全 文 ：表 3。乙醇组和对照组相比 ,错误次数显著增多 ,跳
台潜伏期明显缩短 ( P < 0. 01)。不同浓度的夏天无
口服液及胶囊剂组与乙醇组比较 ,可不同程度减少
跳台错误次数及延长跳台潜伏期。夏天无 1 mg /kg
以上可显著改善小鼠学习记忆能力 ( P < 0. 05)。
表 3　夏天无对乙醇造成记忆再现障碍小鼠
跳台实验的影响 (x± s)
Table 3　 Effects of RCD on ethanol induced memory
retrieval balk in step-down test in mice ( x± s )
组　别 剂　量
/ ( mg· kg- 1 )动物数 错误次数 /次 潜伏期 / s
对　照 - 12 0. 25± 0. 45* * 149. 42± 66. 03* *
模　型 - 12 2. 83± 1. 95 54. 83± 55. 77
双益平 0. 4 12 2. 25± 2. 05 69. 58± 70. 69
口服液 0. 5 11 1. 36± 1. 63 73. 36± 62. 38
1. 0 11 1. 27± 0. 90* 93. 36± 65. 44
2. 0 11 0. 64± 0. 81* * 131. 27± 70. 50* *
胶囊剂 0. 5 11 1. 73± 1. 85 94. 55± 80. 95
1. 0 11 1. 27± 1. 85 116. 36± 78. 87*
2. 0 12 0. 73± 1. 27* * 133. 64± 68. 89* *
　　与模型组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
　　 * P < 0. 05　* * P < 0. 01 vs m odel group
4　讨论
　　中枢胆碱能系统是学习记忆的重要生理基础 ,
人衰老过程及血管性痴呆病程中伴有的记忆减退主
要是由于胆碱能系统的全面衰退 [1 ] ,脑内 Ach含量
降低 , AchE活性升高 ,胆碱乙酰转移酶活性降低 ,
M和 N胆碱受体数量减少均可能造成学习记忆障
碍。 东莨菪碱是中枢 M胆碱受体拮抗剂 ,可阻断
M1和 M2受体 ,降低海马中乙酰胆碱含量 ,使记忆形
成过程发生障碍 [7 ] ,本实验中小鼠 ip 2 mg /kg东莨
菪碱出现了明显的记忆障碍 ,而夏天无制剂可明显
拮抗东莨菪碱引起的小鼠记忆获得障碍 ,并能显著
降低小鼠脑内 AchE的活性 ,提示夏天无可能是一
种 AchE抑制剂 ,而其促智作用的原理是通过影响
中枢胆碱能神经系统的功能实现的。
乙醇影响记忆的机制较复杂 ,涉及到脑内蛋白
质、 RNA、胆碱能及多巴胺等方面 [8 ] ,所以很难作出
进一步分析。至于夏天无改善学习记忆的确切作用
机制 ,有待进一步研究。
综上所述 ,夏天无具有显著的促智作用。夏天无
可能作为一种治疗老年性痴呆的新药应用于临床。
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活血化瘀注射液对急性重型胰腺炎大鼠
小肠 CD11b /CD18表达的影响
张艳军 1 ,金　华 1 ,赵连根 2 ,吴咸中 2
( 1. 天津中医学院 中药系 ,天津　 300193; 2. 天津市中西医结合急腹症研究所 ,天津　 300100)
　　活血化瘀注射液 ( HHI-Ⅰ ) 可改善犬肠、胰腺
的血液动力学 ,并证实与抑酶注射液 ( YHI)合用能
延长急性重型胰腺炎 ( SAP)家兔存活时间 ,提高存
活率 [ 1, 2 ]。 HHI-Ⅰ 可抑制 SAP大鼠白细胞在肠系
膜毛细血管后静脉的滚动、粘附 [3 ] ,笔者推测可能对
SAP病理生理过程中白细胞内皮细胞相互作用有
影响。白细胞与内皮细胞粘附以及经内皮迁移需要
粘附分子的表达 ,为揭示 HHI-Ⅰ 对粘附分子
