全 文 ：·1490· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年lo月
渡数／cm—o
圈3 POJ的IR圈谱
Fig．31RspectrumofPOJ
因为这在果聚糖中较为常见。
References：
[1]ZhouYH，XuDS．FengY，甜a1．Effectsollnutritionbl od
flowofcardiacmuscleinmicebydifferentextractsinRadix
Ophiopogonis[『]．ChinJ最砧TraditMedForm<中国实验方
卉吐学杂志)，2003，9(1)，22—24．
[2]xuDS，FengY，ZhouYH．eta1．Activecomponentsof
polysaecharideofOphiopogon如ponicusonacutemyocardial
ischemia[J]．ChinTraditPatMedf中成药)，2004，26
r10、：832837
～蛾一一～I‘葡—面可
腰4 POJ的’H—NMR腰港
Flg．41H-NMRspectrumofpoJ
[3]Hua“gY，WashloY，H叫BM，“a1．Simu|taneousdet r
minationofdermatansulfatendoversulfateddermatansuIfate
inplasmabyhigh—perfornmnceliquidchromatographywith
postcolumnfluorescenced rivatization[J]．AnalBiochem，
1996．240：227—234．
[4]ghangWJ．BicwhemicalTe hn甜ogyfCompoundPoO—
saccharidef复合多糖生化技术)[M]，ShanghaitShanghai
&kntlfleandTecheIcalPub|ishef8，L987．
树脂法分离纯化喜树果中喜果苷的研究
欧来良‘，王瑞芳2，史作清“，仇农学2
(1．南开大学生物活性材料教育部重点实验室，分子生物研究所+天津300071
2，陕西师范大学食品系，陕西西安710004)
自从1966年Wall等首次从喜树中分离出喜树
碱并发现其具有显著抗癌活性后o]，至今已有20多
种化学成分从中分离出来，包括喜树碱
(camptotheeine，CPT)、lO一羟基喜树碱、11一羟基喜
树碱、10一甲氧基喜树碱、喜树次碱、自桦脂酸、喜果
苷(vincoside—lactamVCS—LT)等o’3]。人工合成也
取得了可喜的进展n]。研究发现喜树果中喜果苷明
显高于喜树碱及其他类似物[s]。目前由喜树果中分
离提取喜果苷采用溶剂萃取和氧化铝柱色谱法，过
程复杂，收率很低，且尚处于实验室阶段。太孔树脂
具有理化性质稳定、吸附选择性独特，吸附效率高、
易再生等优点。本实验采用树脂吸附分离法从喜树
果中分离纯化喜果苷。
1材料与仪器
乙腈(色谱纯)，喜树果由四川雅达药业公司提
供，产地为广西，经鉴定符合《广西中药材标准》1990
年版“喜树果”项下规定；喜树碱对照品(质量分数为
98％，ACROSorganics)}喜果苷对照品(自制，质量
分数>98．5％)；ME一1、ME一3树脂(天津欧瑞生物
科技有发公司)。
Waters484高效液相色谱仪(美国Waters公
司)，HL一2恒流泵(上海沪西仪器厂)，Bsz一2型
部分收集器上海沪西仪器厂)，THZ88—1台式多用
恒温震荡器(江苏太仓鹿河生化仪器厂)，真空干燥
箱(天津实验仪器厂)，DT一100A型分析天平(北京
光学仪器厂)。
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱：KromasilC，8柱(1fi0mm×
4．6mm，5pm)‘流动相：30％乙腈水溶液；体积流
量：0．8mL／min；紫外检测波长：256nm。
2．2标准曲线的制备
2．z．1喜果苷标准曲线的制备：精密称取喜果苷对
照品10．2mg，用50％乙醇溶液定容于50mI。量瓶
中。精密吸取0．5、1、2、4、8mL此溶液分别置于10
警銎最奢；眢茹翟蒙磊学基金赘助项目(29。，。。，。，
堂翥票荏害‘答辩嚣’讲师。Td“022、23500660E。m赫hou讲1@⋯h“edu’姐
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年】0月·1491·
mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条
件进样，测定。以质量浓度对峰面积进行线性回归，
结果喜果苷的标准曲线方程为c=1．08172×10_5
A一2．24386，r一0．99975，表明喜果苷在10～200
／tg／mL与峰面积的线性关系良好。
2．2．2喜树碱标准曲线的制备：精密称取喜树碱对
