全 文 ：验前禁食不禁水 18 h。给禁食大鼠 ig 蒸馏水 215
mL ö100 g, 收集 2 h 尿量, 尿量≥1 mL 的大鼠用于
实验。实验开始时轻压下腹, 排净余尿, 各组大鼠 ig
相应药液 215 mL ö100 g, 对照组 ig 等量生理盐水,
立即放入代谢笼内。收集给药后 1～ 6 h 的尿液, 每
小时量取体积 1 次, 计算大鼠尿量 (mL ö100 g) , 结
果见表 3。结果显示不同剂量的复方决明提取物在
给药后 1～ 6 h 各时间段对尿量均无影响, 结合表 2
复方决明提取物不能降低血浆中 ALD 含量, 说明
复方决明提取物的降压作用与尿量无关。
表 3 复方决明提取物对 SHR 尿量的影响 (x±s, n= 8)
Table 3 Effect of extracts from CJ on ur ine of SHR (x±s, n= 8)
组 别
剂量ö(g·kg- 1) 给药前尿量ö(mL ·100 g- 1) 给药后尿量ö(mL ·100 g- 1)1 h 2 h 3 h 4 h 5 h 6 h
生理盐水 - 1133±0125 0141±0122 0171±0138 0185±0154 1102±0155 1112±0164 1121±0172
复方决明提取物 418 1130±0140 0137±0131 0159±0138 0165±0138 0184±0140 1105±0142 1118±0152
712 1158±0120 0123±0116 0149±0112 0167±0112 0185±0122 0190±0124 0198±0131
915 1129±0136 0125±0115 0145±0117 0153±0122 0169±0122 0182±0133 0190±0125
氢氯噻嗪 0101 1126±0140 1124±01433 3 1185±01513 3 2139±01283 3 2154±01423 3 2178±01323 3 2191±01313 3
与生理盐水组比较: 3 3 P < 0101
3 3 P < 0101 vs N S group
3 讨论
目前抗高血压化学药物的降压机制研究较多,
也较明确。肾素2血管紧张素系统在机体的血压、水
和电介质平衡的调节上起着重要作用, 对高血压的
诊断有临床价值; ALD 是一种非常强的电解质排泄
的调节因子, 能增加N a+ 和 C l- 的回收, 排出 K+ 和
H + , 影响电解质和水的排泄及血容量, 维持机体内环
境稳定; ET 具有强烈收缩冠状动脉、肾小动脉、提高
全身血压作用, 是已知最强的收缩血管物质; AN P 具
有较强的利钠、利尿作用, 对血压有一定影响。
本实验通过测定 AN G Ê , RA , ALD , ET ,
AN P, 尿量等血压相关物质的含量, 研究复方决明
提取物的降压机制, 结果发现不同剂量的复方决明
提取物均能降低AN GÊ 含量和 RA , 但对 ALD , 尿
量,AN P, ET 均无影响。说明复方决明提取物的降
压作用与降低肾素2血管紧张素有关, 而与 ALD ,
ET ,AN P, 尿量无明显关系。
References:
[ 1 ] Cong H L , H uang T G, Zhou L J , et a l. T he influence re2
seach ing of NO and AN GÊ on endo thelium cell function and
construction of rat [J ]1 Ch in J H yp ertension (高血压杂志) ,
1999, 7 (4) : 37423771
[ 2 ] Yang T , Cao H , H u Z Y, et a l. Ro le of valsartan on b lood
p ressu re and renn in2angio tensin of spon taneously hyperten2
sive rats [J ]1 Ch in J H yp ertension (高血压杂志) , 2000, 8
(1) : 912931
[ 3 ] LüG Y, L iW L , Shen K K, et a l. Effect of Xueling on re2
lat ing substances of renal hypertension in rats [J ]1 Ch ina J
Ch in M ater M ed (中国中药杂志) , 1998, 23 (6) : 36723711