·545·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
收稿日期: 2002-10-12
CD11b /CD18表达的影响进行了实验研究。
1　材料与方法
1. 1　试剂和药物: CD11b, CD18山羊抗鼠多克隆
抗体 (一抗 , Santa Cruz公司 ) ;生物素化兔抗山羊
IgG (二抗 , Vecto r公司 ) ;辣根酶标记链亲合素 (三
抗 , Vector公司 ) ; OCT包埋剂、 DAB、封闭用兔血
清工作液 (北京中山公司 ) ; Tris, 30% 过氧化氢
(医科院血研所科技公司 ) ;牛黄胆酸钠 ( Sigma公
司 ) ; HHI-Ⅰ 由南开医院药厂制备 ;复方丹参注射
液由上海第一生化制药公司生产 ,批号 971002。
1. 2　实验动物与分组: 健康 Wistar大鼠 (购于军
事医学科学院四所 ) 160只 ,体重 220～ 300 g ,雌雄
各半。在实验动物室适应环境 1周后开始实验。将
实验动物随机分为假手术对照组 (n= 10) , SAP模
型组 (n= 50) , SAP+ HHI-Ⅰ 组 (n= 50) , S AP+ 复
方丹参注射液组 (n= 50) ,后 3组又分为 1, 3, 6,
12, 24 h亚组 ,每亚组 10只。
1. 3　检测指标: 免疫组织化学方法检测各组动物胰
腺、小肠组织 CD11b, CD18的表达。 40× 10视野下
每一切片随机观察 5个视野 ,记录每个视野下阳性白
细胞数 ,以其平均数表示 CD11b, CD18的表达情况。
1. 4　实验方法:实验前禁食 1夜。实验日将大鼠以
20% 乌拉坦 0. 5 mL /kg麻醉。 无菌条件下进行手
术 ,右颈静脉插管 ( PE50医用塑料管 ,内径 0. 5
mm,外径 0. 8 mm,日本夏目制作所制 ) 以备输液
用。开腹 ,其中 SAP组、 SAP+ HHI-Ⅰ 组、 SAP+ 丹
参组结扎大鼠总胆管 ,经十二指肠乳头将 PE50医
用塑料管插入胆胰管 0. 5 cm,逆行注入 5% 牛磺胆
酸钠溶液 0. 1 mL / ( 100 g· min) ,制造 SAP模型 ,
注射完毕后松开结扎总胆管的丝线。 随即用微量蠕
动泵分别经颈静脉插管输入生理盐水、 HHI-Ⅰ 和
复方丹参注射液 , 2 mL /h,给药剂量按 60 kg成人
每公斤体重剂量的 15倍换算。各亚组分别于 1, 3, 6,
12, 24 h颈椎脱臼处死大鼠。 假手术组不复制 SAP
模型 ,仅经颈静脉输入生理盐水 , 12 h后颈椎脱臼处
死。 动物处死后取胰腺、小肠 , OCT包埋 ,液氮冷冻
30 s, - 25℃ 保存 ,以备免疫组织化学检测。
1. 5　免疫组织化学检测: 将 O CT包埋的组织做 8
μm的冰冻切片 , 4℃ 冷丙酮固定后 , - 25℃ 保存 ,
以备免疫组织化学染色。 过程如下:切片恢复室温 ,
TAB ( 0. 05 mol /L, pH 7. 4)洗 5 min× 2次 ,以含
0. 3% 过氧化氢的 TBS室温孵育 20～ 30 min,以消
除内源性过氧化物酶的活性 ;蒸馏水冲洗 , TBS洗 5
min× 2次 ; 5% 正常兔血清 ( TBS稀释 )封闭 ,室温
湿盒内孵育 30 min;倾去血清 ,分别滴加适当比例
稀释 ( 1∶ 50～ 200, TBS稀释 )的一抗 , 4℃ 湿盒内
过夜 ; TBS洗 5 min× 3次 ,滴加适当比例稀释 ( 1∶
100, TBS稀释 )的二抗 ,室温湿盒内孵育 1 h; T AB
洗 5 min× 3次 ,滴加适当比例稀释 ( 1∶ 100, TBS
稀释 )三抗 ,室温湿盒内孵育 1 h; TBS洗 5 min× 3
次 , DAB显色 ;自来水充分冲洗 ,复染 ,封片。
1. 6　统计学处理:方差分析 , F检验。
2　结果
