全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月· 675·
仙芦抗癌胶囊抗肿瘤作用及对肝癌HepG2细胞内Ca2十浓度的影响
高世勇，李文兰，张字金，王帅帅，季宇彬
(暗尔滨商业大学药物研究所博士后科研工作站，黑龙江哈尔滨 150076)
摘要t目的观察仙芦抗癌腔囊的体内外抗肿瘤作用及对人肝癌HepG2细胞内ca抖浓度([ca抖]．)的影响，从
而揭示仙芦抗癌腔囊的抗肿瘤作用机制。方法通过观察仙芦抗癌胶囊对StaoA荷癌小鼠瘤质量和H”小鼠生存
时阊的影响．观察其体内抗肿瘤作用。通过MTT法观察台药血清对肝癌HepG2细胞的细胞毒作用。通过Fluo一3／
AM标记HepG2肝癌细胞，激光共聚焦扫描显微术测定肿瘤细胞[Ca2+]-，ATP酶试剂盒测定HepG2细胞膜
Ca抖，Mg抖一ATP酶活性。结果仙芦抗癌胶囊(1．00、0+50、0．25g／ks)对SmA小鼠的瘤体生长有显著的抑制
作用，对Hn小鼠的生存时同有显著的延长作用。仙芦抗癌胶囊体外对HepG2细胞有细胞毒作用l对细胞[Ca“]j
有显著升高作用，高、中剂量(1．oo、o．50g／kg)能够降低HepG2肝癌细胞膜Ca抖，M92+一ATP酶活性。结论仙
芦抗癌胶囊有明显的体内外抗肿瘤作用，其作用机制为抑制肿瘤细胞膜Ca抖，Mg抖一ATP酶活性，增加细胞
[Ca抖]．，从而诱导肿瘤细胞凋亡．达到抗肿瘤作用的目的。
关■词：仙芦抗癌胶囊I荷瘤小鼠；HepG2ICa抖ICa什，Mg抖一ATP酶
中皤分粪号：R286．91 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)11—1675—04
AntitumorfunctionofXianluKang
7
aiCapsuleanditseffecton[ca2+]l
ofhumancancerc llineHepG2
GAOShi—yong，LIWen-lan，ZHANGYu—jin，WANGShuai—shuai，JIYu—bin
(PostdoctoralPr gramme，InstituteofMateriaMedica，HarbinUniversityofCommerce，Harbin150076，China)
Abstract：ObjectiveTheanthumoractionbothinvivoandinvitro，andthe[Ca2+]，ofHepG2cells
werestudiedtOshowtheantitumormechanismofXianluKang’aiCapsule．MethodsTheinviv0antitu—
moractionwastudiedbyobservingthevariationoftumorweightandsurvivaltimeofS1soAandH22mice．
TheMTTassaywasadoptedoinvestigatethecellularcytotoxicityofthedrug-serumOnHepG2cell．In—
ternalCa2+ofHepG2cellwasmensuratedbylaserscanningconfocalmicroscope(LSCM)，andtheactivity
ofCa”，Mg”一ATPaseofHepG2eellmembrancewasdeterminedbyATPasekit．RcsultsXianluKang’
aiCapsule(1．00，0．50，0．25g／kg)inhibitedthegrowthofcancercellsofS180Amiceandprolongedthe
survivaltimeofH22mice．XianluKang’aiCapsule(1，00，0．50，0．25g／kg)hadstrongcytotoxieeff cts
onHepG2cellandincreaseditsinternalCa抖．TheactivityofCa抖。M92+一ATPaseWaSreducedbyXianlu
Kang’aiCapsule(1．00，0．50g／kg)．ConclusionXianluKang’aiCapsulehasantitumoreffectbothinvi—
uDandinvitro．ThemechanismisthatXianluKang’aiCapsulecouldincreasetheinternaJC 2+ofHepG2