照品12．0mg，用甲醇一氯仿(1：1)定容于50mL量瓶中。精密吸取0．5、1⋯248mL此溶液分别置手
10mI。量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色
谱条件进样，测定。以质量浓度对晦面积进行线性回
归，结果喜树碱的标准曲线方程为C一5．3314×
10 A一0．14172，r一0．99942。表明喜树碱在
12～240}tg／mI。内峰面积呈良好的线性关系。喜果
苷和喜树碱对照品的高效液相色谱图谱见图1。
2
1一吾辩碱2一鲁粜哥
1-cPT2一VCS—LT
圈1鲁果苷和喜树碱对照品的HPLC圈
Fig．1HPLCchromatogramsfcamptotheclnand
vlncoslde—lactamreferencesubstance
2．3喜树果粗提液的制备：100g喜树果粉以50％
乙醇溶液80C回流提取3次，提取液浓缩，冷却后
滤过，得透明粗提液。HPLC检测发现，提取液中含
大量杂质，其有效成分主要有两种：喜树碱(保留时
间7min左右)和喜果苷(保留时间13min左右)，
喜果苷的质量分数为1．524％。见图2。
o 5 Io 15
t，mm
l喜树碱2鲁采苷
I-CPT2-VCS—LT
圈2喜树果粗摄液的HPLC谱豳
Fig．2Chromatogramofcrudeextractsolution
2．4喜果苷的初步纯化；喜树果粗提液上ME—l树
脂柱(内径为1．5cm，树脂为3．5mI。)。先用30％乙
醇溶液洗柱以去除大量杂质，再用50％～60％乙醇
淋洗，收集流出液。初步纯化后，大量杂质已被有效
除去，有效成分保留下来，喜果苷的质量分数提高到
21．52％。见图3。
o———1————丽 ’i5
，／min
1一喜树碱2-喜果苷
1一CPT2-VCS—I，T
圈3 ME-1树脂提纯液的HPLC谱圈
Fig·3ChromatogramsfsolutionrefinedbyME一1
2．5喜果苷的进一步纯化：ME—l树脂的淋洗液直
接上ME一3树脂柱(内径1．0cm，树脂25mI。)吸
附。在吸附过程中，喜果苷迅速泄漏(oBV处)．且泄
漏曲线迅速趋平，喜树碱在25BV处才开始泄漏，
且泄漏浓度慢慢上升。见图4。若收集o～25BV的
流出液，可以得到质量分数更高的喜果苷溶液，其质
量分数提高至60％左右。见图5。
、 ，／rain
1一喜树碱2一喜果苷
iCPT0VCSLT
田5 ME·3树脂提纯液的HPLC谱圈
FIg·5ChromatogramofsolutionrefinedbyME一3
万方数据
·1492‘ 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第io期2005年lo月
2．6喜果苷晶体的制备：喜果苷的收集液经旋蒸浓
缩至析出少量固体。放置冷却析出大量针状晶体，滤
过。针晶用50％乙醇溶液超声溶解，滤过，滤液旋蒸
浓缩，多次重结晶后，晶体由淡黄色变为无色。最后
将无色针晶晾干，50c真空抽干至恒重。收率为
0．03％，质量分数达99％。
3讨论
ME一1树脂可有效除去喜树果提取液中的杂
质，使喜果苷的质量分数由1．524％提高至
21．52％，再经ME一3树脂吸附，喜树碱及其类似物
也被有效去除，喜果苷的质量百分数可进一步提高到
60％左右，最后经重结晶得到喜果苷晶体。此法提取
工艺简单，收率较高(90％以上)，利于工业化生产。
References：
[1]WallME，waniMC．CookCE，“a1．Theisolationand
s仃ucturt0fcamptothecin⋯oveIMka／ ida】kukethiaand
tuthorinhibitorfromCamptothecaacuminata．[J]．．，Am
ChinSee，1966‘88(16)：3888—3889．
[2]LinLz，SongCQ，xuRS，Theisolationandidentification
of11hydroxyeamptothecin[J]．ActaChemSin(化学学报)，
1982．40(1)：88—88．
r31I。inI．Z．ZhaoZY，XuRS．Thechemiealconstituentsinroot
ofCamptothecaacuminata[J]．ActaChemSin(化学学报)，
1977，35(3．4)：227—230．
[4]FengJc，ZhangSHtTanYD，eta1．Thed velopmentin
reBearchoncampto—thecaacumin8taandutilizationof
camptothecinEJ]．SciSilvaeSin(林业科学)，2000·36(5)：
100—108．
[5]WangRF，ShizQ，ShiRF．Chromatographicsep rationof
camptothecineandvincoside—laetamwLth macroporous
