全 文 ：漆姑草提取物体外抗肿瘤活性的初步筛选研究
张素英，周万镜
（遵义师范学院 化学系，贵州 遵义５６３００２）
摘 要：目的：对漆姑草提取物的体外抗肿瘤活性进行初步筛选研究。方法：首先选用３个人癌细胞株
（人白血病Ｋ５６２细胞株、人宫颈癌 Ｈｅｌａ细胞株、人乳腺癌 ＭＣＦ－７细胞株），采用 ＭＴＴ法和ＳＲＢ法对漆
姑草５个不同溶剂萃取部位进行抗肿瘤活性筛选，并对溶剂极性较大部位中的皂苷和多糖进行针对人
白血病Ｋ５６２和 ＨＬ－６０两种细胞株的筛选研究。结果：漆姑草皂苷对人白血病细胞株Ｋ５６２和 ＨＬ－６０均显
示有一定的抑制作用，多糖对人白血病Ｋ５６２细胞可能有弱的抑制作用。结论：漆姑草皂苷是漆姑草体外
抗白血病细胞的活性部位。
关键词：漆姑草；癌细胞株；体外抗肿瘤活性；ＭＴＴ法；ＳＲＢ法
中图分类号：Ｒ２８５．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－２１９７（２０１２）０８－００００－００
收稿日期：２０１２－０５－１６
基金项目：遵义市科技局科研基金资助项目［遵社科合社字２００７（１９）号］
作者简介：张素英 （１９７７－），女，硕士，遵义师范学院讲师，研究方向为有机化学及天然产物化学。
漆姑草（Ｓａｇｉｎａ ｊａｐｏｎｉｃａ（Ｓｗ．）Ｏｈｗｉ），又名瓜槌草、珍
珠草、星宿草等，为石竹科漆姑草属植物［１］。漆姑草全草入
药，具有提脓、拔毒、散结消肿、解毒止痒、抗癌之功效，民间
常用于白血病、漆疮、秃疮、痈肿、淋巴结结核、龋齿痛、跌打
内伤、蛇咬伤等疾病的治疗［２］。据黄厚聘等［３］报道，漆姑草
所含黄酮甙对小鼠宫颈癌Ｕ１４有明显的体内抗癌作用，
并
３ 讨论
土木香内酯是四味藏木香软胶囊的主要有效成分之
一，具有多种药理活性。本研究通过Ｃａｃｏ－２细胞模型，研究
土木香内酯跨膜转运的机制从而探讨土木香内酯小肠吸收
转运的机制，初步阐明土木香内酯在小肠中吸收的机制和
药物吸收的难易程度。建立土木香内酯在Ｃａｃｏ－２细胞单层
模型中的 ＨＰＬＣ检测方法，土木香内酯的峰面积与质量浓
度线性关系良好，线性范围为０．１～１．０ｍｇ·ｍＬ－１。应用该
方法分别测定了ＡＰ侧给药转运９０ｍｉｎ，时间点ＡＰ侧和ＢＬ
侧液中原形土木香内酯的总残存量，回收率（ＡＰ侧和ＢＬ侧
的总和）为９５．８０％，说明它们在Ｃａｃｏ－２细胞内基本无蓄积
或仅有少量蓄积，对实验结果分析不会产生影响。
根据文献报道，在Ｃａｃｏ－２细胞单层模型中，一般来说人
体吸收完全的药物Ｐａｐｐ值大于１０－５ｃｍ·ｓ－１，而吸收差的药物
Ｐａｐｐ值小于１０－５ｃｍ·ｓ－１，在此模型中我们将转运良好的阳性
药物普萘洛尔和难吸收的药物阿替洛尔的Ｐａｐｐ值进行测定，
得到普萘洛尔的Ｐａｐｐ值为（２．３２±０．１１）×１０－５ｃｍ·ｓ－１；阿替
洛尔的Ｐａｐｐ值为（２．０４±）×１０－５ｃｍ·ｓ－１与文献报道的数据
接近，而从表１我们可知土木香内酯的表观渗透系数在吸
收良好的药物的范围内，从肠腔侧进入体循环（内流）与从
体循 环 进 入 肠 腔 侧 （外 流）的 数 据 相 差 不 大，并 且
ＰａｐｐＡ－Ｂ／ＰａｐｐＢ－Ａ为０．６７，在０．５～２．０之间，所以双向转运差异
不大，初步说明土木香内酯在小肠上属于被动转运，受生物
大分子的影响较小。因此，这些结果对四味藏木香软胶囊
的口服提供了一定的实验和理论基础。
近年来，土木香内酯被发现具有止痛作用，土木香根的
甲醇提取物对人胃腺癌细胞（Ｍｋ－１）、人子宫癌细胞（ＨｅＬａ）
和鼠黑素瘤细胞（Ｂ１６Ｆ１０）具有抗增殖作用，此次在Ｃａｃｏ－２
细胞单层模型中的研究将对今后土木香内酯在这些疑难杂
症的研究方面提供一定的参考依据。
参考文献：
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香内酯的含量［Ｊ］．南京中医药大学学报，２００８，２４（４）：２６３－