[ 4 ] W ang J , Yuan J1 Change of p lasm a endo thelin and atrial na2
triu reticin hypertension treated w ith enalap ril and aro tino lo l
[J ]1 Ch in J H yp ertension (高血压杂志) , 2000, 8 (3) : 2271
[ 5 ] L i Y K. M ethod ology in P harm acolog ica l E xp erim en t on Ch i2
nese M ateria M ed ica (中药药理实验方法学) [M ]1 Shang2
hai: Shanghai Scien tific and T echn ical Pub lishers, 19911
和厚朴酚与厚朴酚在缓解大鼠吗啡戒断反应中对 Β-内啡肽的影响
黄德彬1, 余昭芬2, 胡泽华2Ξ
(11 湖北民族学院医学院 药理教研室, 湖北 恩施 445000; 21 湖北民族学院医学院 生物化学教研室, 湖北 恩施 445000)
摘 要: 目的 探讨和厚朴酚 (HL ) 与厚朴酚 (M L ) 在缓解大鼠吗啡戒断反应中对 Β2内啡肽 (Β2EP) 的影响。方法
建立急性吗啡依赖及吗啡自然戒断大鼠模型, 分别 ip HL 与M L , 侧脑室插管抽取脑脊液 (CSF) , 放免法测定 CSF
中 Β2EP 含量。结果 HL 和M L 可明显抑制吗啡戒断反应, 二者效应相当, 并呈量效关系; 吗啡依赖大鼠 CSF 中Β2EP 含量明显低于正常大鼠, 给吗啡戒断大鼠 ip HL 和M L 80 m gökg 后, CSF 中 Β2EP 明显高于生理盐水 (N S)
组或低剂量 HL 和M L 吗啡依赖组, 且呈量效关系; 正常大鼠 ip HL 和M L 后 CSF 中 Β2EP 含量也明显提高, 且
·281· 中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
Ξ 收稿日期: 2003206230
基金项目: 湖北省教育厅重大基金项目 (2000Z09003) ; 2002 年国家药品监督管理局特殊药品研制项目 (T YL 20020104)
作者简介: 黄德彬 (1966—) , 男, 副教授, 副主任医师, 发表论文 33 篇, 获国家专利 4 项, 研究方向为中草药戒毒药理和“肠袢肾”的研究。
T el: (0718) 8290198
HL 作用强于M L (P < 0105)。结论 HL 和M L 可明显抑制吗啡戒断反应, 这一抑制效应与脑内 Β2EP 的增加有
关。这种效应, 对吗啡依赖大鼠 HL 和M L 作用相当 (P > 0105) , 对正常大鼠 HL 作用强于M L (P < 0105)。
关键词: 和厚朴酚; 厚朴酚; 吗啡依赖; Β2内啡肽
中图分类号: R 971; R 96513; R 28515 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670 (2004) 02 0182 03
Effect of honok iol and magnolol on Β-endorph in in rel ievable
m orph ine w ithdrawa l sym ptom s in ra ts
HUAN G D e2b in1, YU Zhao2fen2, HU Ze2hua2
(11D epartm ent of Pharm aco logy; 2. D epartm ent of B iochem istry, Schoo l of m edicine,
H ubei Inst itu te fo r N ationalit ies, Ensh i 445000, Ch ina)
Key words: honok io l; m agno lo l; mo rph ine dependen t; Β2endo rph in
现代药理已证实和厚朴酚 (honok io l, HL ) 与
厚朴酚 (m agno lo l, M L ) 均有明显镇静、镇痛、延长
睡眠、止泻、降压等作用[1 ]。笔者通过实验证明二者
有抑制吗啡戒断反应作用, 并通过对 Β2内啡肽 (Β2
EP) 的测定, 证实此作用与脑内 Β2EP 增加有关。
1 材料与方法
111 动物: 雄性 SD 大鼠, 体重 220～ 250 g, 由湖北
