全 文 ：川乌配伍防己对动物免疫功能的调节作用
张少华 ,秦　林 ,薛　玲 ,王　平
(山东中医药大学 ,山东 济南　 250014)
摘　要: 目的　观察川乌配伍防己对动物免疫功能的影响 ,探讨寒热配伍的免疫作用。方法　采用免疫变态反应性
炎症模型及小鼠迟发性超敏反应 ( DTH) 模型 ,并检测小鼠单核巨噬细胞 ( MΥ)吞噬功能和特异性抗体生成等。
结果　川乌配伍防己既可明显抑制免疫增高小鼠 DTH,明显抑制大鼠佐剂继发性关节炎 ,又明显提高免疫低下小
鼠 MΥ吞噬功能。而各单味药则无明显作用。另外 ,对特异性体液免疫的影响 ,单味防己有明显促进作用 ,而乌防配
伍后能明显抑制其作用。 结论　川乌配伍防己对细胞免疫有双向调节作用 ,对体液免疫也有一定的调节作用。
关键词: 川乌 ; 防己 ; 配伍 ; 免疫调节 ; 佐剂性关节炎
中图分类号: R286. 95　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 10 0929 04
Studies on immunoregulating effect in single and compatibility
withRadix Aconiti andRadix Stephaniae Tetrandrae
ZHANG Shao-hua , QIN Lin, X UE Ling , WANG Ping
( Shandong Univ ersity of TCM , Jinan 250014, China)
Abstract: Object　 The immuno regula tion function was studied in experimental animals to observ e the
ef fect of single and /or combined use wi th Radix Aconit i ( RA) and Radix Stephaniae Tetrandrae ( RST) .
Methods　 The response o f delay ed type hypersensi tivity ( DT H) in mice, the phagocytosis of abdominal
macrophages ( MΥ) in mice, and the production of special antibodies in mice w ere observ ed. Results　 The
tw o Chinese materia medica ( CMM) in combination use could induce the increasing of phagocytosic func-
tion o f MΥ hypoimmuni tic model mice, the inhibiting on the responses o f DTH in the hyperimmuni tic mod-
el mice and the non-immunosuppressiv e t rea ted mice. On the production o f special antibodies in mice, the
enhance ef fect was found in RA used in sing le, and the suppressiv e effect w as found when using the combi-
nation of th e tw o CMM. Conclusion　 In acco rdance wi th the mechanism o f the disorder betw een the anti-
inflammation effect and the induce-inf lamma tion ef fect to arthri tis in the immune system , these data indi-
cate that the bidi rectional effect o f combination of the two CMM used on the immune responses, may be
