全 文 ：411 通过一系列对大黄粉碎度、不同提取溶剂、提
取方法(包括超声、索氏提取)等方面的考察以及结
合有关文献确定了以上供试品的制备方法。
412 采用 DAD对最佳检测波长进行了比较研究,
确立 280 nm 为最佳检测波长[ 1]。
413 目前虽有文献报道有关大黄药材的指纹图谱
的研究,但对于其指纹谱特征峰的辨认采用的方法
有待商榷[ 2] , 按本方法不仅能将大黄中的成分较好
的分离,对指纹谱特征峰的辨认也采用了新的分析
系统,能较好的体现图谱间的相似性,可以为药材质
量的分析与控制提供可靠的依据。按照国家药典委
员会关于/中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂
行)的通知0,以 HPLC 梯度洗脱法对大黄原药材进
行了指纹图谱研究, 实验证明,该方法可操作性强、
重现性好, 可作为大黄药材及含大黄主成分制剂指
纹图谱研究的基础。
414 以线性梯度洗脱法进行检测得到的液相色谱
图,可以作为大黄原药材及其制剂的指纹图谱,该方
法对注射剂( TY719注射液)可直接取样配制, 中间
环节少、操作过程引入的误差较小[ 3]。
415 按本方法建立的共有模式提示不仅对同品种
不同产地的大黄样品, 也可对不同品种的大黄样品
乃至大黄伪品如河套大黄和土大黄进行相似度计
算,可反映其内在质量,从而鉴别。
416 从药材整体色谱图入手, 选取特征峰,并大致
判断其峰位和比例关系, 构成该药材特有的色谱指
纹图谱全貌, 本文模拟的共有模式比以单一化学对
照品作为鉴别标准更全面, 能提供更多质控的信息。
对提高中药质控科技含量具有重要的现实意义。
致谢:浙江大学程翼宇教授、范骁辉博士提供指
纹图谱相似度计算软件。
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黄芪质量的化学模式识别研究
马英丽1, 赵怀清2,田振坤1,王学娅2,曲 燕2,崔洪斌3 X
( 11 黑龙江中医药大学药学院, 黑龙江 哈尔滨 150040; 21 沈阳药科大学药学院, 辽宁 沈阳 110016; 31 哈尔滨医科大
学公共卫生学院,黑龙江 哈尔滨 150010)
摘 要:目的 建立黄芪质量评价的化学模式识别方法。方法 用甲醇回流提取黄芪中皂苷类成分, 以氯仿-甲醇-
水( 65B30B10)为展开剂, 采用双波长薄层扫描法,在 Ks= 390 nm, KR= 590 nm 下, 对 18个产地的黄芪样品进行了
定量分析,以黄芪甲苷为指标成分, 用系统聚类分析对其进行了化学模式识别研究。结果 蒙古黄芪和膜荚黄芪
中的黄芪甲苷含量较高,这与5中华人民共和国药典62000年版将蒙古黄芪和膜荚黄芪列为正品相一致。结论 此
方法可用于黄芪质量评价。
关键词:黄芪; 黄芪甲苷;薄层扫描; 化学模式识别
中图分类号: R2821 4 文献标识码: A 文章编号 : 0253 2670( 2003) 05 0460 03
Studies on chemical pattern recognition of quality assessment of Radix Astragali
MA Ying- li1, ZHAO Hua-i qing 2, T IAN Zhen-kun1, WANG Xue-ya2, QU Yan2, CU I Hong-bin3
( 11 School of Pharmacy, Heilongjiang Universit y of TCM , Harbin 150040, China; 21 School of Pharmacy,
Shenyang Pharmaceutical Univ ersity, Shenyang 110016, China; 31 College of Public Heacth,
Harbin University of Medical Science, Harbin 150010, China)
Abstract: Object To establish a method for chemical pattern recognit ion on the quality assessment of
Radix Astr agal i1 Methods The contents of astrag aloside in 18 samples of Ast ragalus Linn. in dif ferent
#460# 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
X 收稿日期: 2002-12- 12基金项目:黑龙江省自然科学基金项目( B9803)作者简介:马英丽( 1954- ) ,女,哈尔滨人,黑龙江中医药大学药学院教授、博士生导师,主要从事中药有效成分与质量评价方法研究。