cellbyreducingtheactivityofCa“．Mg”一ATPaseofHepG2cellmembrancetoinducetheapoptosisf
tumot．
Keywords：XianluK g’aiCapsule；tumor—bearingmic ；HepG2；Ca2+；Ca”，Mg”一ATPase
仙芦抗癌胶囊是一种纯中药抗癌制剂，由食用
仙人掌Opuntiam@aAha和库拉索芦荟Aloe
veraL．提取的有效成分组方而成的复方抗癌制
剂。抗肿瘤药物一度以化疗药物为主，不可否认其良
好的细胞毒作用是其成为治疗肿瘤的主打药物的原
因，但其严重的不良反应同时也日益成为人们关注
的焦点和难以解决的矛盾。由于这样的现状，以及新
世纪人类对回归大自然这一主题的认可，逐渐把抗
癌药物研究的目光投向了中医药。本实验所研究的
仙芦抗癌胶囊就是基于这样的现状开发的一种纯中
药抗肿瘤制剂。本实验观察了仙芦抗癌腔囊对移植
性肿瘤的作用，采用血清药理学的方法体外观察了
其对肝癌HepG2的细胞毒作用，同时观察了对肝
癌细胞内ca”的影响，从而揭示其抗肿瘤作用
机制。
l材料
譬鍪磊耆：蓄莱姜等蔷技局攻关项目(2003AAfCN095)+黑龙江青年基盒(QC02C46)
作者俺介}高世勇(1975--)．男，讲师．在读博士，研究方向为肿瘤药理学。E—mail：syga02002(癣sina．cDm
万方数据
·1676· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
1．1药品：仙芦抗癌胶囊，由哈尔滨商业大学药物
研究所自制。含生药2g／粒(每粒含仙人掌多糖和
芦荟多糖共0。3g)，人用量为4g／d。药物用蒸馏水
配置。5一氟脲嘧啶(5一Fu)，购自上海海普制药厂，批
号20040602。
1．2实验动物及肿瘤细胞株：昆明种小鼠，体重
(20土2)g，由哈尔滨医科大学第二临床医学院实验
动物中心提供。s。。。荷瘤小鼠、H。。荷瘤小鼠及人肝癌
HepG2细胞株均由黑龙江省肿瘤医院肿瘤研究所
提供。
1．3试剂：RPMI一1640培养基，HyCloneLabora-
tories公司。胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有
限公司。胰酶，Gibio公司。DMsO，北京索莱宝科技
有限公司。Fluo一3／Am，美国Biotium公司。ATP酶
试剂盒，南京建成生物工程研究所。
1．4仪器设备：CO一150CO。培养箱，美国NBS公
司。奥林巴斯cKx一41—32荧光倒置显微镜，日本
Olympus公司。双人双面SW—CJ一2F超净工作
台，中国苏州苏净集团。低温超速离心机，美国
Beckman—Coulter公司。恒温水浴箱，厦门压疗电子
仪器厂。水平高速离心机，北京医用离心机厂。激光
共聚焦扫描显微镜SP2，德国Leiea公司。酶标仪，
美国Bio—tad公司。
2方法
2．1体内抗肿瘤实验
2．1+1对S。soA小鼠瘤质量的影响：昆明种小鼠50
只，雌雄各半，随机分为5组，分别为对照组，5-Fu
组，仙芦抗癌胶囊高、中、低剂量(1．00、0．50、0．25
g／kg)组。分组后连续ig给药7d，给药量为0．4
mL／20g，对照组给同体积蒸馏水，阳性对照组给同
体积5-Fu(o．50g／kg)。第8天接种slao瘤株，取接
种生长良好的sm荷瘤小鼠，无菌条件下，抽取腹
水，在冰浴条件下，灭菌生理盐水与腹水按4：1稀
释，混匀制成肿瘤细胞混悬液，该混悬液应为乳白色
半透明状态，若有血性腹水不可使用。将制备好的
s，。。肿瘤细胞混悬液按每只0．2mL接种于昆明种
小鼠右侧腋窝皮下。接瘤后继续给药7d。停药后第
2天剥瘤、称质量，计算抑瘤率。
抑瘤率嚣(对照组平均瘤质量一给药组平均瘤质量)／对
照组平均瘤质量×100蹦
2．1．2对H。。小鼠生存时间的影响；小鼠分组、给
药及接瘤方法同2．1．1项。接瘤后继续给药7d。停
药后第2天开始观察记录各组小鼠的死亡数。各组
小鼠全部死亡后，计算生命延长率。
生命延长率一(给药组平均生存天数一对照组平均生存
天数)／对照组平均生存天数×100“
2．2对人肝癌HepG2的细胞毒作用
2．2．1细胞培养：人肝癌细胞HepG2以适量浓度
接种于培养瓶中，加入含10跖小牛血清的RPMI一
1640培养基，置于37℃恒温、5％COz及饱和湿度
的培养箱中培养，细胞贴壁生长，每2～3d传代1
次，传代时首先倒出培养液，PBS洗3次，25％胰酶
消化后，加入新鲜的培养液吹打均匀，调整细胞至适
当的细胞浓度移入新的培养瓶中，添加适量培养液。
2．2．2药物血清的制备：将昆明种小鼠随机分为5