省实验动物中心提供。
112 药品、试剂及仪器: 盐酸吗啡, 10 m gömL , 青
海制药厂生产, 批号 020608。Β2EP 放免试剂盒, 由
第二军医大学神经生物学教研室提供。YT 1450 型
冷冻离心机, FJM —182 型 Χ计数仪。
113 HL 和M L 的提取[2 ]: 取大叶木兰树皮粗粉
1 000 g, 水蒸气蒸馏提取挥发油。药渣及水加入 10%
N aOH , 放置 24 h 滤过, 滤液用氯仿提取 2 次, 去氯
仿, 稀盐酸调至 pH 2～ 3, 氯仿提取 3 次, 合并氯仿
液, 2% 碳酸氢钠洗涤后无水硫酸钠干燥, 回收氯仿,
得棕色结晶物。取 1ö2 粗结晶物通过氧化铝柱、以氯
仿2醋酸乙酯 (8∶2) 洗脱, 当酚性成分流出后, 每 10
mL 换 1 瓶, 第 1～ 3 瓶合并, 回收溶剂后得白色结晶
物, 再水重结晶得 HL 15 g (H PL C 鉴定, 纯度
98% )。另 1ö2 粗结晶物用硅胶柱色谱, 以苯2醋酸乙
酯 (8∶2) 洗脱, 收集无色部分, 回收溶剂得粗结晶
物, 再用水重结晶, 冷置得无色针晶物 M L 45 g
(H PL C 鉴定, 纯度 98% )。
114 实验分组及吗啡依赖模型制备: 30 只 SD 大
鼠作为对照组, 随机分 3 组即对照生理盐水 (N S)、
对照 HL 和 对照M L 组, 分别 ip N S (0. 2 mL ) , HL
(80 m gökg) ,M L (80 m gökg)。另取 70 只 SD 大鼠
作为吗啡依赖组 (M D ) , 随机分 7 组, 即 M D 2N S
组,M D 2HL、M D 2M L 各 3 组, 均 sc 盐酸吗啡, 每天
2 次, 剂量从每天 20 m gökg 开始, 每天增加 20 m gö
kg, 给药 5 d, 最终达 100 m gökg 后维持 2 d。在第 6
天上午最后 1 次 sc 给药后 115 h,M D 2N S 组 ip N S
0. 2 mL ,M D 2HL、M D 2M L 各组分别 ip HL、M L 各
5, 40, 80 m gökg。于 015 h 后分别观察每只大鼠 1 h
内各种自然戒断症状。
115 戒断症状内容: 观察并记录咬牙 ( teeth chat2
terling, TC)、湿狗样抖动 (w etshakes, W S)、扭体
(w rith ing, W R )、舔阴 (pen ile lick ing, PL ) , 逃避
( escape at temp ts, EA ) 的次数, 按文献[3 ] 进行评
分, 并记录体重丢失 (w eigh t lo se, W L ) 克数。
116 脑脊液 (CSF ) 中 Β2EP 的测定[3 ]: 观察完毕
后, 各组大鼠 ip 水合氯醛 (10% , 014 mL ö100 g) 麻
醉, 按主体定位图的定位法给双侧脑室埋填外径
017 mm、内径 014 mm 不锈钢瘘管, 外用聚乙烯管
连接, 用推挽灌流法 (pu sh2pu ll perfu sion) [3 ] , 用预
冷小试管收集 CSF 300 ΛL 备用。用放免法测定
CSF 中 Β2EP 的含量。
117 数据处理: 所有数据均以 x ±s 表示, 用 t 检验
比较组间差异。
2 结果
211 HL 与M L 对吗啡依赖大鼠戒断症状的影响:
HL、M L 各剂量可不同程度抑制吗啡自然戒断反
应, 并呈量效关系。M D 2HL、M D 2M L 中、高剂量组
吗啡戒断症状评分显著低于 M D 2N S 组 (P <
0101)。而M D 2HL 与M D 2M L 各等剂量组间比较
差异无显著性, 表明 HL 与M L 药效相当, 见表 1。
212 各组 CSF 中 Β2EP 含量比较: 对照组 ip HL 和
M L 各 80 m gökg 可显著提高 CSF 中 Β2EP 含量, 与
对照N S 组比较, 差异显著 (P < 0101) , 且 HL 强于
M L (P < 0105)。M D 组 ip N S 后CSF 中 Β2EP 含量
明显低于对照N S 组 (P < 0101)。M D 2HL、M D 2M L
各组CSF 中 Β2EP 显著高于M D 2N S 组 (P < 0101) ,
且呈量效关系。M D 2HL 和M D 2M L 80 m gökg 组
CSF 中 Β2EP 高于对照N S 组 (P < 0101) , 见表 2。
·381·中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