the involved mechanism on treating arth ri ti s.
Key words: Radix Aconiti ( RA) ; Radix Stephaniae Tetrandrae ( RST) ; compatibility; immuno regu-
lation; adjuvant ar thri tis
　　川乌配伍防己 (以下简称乌防 )是中医治疗风湿
痹证的常用传统药对 ,也是现代治疗风湿性关节炎、
类风湿性关节炎等疾病的常用寒热配伍 [1 ]。 笔者曾
报道了两药配伍能增强镇痛作用 [2 ] ,本研究进一步
探讨了乌防配伍前后对免疫功能的影响。
1　材料
1. 1　药材: 川乌为毛茛科植物乌头 Aconitum
carmichaeli Debx. 的块根 ,防己为防己科植物粉防
己 Stephania tetrandra S. Moo re的根。购自济南市
中药饮片厂 ,本校中药鉴定教研室石俊英教授鉴定。
1. 2　药物制备: 川乌、防己、乌防 1∶ 1以及乌防
1∶ 2水煎液制备见文献 [2 ]。 4种水煎液中乌头碱和
粉防己碱含量均采用薄层扫描法进行测定 ,结果稳
定 ,见文献 [3 ]。
1. 3　药品与试剂: 环磷酰胺 ( Cyclophosphamide,
Cyc) ,上海华联制药有限公司生产 ,批号 970501; 2,
4-二硝基氟苯 ( DN FB) ,上海金山县六塔化工厂产
品 ,批号 850601,用时用丙酮 -麻油 ( 1∶ 1) 混合溶
媒配成 10 g /L DN FB溶液 ;刚果红 ,北京化工厂产
品 ,批号 700809,用时以生理盐水配成 1% 溶液。
1. 4　动物: 昆明种小鼠 ,体重 18～ 22 g ,雌雄各半 ,
Wistar大鼠 ,体重 ( 160± 20) g,雄性 ,均购自山东
·929·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2002-10-30基金项目: 国家自然科学基金资助项目 ( 39670868)作者简介: 张少华 ( 1958— ) ,男 ,硕士 ,山东中医药大学副教授 ,硕士生导师 ,主要从事中药学教学及理论研究。
省医学科学院动物中心。
2　方法
2. 1　对 Cyc诱导小鼠迟发性超敏反应 ( DTH)升
高模型的影响: 取小鼠 60只 ,随机分为 6组: N S
组 , Cyc+ N S组 , Cyc+ 川乌组 , Cyc+ 防己组 , Cyc+
乌防 1∶ 1组 , Cyc+ 乌防 1∶ 2组。参照文献 [ 4] ,于
致敏前 3 d 1次 ip Cyc 250 mg /kg ,诱导 DT H升高
模型。实验当天 ,参照 Co rsini法 [5 ]稍加改良 ,于每鼠
腹部去毛处涂抹 10 g /L DN FB 50μL致敏 ,次日同
法强化 1次。致敏当天各组小鼠分别 ig 0. 2 mL /
20 g相应药物 ,正常对照组给等量生理盐水 ,连续
给药 5 d。第 6天每鼠右耳廓内外两侧面均匀涂抹
10 g /L DN FB 10μL攻击 , 24 h后脱颈椎处死 ,用
直径 8 mm打孔器打下左右耳廓同部位耳片 ,称重。
以左右耳片质量之差 ( mg ) 为迟发型超敏反应值。
结果以方差分析 t检验法进行统计学处理。
2. 2　对大鼠佐剂性关节炎的抑制作用:方法参照弗
氏完全佐剂性关节炎法 [6 ]。
2. 2. 1　对大鼠继发性佐剂肿胀的预防作用:取雄性
大鼠 70只 ,每鼠于左后足注射弗氏完全佐剂 0. 05
m L致炎 ,一周后随机分为 7组: N S组 ,消炎痛组 ,
川乌组 ,防己组 ,乌防 1∶ 1组 ,乌防 1∶ 2高剂量
组 ,乌防 1∶ 2低剂量组。各组每天等容量 ig 1次 ,
体积 2 mL /200 g ,连续给药 7 d。分别于致炎前及致
炎后不同时间测量体重及致炎肢和对侧肢的足跖周
长 ,并根据大鼠注射佐剂前后足跖周长计算足跖肿
胀率 ,同时观察耳和尾部病变的发生率及严重度。
2. 2. 2　对大鼠继发性佐剂肿胀的治疗作用:取雄性
大鼠 70只 ,致炎、分组、给药及测量方法同 2. 2. 1
项。于致炎 18 d后开始给药 ,连续 7 d,分别于致炎
前及致炎后不同时间进行测量。 上述大鼠足跖肿胀