　　各组小肠 CD11b, CD18表达情况:见表 1和 2。
CD11b, CD18在假手术组小肠仅有散在少量表达 ;
CD11b, CD18在 SAP组小肠 3, 6 h , 6, 12 h时间段
之间相比 ,有显著或非常显著性差异 ( P < 0. 05,
0. 01) ,至 24 h仍保持高表达水平。表达细胞主要为
嗜中性粒细胞 ,还有部分单核细胞 ; SAP+ 丹参组表
达趋势与 SAP组没有显著差异 ; SAP+ HHI-Ⅰ 组
CD11b, CD18表达与 SAP组、 SAP+ 丹参组相比显
著减少 ,接近假手术组。
3　讨论
　　白细胞内皮细胞粘附是白细胞向炎症部位聚集
并造成组织损伤的关键步骤 ,白细胞和内皮细胞表
面表达的粘附分子是白细胞粘附到血管内皮细胞以
及白细胞跨内皮移行到炎症部位的分子基础。这一
过程被白细胞、内皮细胞表面表达的不同家族的粘
表 1　各组动物小肠组织 CD11b表达情况
Table 1　 Expression of CD11b in small intestine of each animal group
组　别 阳性细胞 /视野
1 h 3 h 6 h 12 h 24 h
假手术 　　　　　 - 　　　　　 - 　　　　　 - 　　　 3. 7± 2. 2* * 　　　　　 -
SAP 　　　 5. 9± 3. 8 　　　 12. 5± 3. 9△ 　　　 28. 9± 6. 8△△ 47. 5± 16. 9△△ 　　　 50. 7± 14. 6
SAP+ 丹参 6. 3± 4. 4 12. 1± 5. 1 24. 3± 6. 7 45. 4± 9. 2 50. 2± 10. 3
SAP+ HHI-Ⅰ 3. 4± 2. 2 3. 6± 2. 5▲ 4. 5± 2. 7▲▲ 7. 3± 3. 0▲▲ 7. 0± 4. 3▲▲
　　与 SAP组、 SAP+ 丹参组 3 h以后时间段比较: * * P < 0. 01;　与同组前一时间段相比: △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01;　与 SAP组、 SAP+
丹参组同一时间段比较: ▲ P < 0. 05　▲▲ P < 0. 01
　　* * P < 0. 01 vs SAP g rou p and SAP+ Danshen g rou p af ter 3 h;　△ P < 0. 05　△△ P < 0. 01 vs same group prophase;　▲ P < 0. 05　▲▲ P <
0. 01 vs SAP g roup and SAP+ Dansh en g rou p at same tim e
·546· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
表 2　各组动物小肠组织 CD18表达情况
Table 1　 Expression of CD18 in small intest ine of each animal group
组　别 阳性细胞 /视野
1 h 3 h 6 h 12 h 24 h
假手术 　　　　　 - 　　　　　 - 　　　　　 - 　　　 5. 2± 3. 4* * 　　　　　 -
SAP 　　　 8. 0± 4. 2 　　　 14. 7± 4. 7△ 　　　 33. 6± 8. 7△△ 52. 7± 14. 1△△ 　　　 57. 1± 13. 6
SAP+ 丹参 7. 6± 4. 8 14. 2± 5. 8 26. 7± 6. 2 46. 3± 8. 4 51. 4± 9. 2
SAP+ HHI-Ⅰ 5. 1± 2. 8 5. 4± 3. 0▲▲ 5. 5± 4. 4▲▲ 7. 1± 4. 4▲▲ 7. 4± 4. 6▲▲