组，每组20只，雌雄各半，按2．1．1项方法连续ig
给药7d。末次给药2h后眼球取血，分离血清，
56℃灭活30min，分装置一20℃保存备用。
2．2．3MTT法检测细胞毒作用：分别取对数生长
期人肝癌HepG2细胞，经台盼蓝染色后作细胞记
数，拒染细胞应在97％以上，用RPMI一1640细胞
培养液(含lo％小牛血清)，调整细胞浓度至l×
104／mL，加入96孔细胞培养板，每孔100卢L，设10
个平行孔，放入5％CO：培养箱、37℃培养24h，使
细胞贴壁。对照组加入胎牛血清，仙芦抗癌胶囊高、
中、低组及阳性对照组分别加入相应的含药血清，血
清添加量均为25％。加血清后放人5％COz、37℃
培养箱继续培养48h。取出细胞，倒出培养液，每孔
加入1mg／mLMTT100pL，放人5％C02培养箱、
37℃继续培养4h。快速翻板倒出液体，每孔加人
DMSO150IzL，微量震荡器震荡5～10min，使其中
的兰色颗粒充分溶解。将培养板放人酶标仪于570
nm处测定吸光度∽)值。计算抑制率。
抑制率#(1一A￡-／^”H)×100蹦
2．3对人肝癌HepG2细胞ECa”]，的作用：细胞培
养、含药血清制备及给药处理同2．2项。细胞浓度调
至1×104／mI．后加入Petri皿中培养，48h后取
出，给药组及对照组细胞用HEPES液洗3次，加入
4“g／mL的Fluo一3／Am(MolecularPr b s)、37℃
温育50rain，然后用HEPES液洗3次，重新悬浮
在HEPES液中，用激光共聚焦扫描显微镜测定荧
光强度，激发波长为488nm，发射波长为540～570
nm，物镜APOCS40×／1．25oil，zoom>1，pin—
hole1．5Airy。采用Leica激光共聚焦扫描显徽镜
定量系统测定各组细胞的平均荧光强度(FI)。
2．4对人肝癌HepG2细胞Ca”，Mg“一ATP酶
活性的影响：细胞培养、含药血清制备及给药同2．2
项。各组细胞在培养瓶中培养48h后分别收集
万方数据
中草荮Ch／neseTraditionalandHerbalDrugx第36卷第n期2005年11月· 677·
1×108个细胞，用超声粉碎器粉碎f按照ATP酶测
试试剂盒说明书方法测定Ca”，Mg”一ATP酶活性。
3结果
3．1体内抗肿瘤作用
3．1．1对S，。eA小鼠瘤质量的影响：结果见表l。仙
芦抗癌胶囊(1．00、0．50、0．25g／kg)对s180A小鼠
的瘤体生长有显著的抑制作用，剂量与效果呈正相
关。与对照组比较有显著的统计学意义(P囊1仙芦抗癌腔一对smA小■■质量的影响(厅=10)
Table1 EffectofXianluKgog‘alCapsuleontumor
weightofSmAmice“=lO)
与对照组比较t—P<0·01
。。P3．1．2对H：z小鼠生存时间的影响：结果见表2。仙
芦抗癌胶囊(1．00、0．50g／kg)对H2z小鼠的生存
时间有显著的延长作用，剂量与效果呈正相关。仙芦
抗癌胶囊高、中荆量对H。。小鼠的生命有显著的延
长作用，而低剂量组对Hn小鼠的生存时间没有显
著影响(P>0．05)。
囊2仙芦抗癌披■对Hn小■生存耐闻的影响抽=10)
Table2 EffectofXlanluKeng’uiCapsuleolsurvival
thneofH，lmice(_一10)
与对照组比麓，。P<0·05
。P<0．05伽controlgroup
3．2对人肝癌HepG2细胞的细胞毒作用：结果见
表3。仙芦抗癌胶囊含药血清作用于人肝癌HepG2
缎施48h后表现出一定的细胞毒作用。
3．3对人肝癌HepG：细胞内Eta”]。的影响：结果
见表4。采用激光扫描共聚焦显微术观察了仙芦抗
癌胶囊对人HepG2细胞[Ca2+]。的影响，同时对所
采集的图像进行了定量分析，仙芦抗癌胶囊组能够
显著升高肿瘤细胞[Ca2+]．，并具有一定的剂量相关
性，而5-Fu组荧光强度也有所升高，但与对照组比
较无统计学差异。
3．4对人肝癌HepG2细胞Ca”，Mg”一ATP酶
活性的影响：结果见表5。仙芦抗癌腔囊能降低细胞
膜Ca”，Mg”一ATP酶活性。
衰3仙芦抗癌肢囊台药血清对HepG2细胞的
棚胞毒活性抽一10)
Table3 CytotoxJcltyofXianluKang’alCapsule
drug‘serumoffHepG2cell(H=10)
裹4仙芦抗癌腔囊古药血清对HepG2细胞内[ca抖l的影响
Table4 EffectofXlanluKang’alCapsuledr“g·