率均按下列公式计算 ,并以方差分析 t检验法进行
统计学处理。
大鼠足跖肿胀率= (炎后足跖周长值 - 炎前足跖周长
值 ) /炎前足跖周长值× 100%
2. 3　对免疫低下模型小鼠单核巨噬细胞 ( MΥ)吞
噬功能的影响: 参照 Marchal[ 7]和刘进学等 [4 ]方法
加以改良 ,取小鼠 60只 ,随机分为 6组: N S组 ,
Cyc+ N S组 , Cyc+ 川乌组 , Cyc+ 防己组 , Cyc+ 乌
防 1∶ 1组 , Cyc+ 乌防 1∶ 2组。每天等容量 ig , 每
次 0. 2 mL /20 g ,在小鼠给药连续 5 d期间 ,分别于
第 1, 3, 5天 , ip Cyc 70 mg /kg ,造成免疫低下模型。
于末次给药 1 h后 ,参照文献 [8, 9 ] ,用肝素处理过的
定量毛细管 ,从小鼠眶后静脉丛取血 40μL,立即放
入 4 mL蒸馏水中 ,使血标本完全溶血作为空白对
照管 ,随即从小鼠尾 iv刚果红溶液 0. 1 m L /10 g, iv
后 30 s,同上法取血 40μL,放入 4 mL蒸馏水中 ,使
其完全溶血作为实验管。 然后用 721型分光光度
计 ,在 510 nm波长下以空白对照管调零 ,测实验管
吸光度值 ,计算血清刚果红含量 ( mg /100 mL) ,根
据其含量多少说明 MΥ吞噬功能强弱 ,即含量少 ,
说明吞噬力强 ;反之 ,吞噬力弱。 (刚果红标准曲线 ,
以回归方程计算得出 Y= 2. 647 7 X± 0. 002, r=
0. 999 8)。
2. 4　对小鼠血清溶血素 (抗鸡红细胞抗体 )生成的
影响: 参照文献方法 [10 ]。取正常健康小鼠随机分为 6
组: Cyc模型组 , N S组 ,川乌组 ,防己组 ,乌防 1∶ 1
组 ,乌防 1∶ 2组。于免疫刺激当天开始给药 ,连续
给药 7 d,于末次给药 1 h后眶静脉取血 ,离心 ,取血
清用生理盐水稀释 100倍 ,取上述血清 1 mL与
5% 鸡红细胞混悬液 0. 5 mL混合 ,在 0℃ 冰箱中
加 10% 补体 0. 5m L。37℃ 恒温箱中保温 30min,
在 0℃ 冰箱中终止反应 ,离心 ,取上清液于 721分
光光度计 540 nm处比色 ,另设不加血清的空白管
作对照。
3　结果
3. 1　对 Cyc诱导小鼠 DT H升高模型的影响:表 1
结果显示 , Cyc模型组明显高于 N S组 ,说明造模成
功。 防己组以及各配伍组均可明显抑制升高模型的
DT H,与 Cyc模型组有显著差异。川乌组仅有较弱
的抑制倾向 ,但与防己配伍后 ,其抑制作用增强。
表 1　乌防配伍前后对 Cyc诱导小鼠 DTH升高模型的影响
Table 1　 Inf luence of enhanced DTH caused by Cyc in mice
before and after compatibility of RA and RST
组　别 剂　量
/( g· kg- 1 ) 动物 /只
DT H
/mg
肿胀率
/%
N S - 10 13. 1± 15. 4 107. 38
Cyc模型 - 8 24. 9± 4. 9* * 228. 86
Cyc+ 川乌 20 9 22. 0± 6. 0* * 200. 00
Cyc+ 防己 20 8 18. 5± 3. 8* △ 168. 18
Cyc+ 乌防 1∶ 1 20 10 19. 0± 4. 2* △ 166. 67
Cyc+ 乌防 1∶ 2 20 10 16. 9± 5. 7△△ 143. 22
　　与 N S组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01; 与 Cyc模型组比较:
△ P < 0. 05　△△ P < 0. 01
　　 * P < 0. 05　* * P < 0. 01 vs NS g roup; △ P < 0. 05　△△ P <
0. 01 vs Cyc model group
3. 2　对大鼠佐剂性关节炎的抑制作用
3. 2. 1　对大鼠继发性佐剂肿胀的预防作用: 表 2结
果显示 ,在本实验条件下 ,各单味药物组作用较弱 ,
对致炎肢足肿胀无明显作用 ,仅对致炎肢对侧肢的
