全 文 ：RP-HPLC 法测定甘草中甘草苷和异甘草苷的含量
付玉杰, 祖元刚3 , 赵春建, 李春英Ξ
(东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室, 黑龙江 哈尔滨　150040)
　　甘草为豆科植物甘草 G ly cy rrh iz a u ra lensis
F isch. 、胀果甘草 G. inf la ta Bat. 或光果甘草 G.
g labra L. 的干燥根及根茎, 具有清热解毒、止咳祛
痰、补脾和胃、调和诸药的功效, 历代本草皆视其为
重要药物[1 ]。甘草苷和异甘草苷是甘草中的两个重
要黄酮类化合物, 药效显著[2 ] , 具有抗溃疡、抗艾滋
病病毒等作用[3, 4 ]。甘草苷或异甘草苷的含量测定方
法已有文献报道[5～ 7 ] , 但两种活性成分同时用
H PL C 方法的测定未见报道。本实验以R P2H PL C
同时测定甘草中的甘草苷和异甘草苷的含量。结果
表明, 甘草苷和异甘草苷在同一色谱条件下均得到
较好分离, 并可进行含量测定。
1　仪器与材料
日本 Jasco 高效液相色谱仪, 1580 泵, 1575 型
紫外检测器,V ersion 611 色谱工作站。甲醇, 色谱纯
(山东禹王实业有限公司禹城化工厂) ; 冰醋酸, 分析
纯 (哈尔滨市新春化学试剂厂) ; 甘草苷 (98% )、异甘
草苷 (98% ) 对照品 (美国A cro s D rgan ics 公司) ; 甘
草 G ly cy rrh iz a u ra lensis F isch. 分别采自黑龙江省
肇东市爱民乡、内蒙古敖汉旗下洼镇、新疆石河子市
沙湾县金沟河乡, 由东北林业大学森林植物生态学
教育部重点实验室聂绍荃教授鉴定。
2　方法与结果
211　色谱条件: 色谱柱为 C 18 OD S 不锈钢色谱柱
(25 mm ×416 mm , 5 Λm , H PL C T echno logy L td.
日本) ; 检测波长: Κ= 254 nm ; 流动相: 甲醇2013%
HOA c (1∶2) ; 柱温: 室温; 流速: 110 mL öm in; 进样
量为 10 ΛL。
　　在该色谱条件下, 甘草苷的保留时间为 111400
m in, 异甘草苷的保留时间为 471283 m in, 甘草苷、
异甘草苷对照品及甘草生药样品色谱图见图 1。
212　分析样品制备方法的选择
21211　超声法: 将甘草生药烘干粉碎 (过 60 目筛)
图 1　甘草苷对照品 (A)、异甘草苷对照品
(B)和甘草样品 (C)的 HPLC 色谱图
F ig. 1　HPLC chromatogram s of l iquir itin (A) , isol i-
quir itin (B) , and G. ura lens is sample (C)
成末, 称取 015 g, 加 20 倍量无水甲醇, 超声提取
10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 m in, 离心、分离提取
液, 定容至 25 mL。准确吸取供试品溶液 10 ΛL 进
样, R P2H PL C 分析, 测定甘草苷和异甘草苷浓度,
计算提取率。
21212　索氏提取法: 将甘草生药烘干粉碎 (过 60 目
筛)成末, 称取 115 g, 加 10 倍量无水甲醇, 索氏提取
60, 120, 180, 240, 300, 360, 420, 480, 540 m in, 将提
取液定容至 100 mL。准确吸取供试品溶液 10 ΛL 进
样, R P2H PL C 分析, 测定甘草苷和异甘草苷浓度,
计算提取率。
21213　回流提取法: 将甘草生药烘干粉碎成末, 称
取 180 g, 加 10 倍量无水甲醇, 回流提取 30, 60, 90,
120, 150, 180 m in。准确吸取供试品溶液 10 ΛL 进
样, R P2H PL C 分析, 测定甘草苷和异甘草苷浓度,