T el: ( 0451) 2114402 E-mail: MYLT666@ 1631net
species and origins w ere determinated by dua-l w aveleng th TLCS method1 The developing solvent w as CHCl3-
M eOH-H2O ( 65B30B10, ) , the UV detection w as set at Ks= 390 nm; KR= 590 nm1 Astragaloside was regarded
as the quality assurance of medicinal Radix Astragalus1 Based on the TLCS method, the chemical data w ere ob-
tained1 Hierarchical clustering analyses w ere applied to the chem ical pat tern recognit ion1 Results T he content
of ast rag aloside in Astragalus monghol icus ( Bge1) Hsiao and A 1 membranaceus ( Fisch1) Bge1 was relat ively
higher than that in the other samples1 This is consistent with the Pharmacopoeia of the People. s Republic of
China in which the tw o sorts of A st ragalus Linn. w ere regarded as goods1 Conclusion This method is a pract-i
cable in the quality assessment of Radix Ast ragal i1
Key words: Radix A st ragali ; ast ragaloside; TLCS; chemical pattern recognition
中药的质量评价一直是中药研究与应用的难点
和重点问题,如何有效地评价中药的质量,如何保证
中药的疗效是一个迫切需要解决的问题。我国传统
中药及制剂由于缺乏科学、先进、可行的质量标准,
难以有效地控制内在质量, 既不能满足人民卫生保
健的需要, 也不符合国际医药市场的要求。只有对
中药材进行科学地质量控制, 才能更好地保证中药
饮片和成药的质量, 实现中药的安全、有效、稳定、可
控,为中药走向世界奠定良好的基础[ 1, 2]。
近十年来, 模式识别方法已逐渐深入地应用于
中药品质评价, 划分中药材质量等级, 鉴别真伪、优
劣等。至今,有众多文献报道,化学模式识别方法已
经成为该领域卓有成效的方法[ 3~ 5]。本实验利用
薄层扫描法对不同产地的黄芪进行了定量分析, 以
黄芪甲苷为指标成分获得了化学数据, 并以聚类分
析对其进行了化学模式识别研究, 结果令人满意。
1 仪器与试剂
CS-930薄层扫描仪(日本岛津公司) ,黄芪甲苷
对照品(中国药品生物制品检定所) ,硅胶 HF 254(青
岛海洋化工厂) ;甲醇、氯仿均为分析纯(山东省禹王
实业总公司化工厂) ,蒸馏水(本校自制) , 黄芪药材
购自全国各地, 由沈阳药科大学生药教研室鉴定。
2 方法与结果
211 薄层色谱条件: 展开剂: 氯仿-甲醇-水 ( 65B
30B10) ;显色剂: 5%的硫酸乙醇溶液; 薄层板: 硅胶
HF25420 g,加入 60 mL 013% CMC-Na溶液,研匀,手
动涂铺 5 cm @ 20 cm板 8块,自然干燥后, 备用;仪器
参数: Ks= 390 nm, KR= 590 nm,反射锯齿扫描。
212 线性范围考察: 精密称取黄芪甲苷对照品约
10 mg,溶于 50 mL 的无水甲醇溶液中, 充分溶解。
分别吸取 015, 110, 210, 310, 510, 1010 LL 点于同一
块薄层板上, 用氯仿-甲醇-水( 65B30B10)展开剂展
开,挥去展开剂, 喷 5%H2SO4 显色剂, 晾干, 105 e
显色, 在薄层扫描仪上扫描,记录对应的峰面积值。
以黄芪甲苷的峰面积值为纵坐标, 黄芪甲苷的点样
量为横坐标绘制标准曲线, 结果表明, 黄芪甲苷在
011~ 2 Lg线性关系良好, 回归方程为 Y = 31566 @
10
3
X- 781002, r= 01998 9。
213 精密度试验:精密吸取内蒙古样品溶液 6 LL,
于同一块薄层板上点 6个点,用以上的展开剂展开、
显色、扫描, 其黄芪甲苷峰面积的 RSD = 4140%。
214 重现性实验:精密称定同一批样品按样品溶液
制备方法分别制备 5 份供试品溶液,分别测定。结
果黄芪甲苷含量的 RSD 为 2136%,重现性良好。
