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RP-HPLC 法测定荆芥穗中胡薄荷酮的含量
张　丽, 单鸣秋, 孔　铭, 丁安伟Ξ
(南京中医药大学, 江苏 南京　210029)
　　荆芥穗为唇形科一年生草本植物荆芥
S ch iz onep eta tenu if olia (Ben th1) B riq1 的干燥地上
部分。荆芥穗性温、味辛; 其生品具有解表散风、透疹
之功效, 主治风寒感冒、咽喉肿痛及多种皮肤病, 为
中医临床常用药物。荆芥穗炒炭后专功止血, 可用于
吐血、便血、崩漏、产后血晕等。《中华人民共和国药
典》2000 年版中尚无荆芥穗药材指标性成分的含量
测定方法, 本实验以R P2H PL C 法对其挥发油中的
主要成分胡薄荷酮的含量进行了测定, 方法回收率
高、分离度好, 结果满意。
1　仪器和试药
PE- 100 高效液相色谱仪,W aters- 2487 紫外
检测器, 岛津L IBROR A EL - 40SM 电子分析天平
(精确度为十万分之一)。
胡薄荷酮对照品由美国A ldrich 公司提供 (供
含量测定用, 批号: 10529PO )。按《中华人民共和国
药典》2000 年版一部附录Î D 高效液相色谱法中
的“不加校正因子的主成分自身对照法”进行对照品
纯度检查, 图谱积分时间大于胡薄荷酮保留时间的
2 倍, 结果表明胡薄荷酮对照品纯度为 98% 以上。改
变流动相比例使保留时间增减 1 倍以上, 色谱中未
出现杂质峰。
甲醇为色谱醇 (淮安精细化工研究所) , 水为亚
沸蒸馏水, 其余试剂均为分析纯。
荆芥穗购于安徽亳州药材市场, 产地为安徽, 共
3 批。经南京中医药大学吴启南教授鉴定为唇形科
植物荆芥 S ch iz onep eta tenu if olia (Ben th1) B riq1
的干燥花穗。
2　方法与结果
211　色谱条件: 色谱柱: 中国科学院大连化学物理
所, K rom asil C 18 (200 mm ×416 mm , 5 Λm ) ; 流动
相: 甲醇2水 (80∶20) ; 体积流量 110 mL öm in; 测定
波长 252 nm ; 柱温为 30 ℃; 进样量: 10 ΛL ; 理论板
数以胡薄荷酮峰计不得低于3 000。
212　内标溶液的制备: 取萘 150 m g, 精密称定, 置
25 mL 量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即
得 (含萘 610 m gömL )。色谱图见图 1。
213　供试品溶液的制备
21311　药材供试品溶液的制备: 取药材粗粉 110 g,
精密称定, 置 25 mL 具塞锥形瓶中, 加入 10 mL 甲
醇, 超声处理 (功率 250 W , 频率 50 kH z) 20 m in, 滤
过 ; 滤渣和滤纸再加10 mL 甲醇 , 超声处理 (功率
图 1　内标物萘 (A)、胡薄荷酮 (B)、荆芥穗 (C)、荆芥穗挥发油 (D )的 HPLC 图
F ig11　Chromatogram s of naphthalene (A) , pulegone (B) , Sp ica Sch izonep etca (C) , volatile o il of Sp ica Sch izonep etea (D )
·4141· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
收稿日期: 2004202212
250 W , 频率 50 kH z) 20 m in, 滤过, 用适量甲醇洗涤
2 次, 合并两次滤液、洗涤液置 25 mL 量瓶中, 摇匀。
精密量取该溶液 5 mL、内标溶液 015 mL , 置 10 mL
量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 微孔滤膜 (0145 Λm )
滤过, 即得。
21312　荆芥穗挥发油供试品溶液的制备: 取 3 批荆
芥穗药材, 按《中华人民共和国药典》2000 年版一部
附录 XD 挥发油测定法中的A 法测定其挥发油的
得率, 得其平均得率为 01956% ; 3 批荆芥穗挥发油
的批号分别为 20030427, 20030428。20030429。提取
的挥发油加无水硫酸钠脱水。
取荆芥穗挥发油 013 g, 精密称定, 置 100 mL
量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀。精密量取