hypercross[inkedresi s[J]．／onExchangeAdsorp(离子交换
与吸附)．2002，18(9)：412-418．
高速逆流色谱分离茶叶中咖啡因和茶碱
陆向红1，王定海1，
(1．浙江工业大学化学工程与材料学院，浙江杭州
计建炳1，任其龙2．昊平东2
310014l2，浙江大学材料与化学工程学院，浙江杭州 310027)
高速逆流色谱(high—speedcountereUrrent
chromatography，HsCCC)是利用多层螺旋管行星
式运动形成的特殊离心力场来实现两溶剂相在管柱
里的单向性流体动力学分布状态，以使流动相在高
速穿过管拄时保证固定相在管柱里达到较高的保留
值，同时促进了两相间的充分混合和逆流传递。这种
分离体系对不同物理性质的广泛溶剂系统具有较强
的适应性，能够采用多样的体系条件和操作方式，因
此逆流色谱在稀有金属、天然药物以及蛋白质的分
离、纯化等很多方面有广泛的应用“”]。本实验采用
HSCCC对茶叶中咖啡因和茶碱实现分离，同时考察
相关因素的影响。
1仪器与材料
IV型同步行星式高速逆流色谱仪，浙江大学二
次资源国家专业实验室自制。色谱柱采用多层内径
为2mm的聚四氟乙烯螺旋管，色谱柱容量为270
mL，仪器的半径为10cm，p一0．5～1．5，仪器的转
速为o～1500r／min。HPuV一8452型紫外分光光
度计，高压平流计量泵(杭州前进石油机械厂)。
咖啡因和茶碱均为生化级别，购自于Sigma公
司；氯仿为分析纯，水由NAN0pureultrapure
watersystem(BarmsteasUSA)制备。
收稿日期：2004—12-21
2方法与结果
2．1标准曲线制备：各称取20mg咖啡因和茶碱
对照品，分别用水溶解并转移到2个100mL量瓶
中，加水至刻度。分别稀释成10、15、20、25、30、45、
50、60、80、90、100、120、160、180、200pg／mL的溶
液，在254nm下测定吸光度。以质量浓度(c)对吸
光度(A)作图，得到咖啡因和茶碱的标准曲线，通过
最小二乘法关联实验数据，得到咖啡因和茶碱的标
准曲线方程。咖啡因：C一54．44A，R2—0．9993。茶
碱：c一45．07A，R2—0．9990。
2．2溶剂系统的配制t将等体积的氯仿和水在分液
漏斗中剧烈振荡摇匀，使两相达到平衡，静置分层，
下相(氯仿相)为流动相，上相(水相)为固定相。
2．3样品溶液的配制：准确称取咖啡因和茶碱对照
品各100mg，并用等体积的上下两相溶解，配制成
50mg／mL的混合溶液。
2．4逆流色谱分离咖啡因和茶碱的操作：用计量泵
将固定相注满螺旋管后开启直流电机，并调至某一
转速，以一定流量从首端泵人流动相，在色谱柱尾端
用量筒接受流出的固定相；待色谱柱尾端不再有固
定相流出时，表明系统已稳定，量出流出的固定相体
积，计算在此条件下的固定相保留率，进样0．7mL，
万方数据
树脂法分离纯化喜树果中喜果苷的研究
作者： 欧来良， 王瑞芳， 史作清， 仇农学
作者单位： 欧来良,史作清(南开大学,生物活性材料教育部重点实验室,分子生物研究所,天津,300071)
， 王瑞芳,仇农学(陕西师范大学,食品系,陕西,西安,710004)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(10)

参考文献(5条)
1.Wall M E;Wani M C;Cook C E The isolation and structure of camptothecin,a novel alkaloidal
leukethia and tuthor inhibitor from Camptotheca acuminata[外文期刊] 1966(16)
2.Lin L Z;Song C Q;Xu R S The isolation and identification of 11-hydroxy camptothecin 1982(01)
3.Lin L Z;Zhao Z Y;Xu R S The chemical constituents in root of Camptotheca acuminata 1977(3,4)
4.Feng J C;Zhang S H;Tan Y D The development in research on eampto-theca acuminata and utilization
of camptothecin[期刊论文]-林业科学 2000(05)
5.Wang R F;Shi Z Q;Shi R F Chromatographic separation of camptothecine and vincoside-lactam with
macroporous hypercrosslinked resins[期刊论文]-离子交换与吸附 2002(05)

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