215 稳定性试验:精密吸取内蒙古样品溶液 6 LL,
点于一块薄层板上, 用以上的展开剂展开、显色, 每
间隔 015 h 扫描, 取 3 h 内的测定结果( n = 12) ,计
算峰面积值的相对偏差, 其中 0~ 115 h的 RSD =
315%,因此薄层显色后, 115 h 内测定, 其结果较稳
定。
216 回收率试验:精密称取已知含量的内蒙古黄芪
粉末 31018 0 g, 准确加入黄芪甲苷对照品溶液
( 01132 mg/ mL) 20 mL,同含量测定方法操作,测得
回收率为 98138%, RSD = 1186% ( n = 9)。
217 样品含量测定:精密称取黄芪样品粉末(过 60
目) 7 g ,置索氏提取器中,加入甲醇 80 mL, 于 80 e
水浴回流提取 4 h,减压回收甲醇, 残渣用 20 mL 水
溶解,继续加入 10% NaOH 溶液 15 mL 摇匀, 再用
水饱和的正丁醇溶液 20 mL 萃取 2次,旋转蒸发回
收正丁醇, 残渣用无水甲醇充分溶解后定容至 10
mL 的容量瓶中,作为供试品溶液。
精密吸取供试品溶液 6 LL 及黄芪甲苷对照品
溶液 2和 015 LL 点在同一块薄层板上, 用氯仿-甲
醇-水( 65B30B10)作为展开剂展开,待展开到一定距
离,取出薄层板,记录前沿距离,挥去展开剂, 用 5%
的硫酸乙醇溶液显色, 待显色剂挥干后,将薄层板放
在 105 e 的烘箱中显色 5~ 10 min,在薄层板上面再
盖一块玻璃板封严, Ks= 390 nm, KR= 590 nm 下扫
#461#中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
描,记录每一个扫描图谱,利用外标两点法测定黄芪
甲苷的含量,结果见表 1。
表 1 不同地区黄芪中黄芪甲苷的含量( n= 3)
Table 1 Content of astragaloside of Astragalus Linn1
from different habitats ( n= 3)
样号 地区 含量/ ( mg#100g- 1) R SD / %
1 哈尔滨(蒙古黄芪) 159160 2124
2 长春市医院 59150 3145
3 吉林二道江 19123 2167
4 长春市人民药店 58116 4113
5 河北 41139 2164
6 山西 106106 4154
7 内蒙包头 39186 1101
8 黑龙江五大连池 47147 5159
9 大兴安岭 63180 2172
10 吉林四平 105179 1132
11 黑龙江呼兰 106118 4115
12 河北 52163 2101
13 山东 58148 4107
14 安徽亳州 33110 2109
15 甘肃陇西 153170 2106
16 四川阿坝 9114 1122
17 内蒙赤峰 107196 3189
18 河南 137170 1130
218 聚类分析结果:本实验对所测的化学数据进行
标准化处理,选用中位数法( median clustering)进行
聚类, 用余弦法( cosine)计算样品间相似性程度, 聚
类分析结果见图 1。
3 讨论
本实验对黄芪中黄芪皂苷类成分黄芪甲苷进行
了提取分离,并以黄芪甲苷为指标成分,采用双波长
薄层扫描法,建立了黄芪甲苷的含量测定方法。结果
表明,此法简便易行,可用于药材中该成分的定量分
析方法。
本实验用系统聚类分析方法对 18 个产地的黄
芪样品进行了化学模式识别研究, 建立了只通过
T LC分析即对黄芪质量作出评价的模型。系统聚
类分析将样品分为 3类,根据传统中药生态学鉴定的
结果,将黄芪质量分为较好、一般和较差。由聚类结
图 1 聚类分析树状图
Fig11 Dendric drawing of clustering analysis
果看出,大多数产地的黄芪被聚为 1类或 2类, 即质
量较好或一般。结果表明,蒙古黄芪和膜荚黄芪被
列为优等品, 该结果与5中华人民共和国药典62000
年版将蒙古黄芪和膜荚黄芪列入正品相一致。
本研究在传统中药生药学鉴定的基础上,以整
体化学成分信息为依据, 采用化学模式识别方法建
立了中药材黄芪的质量评价方法。该方法在一定程
度上反应了黄芪质量的优劣,如果结合药理实验对
其药效进行验证, 则黄芪的化学模式识别研究会更
加完善和科学。
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美国 ALPHA实验室认可
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Tianjin Jianfeng Natural Product R & D Co. , Ltd
天津尖峰天然产物公司
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