全 文 ：见表 2。结果表明, 离体条件下 H SYA 抑制小鼠肝
匀浆脂质过氧化的作用呈明显的量效关系。
表 2　HSYA 对小鼠肝匀浆脂质过氧化的
抑制作用 (x±s, n= 3)
Table 2　Inh ibitory effect of HSYA on l iver hemogenate
l ip id perox idation in m ice (x±s, n= 3)
组别 浓度ö(Λmo l·L - 1) A 532 I 1ö%
对照 - 　 11856±01056 -
H SYA 179 11808±01056 216
358 11573±010723 3 3 1512
716 11216±010323 3 3 3415
1 073 11036±010103 3 3 4412
1 431 01930±010233 3 3 4919
1 789 01808±010393 3 3 5615
　　与对照管比较: 3 3 3 P < 01001
　　3 3 3 P < 01001 vs con tro l tube
313　H SYA 抑制羟自由基引发的红细胞膜破裂作
用: 见表 3。结果表明, 离体条件下 H SYA 抑制羟自
由基诱发红细胞膜破裂的作用呈明显量效关系。
表 3　HSYA 对羟自由基引发的红细胞膜
破裂的抑制作用 (x±s, n= 3)
Table 3　Inh ibitory effect of HSYA on hemo-
cytocatheresis a ttenuation induced
by hydroxyl rad ica l (x±s, n= 3)
组别 浓度ö(Λmo l·L - 1) A 500 I 2ö%
对照 - 01445±01016 -
H SYA 27410 01411±01018 716
41111 01367±010383 1715
54811 01317±010233 3 2818
68511 01302±010713 3 3 3211
　　与对照管比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001 vs con tro l tube
4　讨论
　　临床上红花以水煎液入药, 可治疗多种血液循
环障碍性心脑血管疾病。在组织缺血2再灌注、炎症
反应等过程中, 自由基反应为一重要的损伤机制。红
花水提液可清除自由基, 抑制脂质过氧化反应[1 ]。
H SYA 为红花主要水溶性有效成分, 其抗氧化作用
尚未见报道。
　　H 2O 2öFe2+ 体系可通过 Fen ton 反应产生羟自
由基, 引发脂质过氧化、蛋白质交联等反应, 造成细
胞膜破裂可导致组织坏死等后果。本实验结果表明
H SYA 可清除羟自由基、抑制脂质过氧化反应, 保
护细胞膜, 提示其为红花水溶性抗氧化有效成分。
H SYA 为查尔酮类结构, 其分子中含多个酚羟基,
其抗氧化药效可能与这些酚羟基的作用有关。在多
种血瘀病症中, 自由基反应对加剧血液循环障碍起
了重要的作用, 而红花有效成分 H SYA 的抗氧化效
应对其活血化瘀的作用具一定的贡献。
红花为常用活血化瘀药, 具抗血栓、抗心肌缺
血、改善微循环、抗氧化等多方面的药理作用。
H SYA 在红花中含量较高, 溶解度好, 在此基础上
开发新型心血管药物, 可望获得明显的经济与社会
效益。本研究对于进一步阐明红花活血化瘀作用机
制, 指导红花及其制剂的临床应用具重要的意义。
References:
[ 1 ]　J in M , L i J R , Cai Y X, et a l. A n tiox idative effect of aque2
ous componen t of Cartham us tinctorius L. [J ]1 J Card iovasc
P u lm D is (心肺血管病杂志) , 1998, 17 (4) : 27722791
[ 2 ]　Zang B X, J in M , Si N , et a l. A n tagon istic effect of hydro2
xysafflo r yellow A on the p latelet activating facto r recep to r
[J ]1 A cta P harm S in (药学学报) , 2002, 37 (9) : 69626991
[ 3 ]　J in M , Gao Z C, L i J R , et a l. P reparation of safflo r yellow
and hydroxy safflo r yellow A by m acropo rous resin co lum n