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ｈｏｍｏｌｏｇ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－８ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｘｃｒ－．２ｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ
ｔｈｅ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ａｉｒ ｐｏｕｃｈ ｍｏｄ－
ｅｌ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｕｒａｔｅ ｃｒｙｓｔａｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｏｕｔｙ ｓｙｎｏｖｉｔｉｓ［Ｊ］．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ
Ｒｈｅｕｍ，１９９８，４１（５）：９００．
（责任编辑：姜付平）
—１２—
认为漆姑草是一种低毒高效的广谱抗癌中草药。薛惠彰［４］
采用漆姑草为主治疗急性非淋巴细胞白血病 Ｍ２ｂ型患者１
例，效果较好。目前漆姑草抗癌效果已得到认可［５］，因此有
必要对漆姑草化学组成及抗癌活性进行探索。黄筑艳等［６］
对漆姑草微量元素进行了测定，李焱等［７］采用试管法，对漆
姑草化学成分进行初步探索，认为漆姑草中可能含有三萜
皂苷、黄酮类、氨基酸等成分，贾爱群等［８］对漆姑草中酚性
成分进行研究，笔者前期曾对漆姑草石油醚提取物化学成
分及其抗肿瘤活性进行探索，从漆姑草石油醚提取物中分
离鉴定出２５种成分，发现其石油醚提取物对人白血病Ｋ５６２
细胞株的生长具有微弱的抑制作用［８］。为进一步探索漆姑
草的抗肿瘤活性，笔者对漆姑草其他提取物的体外抗肿瘤
活性进行了较广泛的筛选研究，为漆姑草的资源开发提供
理论参考。
１ 材料及试剂
１．１ 实验材料
实验材料购于贵州省贵阳市中草药市场，经遵义师范
学院生物系何林副教授鉴定为石竹科漆姑草属植物漆姑草
（Ｓａｇｉｎａ ｊａｐｏｎｉｃａ（Ｓｗ．）Ｏｈｗｉ）。
１．２ 细胞株及主要试剂
人白血病Ｋ５６２和 ＨＬ－６０细胞株、人宫颈癌 Ｈｅｌａ细胞株
均购于 ＣＣＴＣＣ（中国典型培养物保藏中心），人乳腺癌
ＭＣＦ－７细胞株购于中科院上海细胞库；ＭＴＴ购于Ａｍｒｅｓｃｏ
公司，ＳＲＢ购自ＴＣＩ公司；ＲＰＭＩ１６４０培养基、ＭＥＭ培养基
和ＤＭＥＭ培养基均购于 Ｈｙｃｌｏｎｅ公司；其他试剂均为国产
分析纯试剂。
２ 方法
２．１ 样品制备
２．１．１ 漆姑草不同溶剂萃取部位及总皂苷的制备
干燥后粉碎的漆姑草用９０％的食用酒精在室温下浸提
多次，浸提液合并、减压浓缩至无醇味［９］。浓缩液依次用石
油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂得石油醚、氯
仿、乙酸乙酯、正丁醇和水五个极性不同的溶剂萃取部位。
漆姑草正丁醇浓缩物加少量乙醇溶解并过滤，滤液加乙醚
沉淀，沉淀经干燥即得浅棕色的漆姑草总皂苷。
２．１．２ 漆姑草粗多糖的制备
取干燥粉碎的漆姑草适量，用９５％的乙醇脱脂３次，
残渣风干后加去离子水于沸水浴中浸提３次。提取液合
并、减压浓缩，离心除去不溶物，上清液加无水乙醇至醇浓
度约８０％进行沉淀。沉淀加去离子水溶解后用Ｓｅｖａｇ法除
蛋白多次。除蛋白后的多糖液减压浓缩后加无水乙醇沉
淀，沉淀依次用无水乙醇、丙酮洗涤数次，于真空干燥箱
４５℃干燥得土灰色漆姑草粗多糖。
２．１．３ 样品溶液的配置
各溶剂萃取部位及总皂苷用ＤＭＳＯ溶解，粗多糖用生