·930· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
足肿胀有明显抑制作用 ;而各配伍组不仅能明显抑
制注射局部的 9 d后的再度肿胀 ,又可明显抑制对
侧肢因迟发性超敏反应引起的足肿胀 ,并且明显强
于各单味药组 ,有显著和非常显著的统计学意义。表
明乌防配伍后对大鼠继发性佐剂关节炎的预防作用
明显优于各单味药。从尾部炎性结节等情况来看 ,各
用药组的炎性反应均较 NS组为轻。
3. 2. 2　对大鼠继发性佐剂肿胀的治疗作用: 表 3
结果显示 ,各单味药对大鼠继发性佐剂关节炎的治
疗作用较弱 ,与 N S组比较无统计学差异 ;而各配伍
组不仅能使注射佐剂致炎肢的肿胀程度得到迅速的
明显降低 ,而且对另侧迟发型超敏反应性足肿胀 ,也
有显著的抑制作用 ,与 N S组比较均有显著和非常
显著的统计学意义 ;与各单味药组比较也有统计学
差异。表明在本实验条件下 ,单味药没有明显的抑制
作用 ,而配伍以后的治疗作用显著增强。
　　另外 ,与注射佐剂前比较 ,用药组大鼠的平均体
重都有所增加 ,尤其是配伍组 ;而 N S组的大鼠平均
体重则有所降低。从耳及尾部的炎性结节反应来看 ,
N S组表现为强阳性体征 (+ + + ) ,而各配伍表现
为弱阳性 (+ ) ,各单味药组介于二者之间。
3. 3　对免疫低下模型小鼠单核巨噬细胞 ( MΥ) 吞
噬功能的影响: 表 4结果表明 ,对于免疫低下小鼠
MΥ的吞噬功能 ,各单味药没有明显提高作用 ,与
N S组有显著差异 ;配伍组则能提高低下的吞噬功
能 ,与 Cyc+ N S组和川乌组比较差异均显著 ,并使
之接近 N S组。
3. 4　对小鼠血清溶血素 (抗鸡红细胞抗体 )生成的
影响:表 5显示单味防己组对小鼠溶血素的生成有
非常显著的促进作用 ,而配伍川乌后却能明显抑制
其促进作用 ,并接近 N S组 ,显示出良好的调节
作用。
表 2　乌防配伍前后对大鼠继发性佐剂关节炎的预防作用 ( x± s , n= 10)
Table 2　 Prevention on secondary adjuvant arthritis in rats before and af ter compatibility of RA and RST (x± s , n= 10)
组　别 剂量
/ ( g· k g- 1)
致炎后不同时间足跖肿胀率 /%
　　　　　　药　前　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　药　后　　　　　　　　　　　　　　　　
1 d 3 d 7 d
左足 左足 左足
9 d 11 d 13 d
左足　 右足　 左足　 右足　 左足　 右足　
NS - 25. 3± 7. 0 23. 9± 6. 5 25. 7± 9. 1 30. 5± 10. 6 13. 7± 7. 5 35. 0± 9. 7 9. 3± 5. 9 38. 7± 8. 7 10. 8± 3. 9
消炎痛 　 0. 1 25. 1± 8. 6 20. 6± 6. 2 22. 8± 6. 4 18. 8± 9. 2* * 2. 6± 1. 8* * 20. 3± 10. 1* 3. 6± 2. 7* 21. 4± 9. 0* * 3. 1± 2. 6* *
防己 20 23. 3± 7. 9 28. 4± 8. 8 28. 6± 8. 9 30. 0± 9. 4 6. 4± 4. 2* 32. 4± 9. 8 8. 5± 4. 2 31. 2± 7. 4 6. 4± 4. 2*
川乌 20 25. 6± 3. 9 24. 1± 6. 1 26. 8± 4. 8 28. 4± 7. 2 3. 6± 1. 7* * 31. 0± 7. 1 5. 9± 2. 7 33. 2± 11. 7 3. 4± 2. 5* *
乌防 1∶ 1 20 25. 9± 6. 6 26. 2± 4. 2 23. 7± 6. 6 23. 2± 4. 7* * 4. 6± 2. 9* * 24. 7± 6. 7* 3. 5± 2. 9* △ 21. 3± 8. 5* * △▲ 3. 5± 2. 8* *