ch rom atography [J ]1 Ch in T rad it H erb D rug s (中草药) ,
2004, 35 (1) : 252281
[ 4 ]　J in M , Cai Y X, L i J R , et a l. 1, 102Phenan th ro line2Fe2+
ox idative assay of hydroxyl radical p roduced by H 2O 2öFe2+
[J ]1 P rog B iochem B iop hy s (生物化学与生物物理进展) ,
1996, 23 (6) : 55325551
清开灵有效组份对局灶性脑缺血大鼠脑组织
细胞间黏附分子表达的影响
徐丽荣1, 马世彬2, 李澎涛3, 唐启盛4Ξ
(11 北京中医药大学 中医内科, 北京　100029; 21 泰山医学院 免疫教研室, 山东 泰安　271000;
31 北京中医药大学基础医学院, 北京　100029; 41 北京中医药大学东方医院, 北京　100078)
　　脑缺血后脑组织的炎症损伤反应因其预后差, 死亡率高, 而日益受到人们的关注, 已成为该领域的
·666· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003209225
基金项目: 国家重点基础研究发展规划项目 (973) 课题 (G1999054404)
作者简介: 徐丽荣 (1972—) , 女, 黑龙江人, 讲师, 现为北京中医药大学 2001 级中医内科脑病专业博士研究生, 主要从事中药对缺血性中
风干预作用的实验研究。E2m ail: m axu lirong@yahoo. com
研究热点。此炎症反应是以脑微血管内白细胞聚集
并穿越血管壁, 浸润脑组织, 同时伴有微血管功能紊
乱, 局部脑组织中液体和血浆蛋白积聚为标志的急
性炎症。白细胞转化为病源性细胞之前, 必须与内皮
紧密相连, 只有当白细胞表面糖蛋白与内皮表面黏
附分子相互作用后, 方可与内皮紧密结合, 快速进入
脑实质。可见, 循环中的白细胞黏附至微血管内皮起
始了炎症反应, 是脑组织炎性损伤的前提条件。清开
灵注射液清热解毒, 用于治疗脑血管疾病取得了很
好的疗效[1 ] , 本实验观察清开灵注射液的有效组份
对脑缺血大鼠脑组织相关细胞黏附分子表达的影
响, 以探讨其对缺血后脑组织炎症反应的干预作用。
1　材料与方法
111　动物模型制备与分组: 健康雄性 SD 大鼠, 体
重 300～ 350 g, 购自维通利华实验动物中心。动物
按缺血 12 h 和 24 h 两个时间点随机分为两大组,
每大组又分为模型组、合方组、栀子苷组、黄芩苷组、
胆酸组、珍珠母水解液组, 另设 2 个正常组作为相
应时段的对照组, 共 14 组; 根据 L onga 等[2 ]报道的
线栓法建立左侧大脑中动脉 (M CAO ) 缺血模型,
待清醒后, 参照Bederson 等[3 ]评分方法选择入组大
鼠, 每组 10 只。
112　药物及给药方式: 以清开灵注射液有效组份栀
子苷、黄芩苷、胆酸、珍珠母制成 4 个注射液, 分别是
胆酸注射液 (7 m gömL )、黄芩苷注射液 (5 m gö
mL )、栀子苷注射液 (25 m gömL )、珍珠母水解液
(50 m gömL ) , 合方为将以上 4 种组份按单组份含量
等体积混合而成, 以上注射液由本课题组提供; 将临
床常用量据体表面积折算后按 013 mL ö100 g 给
药, 用生理盐水稀释相应药液至 019 mL ö100 g。缺
血 12 h 用药组于线栓前 1 h 第 1 次 ip 给药, 线栓
后 4 h 第 2 次 ip 给药; 缺血 24 h 用药组于线栓前 1
h 第 1 次 ip 给药, 线栓后 4 h 第 2 次 ip 给药, 12 h
第 3 次 ip 给药。模型组与对照组于相应时间 ip 等
量生理盐水。
113　标本留取: 按分组规定的时间以 10% 水合氯
醛麻醉断头, 于冰盘上剥离软脑膜, 吸净表面血液,
取视交叉处至小脑前部缺血侧大脑, 称质量, 以冷生
理盐水研磨成 40% 脑组织匀浆, 15 000 röm in 低温
离心机 4 ℃ 离心 10 m in, 取上清液。
114　细胞间黏附分子21 ( ICAM 21) 和 E2选择素
(E2select in ) 的 EL ISA 法测定: 试剂盒购自美国
TB I 公司, 按盒内说明书操作。
115　数据统计: 数据用 x ±s 表示, 行组间 t 检验。
2　结果
211　脑缺血不同时段缺血脑组织 ICAM 21 的表