表 1 吗啡依赖大鼠戒断症状评分 (x±s, n= 10)
Table 1 W ithdrawal symptom s score of morph ine dependen t rats (x±s, n= 10)
组 别
剂 量ö(m g·kg- 1) 戒断症状评分TC W R W S PL EA WL ög
M D 2N S - 44180±3151 32127±4171 69153±6131 37185±3163 29168±4177 13121±1148
M D 2HL 5 41110±3188 31121±5143 61151±6121 33172±5165 22137±51123 3 12185±1163
40 29187±51713 3 21136±21253 3 48113±51273 3 26112±31553 3 17169±21383 3 10189±11443 3
80 20123±41183 3 15167±31173 3 28145±61533 3 19142±41253 3 13119±21463 3 8168±11793 3
M D 2M L 5 42191±4173 29198±4168 66191±5184 36122±4111 24153±41893 12196±1137
40 31152±31483 3 20185±21633 3 47152±51643 3 25163±31413 3 16181±21253 3 11114±11033 3
80 24153±41213 3 16117±21123 3 31168±61233 3 18181±31583 3 12143±2171 8111±11543 3
与M D 2N S 组比较: 3 P < 0105 3 3 P < 0101
3 P < 0105 3 3 P < 0101 vs M D 2N S group
表 2 CSF 中 Β-EP 含量 (x±s, n= 10)
Table 2 Β-EP con ten t in CSF (x±s, n= 10)
组 别 剂量ö(m g·kg- 1) Β2EP 含量ö(pg·mL - 1)
对照N S - 5213±1114
对照 HL 80 8318±12163 3 ▲
对照M L 80 7117±11183 3
M D 2N S - 3113± 9163 3
M D 2HL 5 3612±11153 3
40 5711±1018△△
80 6518±13193 3 △△# #
M D 2M L 5 3416±10143 3
40 5412± 911△△
80 6814±12173 3 △△# #
与对照 N S 组比较: 3 3 P < 0101; 与M D 2N S,M D 2HL ,M D 2
M L (5 m gökg) 组比较: △△P < 0101; 与 M D 2HL (40 m gökg) ,
M D 2M L (40 m gökg) 组比较: # # P < 0101; 与对照M L 组比较:
▲P < 0105
3 3 P < 0101 vs con tro l N S group; △△P < 0101 vs M D 2N S,
M D 2HL (5 m gökg) , M D 2M L (5 m gökg) group; # # P < 0101 vs
M D 2HL (40 m gökg) , M D 2M L (40 m gökg) group; ▲P < 0105 vs
con tro lM L group
3 讨论
现代医学认为, 吗啡依赖成瘾是因长期大量外
源性阿片物质 (与内源性脑啡肽结构相似) 抑制了
内源性脑啡肽 (如 Β2EP 等) 的产生[4 ] , 当停止供给
外源性阿片物质时, 体内暂时缺乏脑啡肽物质的调
节作用, 相关神经末梢就会突然过量释放某些神经
递质如乙酰胆碱、去甲肾上腺素、多巴胺、52H T、组
胺以及 Ca2+ 通道持久开放等, 干扰正常神经系统功
能, 产生一系列戒断症状[5 ]。这与许多报道吗啡自然
戒断使 CSF 中 Β2EP 含量低于正常相一致[6 ]。
本实验证实 HL 与M L 可显著抑制吗啡依赖
大鼠自然戒断的各项反应, 且抑制效应呈量效关系。
除体重减少抑制幅度不大外, 其他如咬牙、扭体、湿
狗样抖动、舔阴、逃避等戒断反应均有较大幅度减
轻。现代药理证实 HL 与M L 具有中枢抑制作用和
肌肉松驰作用。文献报道 HL 与M L 能明显抑制由
于刺激多巴胺系统所致的小鼠运动兴奋, 有效抑制