serum01]internalCa”ofHepG±cell
与对照组比较：一P<0．01
。。P<0．01wcontrolgroup
寰s仙芦抗癌胶囊台药血清对HepG2绷胞
Ca”+Mg”一ATP建活性的影响
Table5 EffectofXlanluKang’alCapsuledrug-serumoil
activityofca”tMr+一ATPaseofHepGT,cell
与对厢组比较r。。P<0．01
一P<0．01wcontrolgroup
4讨论
仙芦抗癌胶囊是本课题组在以往的研究基础上
开发的一种纯中药抗肿瘤制剂。仙人掌和芦荟分别
有上百个品种，各个品种的药理活性又有所差异。课
题组分别对几种药理活性较强的仙人掌和芦荟进行
了抗肿瘤作用研究，筛选出了抗肿瘤作用最好的食
用仙人掌和库拉索芦荟，组方成仙芦抗癌胶囊，利用
其协同抗肿瘤作用以期达到更好的抗肿瘤效果。
体内药效学实验结果表明，仙芦抗癌胶囊
(1．00、0．50、0．25g／kg)对S。。。A小鼠的瘤体生长
有一定的抑制作用，对H。。小鼠的生存时间有一定
的延长作用。在体外药效学中运用血清药理学的原
理，制备了含药小鼠血清，通过MTT比色法观察了
万方数据
·1678· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
仙芦抗癌胶囊舍药血清对人肝癌细胞HepG2的细
胞毒作用，从而间接反映仙芦抗癌胶囊对人体肿瘤
细胞的抑制作用，结果表明仙芦抗癌胶囊高、中、低
剂量对HepG2细胞的抑制率分别为49．50％、
40．50％和34．95％。虽然从抑制率上并不占优势，
但作为日服中药制荆，已经相当可观。中药口服抗癌
制剂，首先避免了化疗药物的不良反应，同时又不存
在中药其他剂型的一些缺点，如中药注射剂稳定性
差，患者使用出现过敏率高的弊端，适合肿瘤患者长
期用药。
体外细胞毒实验表明仙芦抗癌胶囊含药血清对
肝癌HepG2细胞有一定的细胞毒作用，而近年的
研究结果表明细胞凋亡是细胞毒类药物发挥作用的
一个共同通路o“]，而细胞[Ca”]，的改变是细胞凋
亡发生的关键环节“。⋯。因此在药效观察的基础
上，本实验进一步观察了仙芦抗癌胶囊对肝癌
HepG2细胞[Ca”]，的影响。实验结果表明仙芦抗
癌胶囊高、中、低3个剂量组均能显著提高细胞
[Ca”]．，而阳性对照组5-Fu的[Ca2+]，水平有所升
高，但与对照组比较没有统计学意义(P>0．05)，说
明仙芦抗癌胶囊存在着与5-Fu不同的抗肿瘤作用
机制。就仙芦抗癌胶囊引起细胞[Ca”]。升高而言，
可以推测出其抗肿瘤作用机制可能为升高细胞
[ca2+]．，从而启动细胞凋亡机制以致诱导肿瘤细胞
掏亡，在下一步工作中本课题组将从细胞凋亡角度，
即从细胞的形态学观察、DNALadder，流式细胞术
等几个方面验证仙芦抗癌胶囊诱导肿瘤细胞凋亡的
作用。
细胞[Ca2+]，的改变有多条途径，如细胞外钙内
流和细胞内钙库的释放。钙泵的主要生理功能就是
将细胞内的Ca“主动转运到细胞外和线粒体内，是
细胞[Ca“]．改变的一条主要途径。因此，在细胞
[Ca”]i测定的基础上，采用同样的给药方式，使用
ATP酶试剂盒，测定了HepG2细胞内钙泵的活性，
实验结果表明仙芦抗癌胶囊高、中、低各组均能降低
细胞膜钙泵活性，而以高、中两组的作用最为显著
(P本实验结果表明仙芦抗癌胶囊在体内能够抑制
s。A荷瘤小鼠瘤体生长，延长H。。荷瘤小鼠的生存
时间，体外实验对HepG2肝癌细胞有明显的抑制
作用，其作用机制为抑制肿瘤细胞膜钙泵活性，减少
细胞内ca”向细胞外及线粒体内的主动转运，从而
间接地增加细胞[Ca2+]．，推测Ca2+升高后通过启
动细胞凋亡机制诱导肿瘤细胞凋亡，从而达到抗肿
瘤作用的目的，这还有待于进一步的实验研究加以
证实。
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万方数据
仙芦抗癌胶囊抗肿瘤作用及对肝癌HepG2细胞内Ca2+浓度的影
响
作者： 高世勇， 李文兰， 张宇金， 王帅帅， 季宇彬， GAO Shi-yong， LI Wen-lan， ZHANG
Yu-jin， WANG Shuai-shuai， JI Yu-bin
作者单位： 哈尔滨商业大学药物研究所,博士后科研工作站,黑龙江,哈尔滨,150076
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(11)
被引用次数： 4次

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