理盐水溶解，加药前用培养液稀释成０．００２ｍｇ／ｍＬ、０．０２
ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ ３个浓度备用。
２．２ 抗肿瘤活性的体外实验
首先选用３种人癌细胞株（人白血病Ｋ５６２细胞株、人宫
颈癌 Ｈｅｌａ细胞株、人乳腺癌 ＭＣＦ－７细胞株）系统地对漆姑
草石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水五个极性不同的溶
剂提取部分进行体外抗肿瘤活性的初步筛选研究。在此研
究基础上，对抑制人白血病 Ｋ５６２细胞株结果相对较好的溶
剂极性较大的提取部分（正丁醇部分和水部分），又分别提
取了其中的皂苷和多糖并针对人白血病Ｋ５６２和 ＨＬ－６０两种
细胞株进行了筛选研究。漆姑草各提取物抗 Ｈｅｌａ和 ＭＣＦ－
７细胞株的实验采用ＳＲＢ法；抗 Ｋ５６２和 ＨＬ－６０细胞株的实
验采用 ＭＴＴ法。
２．２．１ 抗Ｋ５６２和 ＨＬ－６０细胞株的实验（ＭＴＴ法）
人白血病Ｋ５６２和 ＨＬ－６０细胞株经ＲＰＭＩ１６４０培养基培
养后，将对数生长期细胞稀释为５×１０４ 个／ｍＬ的细胞悬
液，接种于９６孔板，每孔９０μＬ。培养２４ｈ后加样１０μＬ／孔，
设阴性对照，以阿霉素（ＡＤＭ ）为阳性对照，每个浓度３个
孔，继续培养４８ｈ。每孔加入配制好的 ＭＴＴ（５ｍｇ／ｍＬ）
２０μＬ，继续培养４ｈ后，加入三联液（１０％ＳＤＳ－５％异丁醇－
０．０１ｍｏｌ／ＨＣｌ）５０μＬ／孔，于ＣＯ２培养箱中过夜，用酶标仪在
５７０ｎｍ处测吸光度Ａ值。实验重复３次，按下列公式计算
各样品对人癌细胞生长的抑制率：抑制率％＝（对照组Ａ—
实验组Ａ）／对照组Ａ×１００％。
２．２．２ 抗 Ｈｅｌａ和 ＭＣＦ－７细胞株的实验（ＳＲＢ法）
人宫颈癌 Ｈｅｌａ细胞株、人乳腺癌 ＭＣＦ－７细胞株分别
经ＤＭＥＭ和 ＭＥＭ培养基培养后，将对数生长期细胞稀释
为５×１０４ 个／ｍＬ的细胞悬液，接种于９６孔板，每孔９０μＬ。
培养２４ｈ后加样１０μＬ／孔，设阴性对照，人乳腺癌 ＭＣＦ－７细
胞株以阿霉素（ＡＤＭ ）为阳性对照，人宫颈癌 Ｈｅｌａ细胞株
以５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）为阳性对照，每个浓度３个孔。继续
培养７２ｈ后，每孔加１０％冷ＴＣＡ（三氯乙酸）固定细胞，４℃
固定１ｈ。再倾去固定液，并用蒸馏水洗涤５次以去除
ＴＣＡ。空气中自然干燥后加入由 １％ 冰醋酸配制的
４ｍｇ／ｍＬＳＲＢ溶液１００μＬ／孔，室温中染色１５ｍｉｎ。未与蛋
白结合的ＳＲＢ用１％醋酸洗涤５次，空气中干燥。结合的
ＳＲＢ用１０ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｔｒｉｓ液溶解，酶标仪５７０ｎｍ处测吸光
度Ａ值。实验重复３次，按下列公式计算各样品对人癌细
胞生长的抑制率：抑制率％＝（对照组Ａ—实验组Ａ）／对照
组Ａ×１００％。
３ 结果与讨论
３．１ 结果
由表１可知，不同的溶剂萃取部位对三种癌细胞株
（Ｋ５６２、Ｈｅｌａ和 ＭＣＦ－７细胞株）的抑制作用有较明显差异。
各萃取部位对人宫颈癌 Ｈｅｌａ细胞株和人乳腺癌 ＭＣＦ－７细
胞株均无抑制作用，但对人白血病Ｋ５６２细胞株，除氯仿部位
外，漆姑草石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水四个部位均显示
有微弱抑制作用，但这些抑制作用没有呈现出典型的量效
关系，其中溶剂极性较大的提取部位（正丁醇部分和水部
分）抑制作用相对较强。
由表２可知，在溶剂极性较大的提取部位中，多糖对人
白血病Ｋ５６２细胞可能有弱的抑制作用，对 ＨＬ－６０细胞无明
确的抑制作用。皂苷对人白血病Ｋ５６２和 ＨＬ－６０两种细胞株