抽搐[1 ]。另报道 HL 能对抗 K+ , Ca2+ , 去甲肾上腺
素等引起的大鼠主动脉收缩, 此作用是通过阻断
Ca2+ 通道而发挥的[7 ]。实验发现 HL 与M L 能对抗
由甲基苯丙胺或阿朴吗啡所致的兴奋作用, 剂量在
250～ 1 000 m gökg 可使动物所有反射消失, 还能抑
制脑干网状激活系统, 丘脑下部激活系统及脊髓兴
奋[1 ]。表明 HL 中枢抑制作用可能与抑制多巴胺、去
甲肾上腺素等神经递质释放及阻断 Ca2+ 通道有关,
而此作用可能又与促进脑啡肽 (如 Β2EP 等) 释放
有关。本实验中 HL 与M L 可使正常及吗啡戒断大
鼠 CSF 中 Β2EP 含量明显升高, 且呈量效关系, 其
特点是: 对正常大鼠 CSF 中 Β2EP 含量升高作用,
HL 强于M L ; 对吗啡依赖大鼠二者作用相当。由
此, 可推测 HL 与M L 的中枢抑制作用和抑制大鼠
吗啡戒断反应与 Β2EP 的动员有关, 这可能不是惟
一途径, 其详细机制有待进一步研究。
References:
[ 1 ] W ang Y S, D eng W L , Xue C S1 P harm acolog ica l and A p2
p lica tion of T rad itiona l Ch inese M ed icine (中药药理与应用)
[M ]1 2nd ed. Beijing: Peop le’s M edical Pub lish ing House,
19981
[ 2 ] Sen W K1 E x traction and S ep ara tion of N a tu ra l P harm aceu2
tic Comp onen ts (天然药物成分提取分离与制备) [M ]1 T ian2
jin: Ch inese M edicinal Sciences and T echno logy Pub lish ing
House, 19991
[ 3 ] L iao Z Y, T ian S M , Q iu X C1 Effect of m elaton in on the Β2
endo rph im in relievab le mo rph ine w ithdraw al symp tom s in
rats [J ]1 Ch in M en t H ea lth J (中国心理卫生杂志) , 2001,
15 (6) : 40224041
[ 4 ] W eiW , Sheng Y X, D ing C H , et a l. Research of the m ela2
ton in relievab le mo rph ine w ithdraw al symp tom s and relation
w ith enkephalin in m ice [J ]1 Ch in P harm acol B u ll (中国药理
学通报) , 1998, 14 (1) : 722741
[ 5 ] Q iu Y, Kang L B, Q iu X C1 Effect of m elaton in on the mo r2
ph ine w ithdraw al symp tom s and monoam ine of p lasm a in
m ice [J ]1 N at M ed J Ch ina (中华医学杂志) , 1998, 78 (9) :
70427061
[ 6 ] Guo X H , Xu G L , Zhang Z J , et a l. Study on the changes ofΒ2EP, A CTH , co rtiso l and testo terone concen tration in hero2
in2dependen t and mo rph ine2dependen t rhesus [J ]1 Ch in J
D rug D ep end (中国药物依赖性杂志) , 1999, 8 (1) : 302331
[ 7 ] L iu F, H uang S M 1 Research on the effect of honok io l in an2
tagon ism of calcium op son in [J ]1 Ch in P harm acol B u ll (中国
药理学通报) , 1993, 9 (1) : 481
·481· 中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月