达: 见表 1。脑缺血 12, 24 h 时, 模型组大鼠脑组织
ICAM 21 表达水平均高于正常组 (P < 0105, 0101)。
缺血 12 h, 珍珠母组、黄芩苷组及合方组 ICAM 21
水平低于模型组 (P < 0105, 0101) , 且黄芩苷组
ICAM 21 表达水平低于正常组 (P < 0101) , 说明在
此时段珍珠母及合方可阻抑脑组织中 ICAM 21 高
表达, 黄芩苷作用更显著, 可使其表达低于正常水
平; 脑缺血 24 h, 除合方组外各用药组 ICAM 21 表
达水平均低于模型组 (P < 0101) , 提示相应组份在
此时段均有阻抑 ICAM 21 高表达的作用。
表 1　缺血脑组织 ICAM -1 的表达水平 (x±s, n= 10)
Table 1　Expression of ICAM -1 in tissue of
cerebra l ischem ia (x±s, n= 10)
组别 剂　量
ICAM 21ö(ng·mL - 1)
缺血 12 h 缺血 24 h
正常 　　　- 01688±01209 11110±01369
模型 　　　- 01861±01109△ 11670±01318△△
珍珠母 150 m g·kg- 1 01737±011353 01971±012963 3
栀子苷 75 m g·kg- 1 01848±01135△ 01852±012383 3
胆酸 21 m g·kg- 1 01795±01250 01919±010743 3
黄芩苷 15 m g·kg- 1 01269±01117△△3 3 11030±012083 3
合方 3 mL ·kg- 1 01598±010673 3 11530±01350△△
　　与正常组比较: △P < 0105　△△P < 0101
　　与模型组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101
　　△P < 0105　△△P < 0101 vs no rm al group
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs model group
212　脑缺血不同时段缺血脑组织 E2select in 的表
达: 见表 2。脑缺血后 12, 24 h, 模型组大鼠脑组织
E2select in 表达水平高于正常组 (P < 0105, 0101)。
缺血 12 h, 栀子苷组、胆酸组、黄芩苷组及合方组脑
组织 E2select in 水平低于模型组 (P < 0105, 0101) ,
表 2　缺血脑组织 E- selectin 的表达水平 (x±s, n= 10)
Table 2　Expression of E- selectin in tissue
of cerebra l ischem ia (x±s, n= 10)
组别 剂　量
E2selectinö(ng·mL - 1)
缺血 12 h 缺血 24 h
正常 　　　- 22186±2189 13106±2194
模型 　　　- 26174±2159△△ 16187±4143△
珍珠母 150 m g·kg- 1 26192±4197△ 15136±3165
栀子苷 75 m g·kg- 1 23156±31643 8142±2106△△3 3
胆酸 21 m g·kg- 1 23140±31633 10154±1180△3 3
黄芩苷 15 m g·kg- 1 17112±2110△△3 3 12195±31263
合方 3 mL ·kg- 1 21118±21343 3 11154±11713 3
　　与正常组比较: △P < 0105　△△P < 0101
　　与模型组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101
　　△P < 0105　△△P < 0101 vs no rm al group
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs model group
·766·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
且黄芩苷组 E2select in 表达水平低于正常组 (P <
0101) , 说明在此时段栀子苷、胆酸、合方均可阻抑脑
组织中 E2select in 表达, 黄芩苷具有较强抑制作用,
使其表达低于正常; 缺血 24 h, 栀子苷组、胆酸组、
黄芩苷组及合方组脑组织 E2select in 表达水平低于
模型组 (P < 0105, 0101) , 且栀子苷组、胆酸组低于