乌防 1∶ 2 20 26. 5± 7. 4 27. 2± 5. 1 24. 4± 8. 3 20. 3± 4. 1* △▲ 3. 4± 2. 8* * 21. 3± 6. 1* * △▲ 3. 9± 2. 9* ▲ 20. 3± 5. 5* * △▲▲ 2. 1± 3. 4* * ▲
10 25. 7± 4. 6 25. 6± 9. 3 23. 5± 5. 2 17. 8± 8. 8* △▲ 2. 1± 1. 6* * ▲ 17. 3± 8. 9* * △△▲▲ 2. 5± 1. 8* * ▲▲ 21. 3± 8. 2* * ▲ 1. 6± 1. 7* * ▲
　　与 N S组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01; 与川乌组比较: △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01; 与防己组比较: ▲ P < 0. 05　▲▲ P < 0. 01〔乌防 1∶ 2
配伍组 ,根据药物水煎液中川乌含量的高低分为高、低剂量组 ( 20, 10 g /kg)〕
　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01 vs NS group; △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01 vs RA group; ▲ P < 0. 05　▲▲ P < 0. 01 vs RST group〔 Group of com bi-
nating RA and RST ( 1∶ 2) w ere divided in to h igh-dosage g roup and low -dosage group ( 20, 10 g /kg )〕
表 3　乌防配伍前后对大鼠继发性佐剂关节炎的治疗作用 ( x± s , n= 10)
Table 3　 Treatment on secondary adjuvant arthritis in rats before and after compatibility of RA and RST ( x± s , n= 10)
组　别 剂量
/ ( g· kg- 1 )
致炎后不同时间足跖肿胀率 /%
　　　　　　药　前　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　药　后　　　　　　　　　　　　　　　　
1 d 11 d 18 d
左足 左足 左足
20 d 22 d 25 d
左足 右足 左足 右足 左足 右足
N S - 24. 6± 7. 8 28. 8± 11. 3 31. 7± 12. 2 34. 5±9. 8 5. 5± 2. 9 31. 5± 6. 8 7. 2± 2. 3 26. 3±6. 0 5. 8± 1. 8
消炎痛 0. 1 26. 4± 9. 8 30. 4± 8. 3 29. 9± 8. 0 22. 9±7. 7* 4. 6± 3. 6 21. 1± 6. 6* * 3. 3± 2. 2* * 14. 9±8. 5* * 2. 6± 1. 6* *
防己 20 23. 3± 4. 6 27. 9± 6. 9 28. 9± 5. 3 27. 4±7. 3 5. 3± 3. 5 27. 4± 7. 8 5. 6± 1. 8 23. 6±7. 2 4. 6± 1. 7
川乌 20 24. 4± 7. 7 27. 6± 10. 8 27. 0± 8. 5 27. 5±9. 8 4. 5± 3. 6 28. 3± 9. 9 5. 7± 2. 6 24. 9±5. 8 3. 8± 1. 6*
乌防 1∶ 1 20 23. 1± 3. 3 29. 5± 9. 3 28. 2± 10. 1 24. 6±7. 5* 3. 3± 1. 9 21. 7± 6. 0* * 4. 4± 1. 3* 17. 4±6. 1* △ 4. 5± 3. 7
乌防 1∶ 2 20 25. 8± 7. 4 28. 4± 8. 3 29. 8± 7. 2 20. 7±9. 1* 1. 9± 1. 7* * △▲ 18. 2± 6. 9* * △▲ 4. 5± 2. 1* 16. 7±5. 7* * △ 2. 3± 2. 9*
