CT一26起主要抑制作用的P。组分与其他两个组分
的单糖组成的主要差异在于其不含有岩藻糖I对
Bel一7402起抑制作用的组分P，及P。，在单糖组成上
主要表现在鼠李糖的变化上，如活性最强的P。组分
鼠李糖的量最高，活性次之的P。组分鼠李糖量略低
于P，，而对Bel一7402没有抑制活性的P：组分则未
检出有鼠李糖的存在。
裹3 HWSP经凝艘柱色谱洗脱的3个组分的单糖组成
Table3 SugarcomponentsofHWSPfractionseluted
bygelcolumnchromatography
组分 Rha Ara Xyl Fuc ManGal Glc
Pz 一 9．1 10．3 11．5 147．514．0 100
P3 4．8 11．6 4．7 — 67．8 11．9 100
4讨论
姬松茸是一种具有治疗和保健作用的药食同源
性真菌，其丰富的多糖作为一种低毒而免疫活性强
的物质引起了广泛的关注。本实验采用热水提取深
层发酵菌丝体得到了水溶性多糖HWSP．其对体外
培养的不同肿瘤细胞具有一定程度的选择性杀伤作
用，值得关注的是它与化疗药物盐酸多柔比星对肝
癌Bel一7402细胞具有相当的抑制作用}此结果尚未
见其他资料报道。HWSP对Bel一7402的抑制效果要
远高于CT一26，这种差异可能是由于不同的肿瘤细
胞有不同的凋亡阈，即对药物浓度和／或药物类型的
敏感性不同所致“]。越来越多的证据表明，目前常用
的抗癌药、激素和热疗的作用机制之一就是引发肿
瘤细胞凋亡，也有研究表明某些多糖在体外对肿瘤
细胞的生长有抑制作用，其作用机制与细胞周期改
变以及某些相关基因的表达有关[。]。本实验亦通过
显微镜观察看出，HWSP对肿瘤细胞作用的直观形
态效果与化疗药物盐酸多柔比星相类似，均使肝癌
细胞发生皱缩、变形，关于HWSP对肿瘤细胞是否
具有诱导其凋亡的作用，需要进一步通过实验验证。
糖的化学结构是其生物活性的基础，多糖受单
糖组成、相对分子质量的大小、糖苷键的连接方式、
多糖的立体结构等多种因素的影响，从而呈现出生
理活性的多样性。多糖具有独特复杂的化学结构，决
定了对其构效关系研究的复杂性和难度，目前仍尚
无统一的规律和结论。由于具有生物学活性的不同
的多糖有其最佳相对分子质量范围，所以本实验首
先采用凝胶柱色谱对HWSP进行分离，利用相对分
子质量分布差异洗脱，得到3个主要的糖峰。结合体
外抗肿瘤效果的差异，对具有不同生物活性的组分
的相对分子量分布及单糖组成情况进行了初步分
析：对CT一26细胞而言，相对分子质量分布低于
5．5×104的组分Ps具有较高的抑制效果，与其他两
个无明显抑制效果的组分在单糖组成上主要体现在
P。不含有岩藻糖；对Bel一7402而言，具有抑制效果
的两个组分P。、P。，相对分子质量分别分布在大于7
×105和低于5．5×104两个区间内，而在单糖组成
上则表现出活性与鼠李糖的有无及古量的变化有一
定的相关性，即鼠李糖的量高，抑制活性相对较强，
而不含鼠李糖的组分P：则对Bel-7402无抑制作
用。活性组分P-、Pa单独用药时对Bel—7402的抑制
效果并没有明显高于HWSP粗品，推测二者之间在
药效上可能存在着某种程度上的协同增效作用。上
述只是针对本姬松茸菌丝体多糖对CT一26和Bel一
7402细胞体外抑制活性规律的一个初步观察结果，
为揭示其构效关系，还需要从更为详尽的一组结构
和高级结构上进行大量的实验来进行解析。
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万方数据
姬松茸菌丝体多糖体外抗肿瘤活性的研究及结构初探
作者： 姜荷， 谷文英
作者单位： 江南大学食品学院,江苏,无锡,214036
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(11)
被引用次数： 2次
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