正常组 (P < 0105, 0101) , 提示合方、黄芩苷可阻抑
脑组织中 E2select in 高表达, 栀子苷、胆酸具有较强
地抑制 E2select in 的表达的作用, 使其表达水平低
于正常。
3　讨论
　　白细胞与内皮细胞黏附的病理过程有初级黏
附、牢固黏附、跨壁游走 3 个阶段。 E2select in 和
ICAM 21 是其中较重要的两个细胞黏附分子。E2
select in 只在血管内皮表达, 静息时表达很少, 炎症
因子刺激可导致其激活[4 ]。E2select in 不仅可将中性
粒细胞吸引到内皮细胞介导初级黏附, 还可激活白
细胞表面的 CD 18 抗原, 增加整合素 ( in tegrin) 的
表达, 使中性粒细胞上的 CR 3结合活性增高, 促进中
性粒细胞聚集及其与内皮细胞的牢固黏附; Zhang
等发现在不同大鼠缺血模型中, E2select in 在缺血
2 h 开始表达, 于再灌注 6 h 至 12 h 达峰[5 ]; Zhang
等应用模拟配体 CY21503 可显著降低梗死面积, 显
著减少中性粒细胞髓过氧化物酶 (M PO ) 阳性细胞
数, 提供了 E2select in 参与M CAO 大鼠脑损伤的直
接证据[6 ]; 在 CD 18、CD 62E 基因共同敲除的小鼠出
现明显的炎症反应缺陷, 说明 E2select in 和 CD 18
的共同作用是炎症过程中其他黏附因子所不能取代
的[7 ]; 非人灵长类M CAO 模型脑组织的非缺血侧
在缺血后 24 h E2select in 有表达[8 ] , 可能是脑损伤
后的转移因子激活了正常脑微血管内皮细胞。在本
实验中, 脑缺血后不同时间点不同有效组份发挥作
用的程度虽有差异, 但总体来说, 除珍珠母外, 其他
各有效组份均能显著降低M CAO 大鼠脑组织中 E2
select in 水平, 从而在初级黏附环节抑制白细胞与内
皮细胞黏附, 干预二者的进一步牢固黏附, 通过以上
两个途径达到抗炎的目的。
ICAM 21 主要在内皮细胞上经炎症诱导表达,
通过与白细胞表面的淋巴细胞功能相关抗原
(L FA 21) 相互作用介导白细胞与内皮细胞的牢固
黏附及白细胞穿出血管壁。 ICAM 21 在缺血侧半球
于缺血后 3 h 开始表达, 6～ 12 h 达峰, 持续 72 h。
免疫组化显示 ICAM 21 阳性颗粒出现在缺血中心
区和半暗带的微血管内皮细胞上, 且从中心区向半
暗带有增加趋势[9 ]。K itagaw a 等发现在永久性梗死
区, 即使白细胞浸润数目相同, 而 ICAM 21 基因敲
除小鼠较非敲除小鼠脑损伤区伤害程度明显减轻,
认为 ICAM 21 在脑微循环衰竭和梗死区的扩大及
梗死加重过程中起重要作用[10 ]。临床研究发现中风
患者血浆 ICAM 21 表达的上调并与趋化因子协同
作用, 引起中风最初 3 d 粒细胞的浸润[11 ]。由本实
验结果可以看出, 珍珠母、合方可使缺血 12 h 脑组
织中 ICAM 21 回复至正常水平。黄芩苷具有较强的
抑制 ICAM 21 表达作用; 除合方组外各有效组份可
阻抑脑缺血 24 h 脑组织 ICAM 21 高表达, 使其接
近正常。缺血 12 h, 只有珍珠母、黄芩及合方有效,
而至缺血 24 h, 除合方外其他各药均有效, 这说明
珍珠母、黄芩苷、合方在缺血早期即可发挥作用, 而
经过一段时程之后, 栀子苷、胆酸也开始显效, 通过
阻抑炎症细胞的牢固黏附减轻炎症反应。
脑缺血 12, 24 h M A CO 大鼠脑组织 ICAM 21,
E2select in 表达水平较正常组均显著增高, 且二者
表达水平呈正相关 (r= 1)。黄芩苷对缺血 12 h 脑
组织 ICAM 21 和 E2select in 的表达均有较强的抑制
作用, 与文献报道相一致[12 ]; 栀子苷、胆酸对二者在
缺血 24 h 的表达均有较强的抑制作用。珍珠母可阻
抑缺血后 ICAM 21 的表达而对 E2select in 的表达不
发挥显著作用。可见, 对不同指标起正向作用的有效
组份不尽相同, 针对单一指标, 同一有效组份可在一
个时段发挥作用而在另一个时段不发挥作用, 但不
引起负向作用。对此, 可以从以下几点考虑: 第一, 清
开灵的有效组份在细胞黏附环节发挥阻抑作用, 有
效组份可能只作用于细胞黏附的某一阶段或同时作
用于不同阶段; 第二, 随着缺血级联反应时程的进
展, 脑内环境是不断变化的, 有效组份经代谢在不同
时程可能发挥不同作用; 第三, 各单一组份在 24 h
均能降低 ICAM 21 水平, 而这些组份合用的合方在