10 26. 9± 8. 4 30. 3± 9. 7 30. 3± 10. 9 21. 1±6. 9* * 3. 2± 2. 8 20. 9± 4. 4* * 3. 2± 2. 5* * ▲ 18. 5±6. 3* 3. 2± 2. 4*
　　同表 2注
　　 Not e is same to Table 2
·931·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
表 4　乌防配伍前后对免疫低下小鼠单核
巨噬细胞吞噬功能的影响
Table 4　 Inf luence of phagocytosis function of MΥ
in hypoimmunitic model mice before and
after compatibility of RA and RST
组　别 剂量 /( g· kg- 1 ) 血清刚果红含量 / (mg· 100 m L- 1 )
N S - 　　　　 1. 091± 0. 257
Cyc模型 - 1. 507± 0. 254* *
川乌 20 1. 395± 0. 185* *
防己 20 1. 345± 0. 172* *
乌防 1∶ 1 20 1. 146± 0. 188△△▲▲
乌防 1∶ 2 20 1. 213± 0. 154△△▲
　　与 NS组比较: * * P < 0. 01; 与 Cyc模型组比较: △△ P < 0. 01;
与川乌组比较: ▲ P < 0. 05　▲▲ P < 0. 01
　　* * P < 0. 01 vs N S group; △△ P < 0. 01 vs Cyc model group;
▲ P < 0. 05　▲▲ P < 0. 01 vs RA group
表 5　乌防配伍前后对小鼠溶血素生成的影响
Table 5　 Inf luence of production of hemolysin in mice
before and af ter compatibility of RA and RST
组　别 剂量 / ( g· k g- 1 ) A值
Cyc阳性 0. 01 　　　　 0. 124± 0. 092*
N S - 0. 264± 0. 143
川乌 20 0. 330± 0. 140
防己 20 0. 646± 0. 296* *
乌防 1∶ 1 20 0. 326± 0. 170△△
乌防 1∶ 2 20 0. 405± 0. 182△
　　与 N S组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01; 与防己组比较: △ P <
0. 05　△△ P < 0. 01
　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01 vs NS g rou p; △ P < 0. 05　△△ P <
0. 01 vs RST group
4　讨论
　　类风湿性关节炎 (风湿痹证 )等慢性关节炎炎症
的发病机制与机体免疫调节紊乱密切相关。单独应
用抗炎药、免疫抑制药或免疫增强药 ,疗效均欠佳 ,
长期应用还可能加重病情 ,延长病程 [ 11]。现代医学
逐渐重视抗炎免疫调节药物的研究 ,但至今未取得
突破性进展 ,因此 ,寻找抗炎免疫调节药是抗炎药理
的重要发展方向之一 [11 ]。
中药的多重生物活性以及药物配伍 ,在治疗免
疫功能紊乱的慢性炎症疾病方面具有突出的优势。
其机制在于调整阴阳寒热 ,疏通气血经络 [1 ]。本研究
已初步发现寒热配伍对免疫功能有较为明显的调节
作用。表现为乌防配伍对细胞免疫有较明显的抑制
和促进双向作用 ,而各单味药未表现明显作用。另外
乌防配伍后 ,能显著抑制单味防己对特异性体液免
疫的促进作用 ,表现出明显的调节单味药的作用。说
明乌防配伍能抑制机体对免疫复合物的超敏反应 ,
但无广范围的免疫抑制或影响作用。以上作用可能
是乌防配伍在痹证治疗中能够提高抗炎作用、缩短
病程、降低毒副作用的重要药理机制之一。上述研究
所体现的免疫调节机制值得进一步深入探讨。
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·932· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月