该溶液和内标溶液各 015 mL , 置 10 mL 量瓶中, 加
甲醇至刻度, 摇匀, 微孔滤膜 (0145 Λm )滤过, 即得。
214　线性关系的考察: 精密称取胡薄荷酮对照品
01093 6 g, 置 25 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 制成胡
薄荷酮对照储备液 (31744 m gömL )。采用逐级稀释
法再分别制成01187 2、01093 6、01046 8、01023 4、
01011 7 m gömL 的系列对照品溶液, 并加入适量内
标溶液, 使每份对照品溶液中内标浓度均为 013
m gömL。分别吸取上述 5 份溶液各 10 ΛL , 注入高效
液相色谱仪, 以胡薄荷酮与内标峰面积比值为纵坐
标 (Y ) , 对照品质量浓度 (m gömL ) 为横坐标 (X ) , 绘
制标准曲线, 得回归方程: Y = 01002 254+ 71407 X
(r= 01999 9)。表明胡薄荷酮在 117～ 1 872 ng 呈良
好的线性关系。
215　精密度试验: 取01093 6 m gömL 的对照品为
溶液依法测定, 连续进样 6 次, 测定胡薄荷酮的峰面
积, 其R SD 为 0142%。以 1 号药材样品供试液作为
考察对象, 依法测定, 连续进样 6 次, 测定胡薄荷酮
的峰面积, 其R SD 为 0142%。
216　稳定性试验: 取 1 号药材样品供试液, 分别置
0、1、2、4、6、8 h, 依法测定一次, 共测定 6 次, R SD 为
0126% , 表明供试液中胡薄荷酮在 8 h 内稳定。
217　重现性试验: 用 2 号药材, 依法处理样品 6 份,
测定, 结果表明胡薄荷酮的质量分数为 51028 m gö
g, R SD = 1107%。
218　回收率试验: 精密称取 2 号药材各 015 g 共 6
份, 每份分别加入胡薄荷酮对照液 (21308 m gömL )
1 mL , 测定, 计算胡薄荷酮平均回收率为 98185% ,
R SD = 1129%。
219　样品测定: 共对 3 批药材和 3 批荆芥挥发油进
行胡薄荷酮含量测定, 结果见表 1。
表 1　荆芥穗及其挥发油中胡薄荷酮的含量测定结果 (n= 3)
Table 1　Pulegone in Sp ica Sch izonep etae
and its vola tile o il (n= 3)
样　品 样品号 胡薄荷酮ö(m g·g- 1)
荆芥穗 1 41606
2 51017
3 41565
20030427 60143
荆芥穗挥发油 20030428 60136
20030429 61129
3　讨论
311　荆芥穗为常用的解表药, 其主要药效部位通常
认为是挥发油, 故对荆芥及荆芥穗药材的质量控制
多针对挥发油部位, 如《中华人民共和国药典》2000
年版中荆芥药材的质量控制是挥发油的含量[1 ] , 但
用挥发油的得率控制药材质量相对较为粗糙, 宜采
用准确度较高的色谱法。通常挥发油成分的测定都
采用气相色谱法[2 ] , 但气相色谱法中出峰多, 干扰
大, 色谱条件复杂, 如荆芥挥发油含化学成分超过
30 种[3 ]; 而相比较而言, 高效液相色谱法出峰数目
较少, 干扰较小, 色谱条件简单, 可作为有紫外吸收
的挥发性成分的含量测定方法。荆芥穗挥发油, 其主
要成分是单萜类化合物, 如薄荷酮、胡薄荷酮等, 而
以胡薄荷酮含量最高 (由上述检测数据可知含量大
于 50% ) , 且胡薄荷酮具有共轭结构, 其紫外最大吸
收峰在 252 nm 处, 在此波长处其他成分干扰很小,
分析时间短, 故本实验选择高效液相色谱法建立荆
芥穗药材的质控方法, 以期为其他含荆芥穗制剂的
质控方法提供借鉴。
312　笔者考察了药材的提取条件, 对其中的提取溶
剂和提取次数进行了考察。在提取溶剂的考察试验
中, 选择了以甲醇和流动相作为提取溶剂, 结果表
明, 以甲醇为提取溶剂效果较好; 在提取次数的考察
试验中, 结果表明以甲醇两次提取就已完全, 故确定
提取次数为两次。荆芥穗挥发油因其所含成分为脂
溶性, 在甲醇中溶解性很好, 故荆芥穗挥发油直接采
用甲醇溶解即可。
313　因所测成分为挥发性成分, 尤其是测定挥发油
时, 色谱柱使用久后可能柱效下降较多, 此时选用一
些洗脱能力强的溶剂如四氢呋喃等可使柱效恢复。
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·5141·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月