此时间点作用不显著, 说明各有效组份抑制细胞黏
附的作用不是简单的叠加; 第四, 某一有效组份在本
实验中某时间点、某环节作用不显著并不能排除该
中药在与方中其他药物配伍后发挥作用的可能。
总之, ICAM 21 和 E2select in 作为重要的黏附
因子加重了缺血后脑损伤, 清开灵有效组份可通过
阻抑黏附因子的表达, 从细胞黏附的不同阶段、在缺
血损伤的不同时程抑制细胞黏附, 减轻脑缺血后炎
症反应。至于各有效组份是通过抑制 E2select in 的
表达从而降低 ICAM 21 水平, 还是同时对初级黏
附、牢固黏附发挥作用, 有待进一步研究。
·866· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
References:
[ 1 ]　Guo X F, L ai S L. M eta2analysis of Q ingkailing in jection fo r
treating acu te stroke [J ]1 J Guang z hou U n iv T rad it Ch in
M ed (广州中医药大学学报) , 2000, 17 (1) : 92141
[ 2 ]　L onga E Z, W einstein P R , Carlson S, et a l. Reversib le
m iddle cerebral artery occlusion w ithou t cran iectom y in rats
[J ]1 S troke, 1989, 20 (1) : 842911
[ 3 ]　Bederson J B, P itts L H , T su jiM , et a l. Rat m iddle cerebral
artery occlusion: Evaluation of the model and developm ent of
neuro logic exam ination [J ]1 S troke, 1986, 17 (3) : 47224761
[ 4 ]　Bevilacqua M P, Stengelin S, Gim brone M A , et a l. En2
do thelial leukocyte adhesion mo lecu le 1: A n inducib le recep2
to r fo r neu troph ils related to comp lem ent regu lato ry p ro teins
and lectins [J ]1 S cience, 1989, 243 (4895) : 11601
[ 5 ]　Zhang R , Chopp M , Zhang Z, et a l. T he exp ression of P2
and s in th ree models of m iddle cerebral artery occlusion [J ]1
B ra in R es, 1998, 785 (2) : 20722141
[ 6 ]　Zhang R L , Chopp M , Zhang Z G, et a l. In focal cereb ral is2
chem ia and reperfusion in the rat [J ]1 Cereb B lood F low
M etab, 1996, 16 (6) : 1126211361
[ 7 ]　Fo rlow S B, W h ite E J , Barlow S C, et a l. Severe inflamm a2 to ry defect and reduced viab ility in CD 18 and doub le2m utan tm ice [J ]1 C lin Invest, 2000, 106 (12) : 14571[ 8 ]　H aring H P, Berg E L , T surush ita N , et a l. A ppears in non2ischem ic tissue during experim en tal focal cereb ral ischem ia[J ]1 S troke, 1996, 27 (8) : 1386213911[ 9 ]　Ge H , W en Y, Yang G, et a l. Increased exp ression of in ter2cellu lar adhesion mo lecu le21 in mouse focal cereb ral ischem iamodel [J ]1 Ch in M ed J , 2000, 113 (1) : 752791[ 10 ]　Kitagaw a K, M atsumo to M , M abuch i T , et a l. D eficiency ofin tercellu lar adhesion mo lecu le 1 attenuates m icrocircu lato rydistu rbance and infarction size in focal cereb ral ischem ia [J ]1Cereb B lood F low M etab, 1998, 18 (2) : 1336213451[ 11 ]　L indsberg P J , Carpen O , Paetau A , et a l. Endo thelialICAM 21 exp ression associated w ith inflam ato ry cell responsein hum an ischem ic stroke [J ]1 C ircu la tion, 1996, 94 ( 5 ) :93929451[ 12 ]　W ang W N , CaiD F, L u C Z1 Effects of baicalin on cerebralischem ia2reperfusion in ju ry in diabetic rats [J ]1 Ch in J In te2g ra ted T rad itW estM ed In tens C rit Care (中国中西医结合急救杂志) , 2002, 9 (2) : 11121131
养血清脑颗粒改善头痛头晕症状的临床观察
常蜀英1, 常有进2, 郝晓玲1, 王北林1, 祖玉梅1Ξ
(11 空军总医院 门诊部, 北京　100036; 21 沈阳炮兵学院 门诊部, 辽宁 沈阳　110162)
　　养血清脑颗粒 (YXQN Granu la) 由当归、川
芎、熟地、白芍、珍珠母、决明子、夏枯草、细辛等 20
余味中药合理配方、科学提取有效成分制成, 具有滋
阴补血、平肝潜阳、活血通络的作用, 用于治疗偏头
痛、血管紧张性头痛有良好疗效[1 ]。为进一步了解该
药对神经系统疾病的治疗作用和机制, 对 54 例头
痛头晕患者服用养血清脑颗粒的情况进行了观察,
并采用经颅血管彩色超声检查 (TCD ) 对服药前后
脑血管机能状况进行对比分析, 现报道如下。
1　临床资料
111　一般资料: 54 例观察对象均为 2002 年 6 月—
2003 年 6 月在本院神经内科门诊以头痛头晕症状
为主诉的神经科疾病患者, 其中男性 28 例, 女性 26
例; 平均年龄 (55±17) 岁。
112　临床诊断及病程: 临床诊断分别为腔隙性脑梗
死 21 例, 短暂脑缺血发作 2 例, 脑动脉硬化症合并
脑供血不足 14 例, 脑出血后遗症 1 例, 脑膜瘤 1 例,
紧张性头痛 11 例, 偏头痛 4 例; 54 例中合并高血压
病 25 例 (21 kPaö12 kPa) , 合并颈椎病或颈椎曲度
异常 25 例, 合并高血脂症 14 例, 高血糖 4 例。其中以
头痛症状为主诉者 16 例, 头痛头晕者 16 例, 头晕头
昏者 22 例。间断头痛头晕病程 1～ 30 年, 平均 (47±
76) 个月; 就诊时症状发作时间平均 (31±30) d。
2　方法
211　服药: 口服养血清脑颗粒 (天津天士力联合制
药 公 司 生 产, 批 号 为 20020123, 20020916,
20021143, 20021206, 规格 410 gö袋) , 每次 1 袋, 每
天 3 次, 平均 28 d 连续服药。此期间尽可能不用其
他治疗药物, 原用降压药者视情况减量或停止服用。
212　疗效评定指标: ①阳性次数积分: 记录服药当
日及平均服药 28 d 后头痛头晕症状发作次数, 单有
头痛或头晕一项记 1 分, 同时有头痛头晕者 2 分, 症
状消失为 0 分; ②程度积分: 采用数字分级法
(N R S) : 0～ 10 的数字代表不同程度的疼痛和头晕,
0 为无头痛和头晕, 10 为最剧烈的疼痛和头晕, 1～
3 为轻度, 4～ 6 为中度, 7～ 10 为重度。
213　TCD 检查方法: 采用 EM E TC2000 型经颅多
普勒超声血流分析仪, 用 2 M H z 探头分别经颞窗、
眶窗和枕窗探测每例患者服药前后左侧和右侧大脑
中动脉 (LM CA , RM CA ) , 左侧和右侧大脑前动脉
·966·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003209216