均显示有一定的抑制作用，特别是对 ＨＬ－６０细胞株的抑制
—２２—
作用已呈现出一定的量效关系，值得进一步研究。
３．２ 讨论
首先选用三种人癌细胞株（Ｋ５６２、Ｈｅｌａ和 ＭＣＦ－７细胞
株）系统地对漆姑草石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水五
个极性不同的溶剂萃取部位进行体外抗肿瘤活性的初步筛
选研究。在此研究基础上，对抑制人白血病Ｋ５６２细胞株结果
相对较好的溶剂极性较大的提取部位（正丁醇部位和水部
位），分别提取了其中的皂苷和多糖并针对人白血病Ｋ５６２和
ＨＬ－６０两种细胞株进行了进一步的筛选研究，以提高人们
对漆姑草抗肿瘤活性的进一步了解。结果表明：漆姑草皂
苷对人白血病细胞株Ｋ５６２和 ＨＬ－６０均显示有一定的抑制作
用，特别是对 ＨＬ－６０细胞株的抑制作用已呈现出一定的量
效关系。提示：漆姑草皂苷是漆姑草体外抗白血病细胞株
的活性部位，对人白血病的治疗可能有一定的治疗作用，但
作用如何及皂苷中的具体有效成分尚有待进一步研究。
表１ 漆姑草不同溶剂萃取部位对Ｋ５６２、Ｈｅｌａ和
ＭＣＦ－７细胞的抑制作用
组别
剂量
（ｍｇ／ｍＬ）
细胞生长抑制率（％）
Ｋ５６２ｃｅｌ Ｈｅｌａ ｃｅｌ ＭＣＦ－７ｃｅｌ
０．２ ９９．５８±０．９４ ８０．６６±２．６１ ９１．６６±０．０７
石油醚部位 ０．０２ １９．８４±１．６３ ０ ０
０．００２ １３．６９±５．３９ ０ ０
０．２ ５．３５±１．１２ ０ １１．５８±１．１７
氯仿部位 ０．０２ １５．９２±３．３２ ０ ０．６６±２．０４
０．００２ １９．４８±１２．８６ ０ ０
０．２ ９１．３６±０．９０ ７３．１８±１．８４ ８７．２１±０．１４
乙酸乙酯部位 ０．０２ １４．０６±５．６４ ０ ０
０．００２ ４．０６±１．７０ ０ ０
０．２ １０２．２７±２．０２ ７５．７６±２１．４９ ９８．０３±０．１８
正丁醇部位 ０．０２ ２２．１０±１．２６ ０ ０
０．００２ ２４．９３±２．１１ ０ ０
０．２ １０４．６４±０．２５ ６４．７５±１６．２４ ９８．８２±０．６８
水部位 ０．０２ ２６．２８±６．２７ ０ ０
０．００２ ３４．０５±０．６１ ０ ０
表２ 漆姑草多糖和皂苷对Ｋ５６２和
ＨＬ－６０细胞的抑制作用
组别
剂量
（ｍｇ／ｍＬ）
细胞生长抑制率（％）
Ｋ５６２ｃｅｌ ＩＣ５０ ＭＣＦ－７ｃｅｌ
０．２ ２３．５８±１７．５６ ４３．８６±１４．１２
粗多糖 ０．０２ １５．４６±１．０７ ３．２０±６．３５
０．００２ ９．８４±１．００ ０
０．２ １００．００±２．２３ ９６．６７±６．８２
皂苷 ０．０２ １８．７０±１．３４ ６７．２８±１．６４
０．００２ １７．６３±４．５８ ０
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（责任编辑：姜付平）
Ａ Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ
Ｖｉｔｒｏ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｔｓ ｉｎ Ｓａｇｉｎａ Ｊａｐｏｎｉｃａ（Ｓｗ．）Ｏｈｗｉ
Ｚｈａｎｇ Ｓｕｙｉｎｇ，Ｚｈｏｕ Ｗａｎｊｉｎｇ
（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｚｕｎｙｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｅｇｅ，Ｚｕｎｙｉ ５６３００２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｍａｋｅ ａ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍＳａｇｉｎａ ｊａ－