　　与 SAP组、 SAP+ 丹参组 3 h以后时间段比较: * * P < 0. 01;　同组前一时间段相比: △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01;　与 SAP组、 SAP+ 丹
参组同一时间段比较: ▲ P < 0. 05　▲▲ P < 0. 01
　　* * P < 0. 01 vs SAP g rou p and SAP+ Danshen g rou p af ter 3 h;　△ P < 0. 05　△△ P < 0. 01 vs same group prophase;　▲ P < 0. 05　▲▲ P <
0. 01 vs SAP g roup and SAP+ Dansh en g rou p at same tim e
附分子的连续活化所调节 ,主要包括选择素家族、整
合素家族和免疫球蛋白超家族 [4 ]。白细胞能表达 13
种不同的整合素 ,其中 β 2-整合素为重要的白细胞
内皮细胞粘附分子。 β 2-整合素主要包括 CD11a /
CD18, CD11b /CD18等。
SAP所致胰外脏器损害的共同特征是受损脏
器中有大量的中性粒细胞浸润 ,大量研究表明 ,肠道
白细胞聚集在肠道功能障碍病理生理过程中起重要
作用。白细胞与肠道微血管内皮细胞过度粘附 ,在肠
组织中大量聚集 ,产生大量炎性介质和细胞因子 ,损
伤内皮细胞 ,导致内皮屏障功能障碍 ,破坏粘膜屏障
的完整性。由于白细胞内皮细胞过度粘附可导致明
显的微循环障碍 ,基于现代医学对中医血瘀和血瘀
证的大量研究 ,血瘀证的主要病理基础是微循环障
碍 ,血瘀与现代医学的微循环障碍症以及活血化瘀
疗效与现代医学微循环障碍的改善关系密切。所以 ,
我们明确提出抗白细胞内皮细胞过度粘附可能为活
血化瘀中药的作用机制之一。 HHI-Ⅰ 是我们将临
床治疗 SAP有效方剂中的活血化瘀药 ,通过正交设
计 ,筛选出最有效药物组分 ,制成的静脉注射剂 ,主
要由桃仁、赤芍等提取物组成 ,以往研究表明 ,
HHI-Ⅰ 可抑制急性重型胰腺炎大鼠白细胞在肠系
膜毛细血管后静脉的滚动、粘附。 本实验结果表明 ,
HHI-Ⅰ 能够抑制 SAP病理生理过程中 CD11b,
CD18过度表达 ,提示 HHI-Ⅰ 通过抑制粘附分子的
过度表达从而抑制白细胞内皮细胞的过度粘附 ,显
示出良好的应用前景。
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山东药圣生物科技 (平邑 )有限公司荣誉推出“药圣 1+ 1○R天然澄清剂”
　　“药圣 1+ 1○R天然澄清剂”主要用于: 1. 传统中药“水提醇沉”工艺中乙醇的替代 ; 2. 传统中药提取物 (如银杏叶干浸膏、山
楂叶黄酮、叶绿素等 )工艺中有机溶媒的水溶媒替代 ; 3. 中药水针、粉针、冻干粉针的澄清处理 ; 4. 无菌、无热原的中医药原料、
生化原料澄清处理 ; 5. 中草药、生化药品、保健食品、口服液、果汁、茶饮料、啤酒等产品的澄清处理 ; 6. 氨基酸类、维生素类、有
机酸类、抗生素类发酵液的澄清处理 ; 7. 对重金属污染的工业废液 (水 )及其他工业废水的澄清处理 ; 8. 对出口食品、药品、药
材、保健品重金属农药残留超标的有效处理。
收得率分别提高 30% ～ 10倍 ;含量提高 10% ～ 50% ;工厂成本下降 30% ～ 80% ;还生产硫酸软骨素、黄连素系列、注射用
黄芩苷 ( 95% ) ,双花连翘苷 ,银杏叶干浸膏、丹参素、丹参川芎浸膏等 ,以及口服级中药提取物 ,亦可根据客户要求生产。
地址: 山东平邑县浚河路 78号　　　　电话: 0539-4088727　 13355026077　　　　传真: 0539-4089366
四川地址 :青神县用九大厦三楼　　　 电话 (传真 ): 0833-8811413　 13568248000　 13890355787
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