ｐｏｎｉｃａ（Ｓｗ．）Ｏｈｗｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｒｅｅ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｓ（Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｃｅｌ Ｌｉｎｅｓ Ｋ５６２，Ｈｕｍａｎ Ｃｅｒｖｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌ Ｌｉｎｅ ａｎｄ Ｈｕ－
ｍａｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌ Ｌｉｎｅ ＭＣＦ－７）ａｒｅ ｃｈｏｏｓｅｎ，ａｎｄ ＭＴＴ ａｎｄ ＳＲＢ ａｒｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ａ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ａｎｔｉｔｕ－
ｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｆｉｖｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔ ｐａｒｔｓ．Ａｎｄ ｔｈｅｎ ｍａｋｅ ａ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｓａｐｏｎｉｎｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ ｔｈｅ
ｍａｊｏｒｉｔｙ ｏｆ ｐｏｌａｒｉｔｙ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔ ａｓ ｔｏ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｃｅｌ Ｌｉｎｅｓ Ｋ５６２ａｎｄ ＨＬ－６０Ｒｅｓｕｌｔｓ：ｓａｐｏｎｉｎｓ ｈａｓ ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ Ｈｕｍａｎ
Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｃｅｌ Ｌｉｎｅｓ Ｋ５６２ａｎｄ ＨＬ－６０，ａｎｄ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｓｈｏｗ ａ ｗｅａｋ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｕｐｏｎ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｃｅｌ Ｌｉｎｅｓ Ｋ５６２．Ｃｏｎ－
ｃｌｕｓｉｏｎ：ｓａｐｏｎｉｎｓ ｏｆ Ｓａｇｉｎａ ｊａｐｏｎｉｃａ ｃａｎ ｃｕｒｅＨｕｍａｎ Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｎｅｅｄｓ ｔｏ ｂｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｉｅｄ．
Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ：Ｓａｇｉｎａ ｊａｐｏｎｉｃａ（Ｓｗ．）Ｏｈｗｉ；Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ Ｖｉｔｒｏ；ＭＴＴ；ＳＲＢ
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