计算提取率。
　　结果表明, 超声提取、索氏提取、回流提取对甘
草苷和异甘草苷的提取率分别在 50, 420, 120 m in
时达到最大值, 分析结果见表 1。
　　表 1 可见, 对于甘草苷来说, 超声提取比索氏提
取和回流提取的提取率高; 对于异甘草苷来说, 索氏
提取比超声提取和回流提取的提取率高, 但索氏提
取与超声提取的测定结果无显著性差异。超声提取
操作简便易行, 时间短, 故样品制备方法确定为无水
甲醇超声提取 50 m in。
·675· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 5 期 2004 年 5 月
Ξ 收稿日期: 2003208229
基金项目: 科技部中德政府间合作项目 (CHN 03ö028) ; 哈尔滨市科技攻关计划项目 (2003AA 3CS112)
作者简介: 付玉杰 (1967—) , 女, 黑龙江哈尔滨市人, 副教授, 1992 年毕业于东北师范大学化学系有机合成专业, 获理学硕士学位, 后在
哈尔滨医药股份有限公司技术中心从事新药研发工作, 2002 年毕业于东北林业大学植物学专业, 获理学博士学位, 现为德国
海德堡大学药学院博士后, 现主要从事植物天然活性成分的筛选和植物药的研发工作, 发表学术论文 20 余篇。
T el: (0451) 821905353 通讯作者　T el: (0451) 82191517　Fax: (0451) 82102082　E2m ail: zygo rl@public. h r. h l. cn
表 1　不同提取方法甘草苷和异甘草苷的测定结果 (n= 3)
Table 1　Analysis of l iquir itin and isol iquir itin
by differen t extraction methods (n= 3)
提取方法 提取时间öm in 甘草苷提取率ö% 异甘草苷提取率ö%
超声提取 50 2. 28 1. 32
索氏提取 420 2. 14 1. 36
回流提取 120 2. 02 1. 08
213　标准工作曲线的制备: 分别精密称取甘草苷和
异甘草苷对照品各 1100 m g 置于 1 mL Doff 管中,
用无水甲醇稀释至刻度摇匀, 使之成为浓度 1 m gö
mL 的对照品储备液。分别精密吸取甘草苷和异甘
草苷 1 m gömL 对照品储备液 20, 40, 80, 160, 320ΛL 置于 1 mL Doff 管中, 以无水甲醇稀释至 1 mL ,
摇匀, 配制成浓度为 20, 40, 80, 160, 320 ΛgömL 的
对照品溶液。以选定的色谱条件测定峰面积, 进行
R P2H PL C 分析。实验表明甘草苷和异甘草苷的浓
度 (X )与峰面积 (Y ) 呈线性关系, 以 Y 为纵坐标, X
为横坐标, 绘制标准曲线。甘草苷的回归方程为:
Y = (X - 71 930) ×10- 6ö7, r2= 01985 1; 异甘草苷
的回归方程为: Y = (X - 66 499) ×10- 6ö7, r2 =
01998 3。结果表明: 甘草苷和异甘草苷均在 20～ 320ΛgömL 线性关系良好。
214　稳定性试验: 取同一份供试品溶液, 分别在 0,
2, 4, 8, 24, 32, 48 h 进样测定, 结果表明供试品溶液
在 24 h 内稳定, 甘草苷峰面积的R SD 为 1151% , 异
甘草苷峰面积R SD 为 2104%。
215　精密度试验: 取同一批次的甘草生药的提取
液, 按选定的色谱条件测定, 结果甘草苷 R SD 为
1113% ; 异甘草苷R SD 为 1198% (n= 3)。
216　重现性试验: 取同一批次的甘草生药, 按超声
提取 50 m in 制备样品, 按选定的色谱条件测定, 结
果甘草苷R SD 为 0189% ; 异甘草苷 R SD 为 1160%
(n= 3)。
217　回收率试验: 精密称取已知含量的甘草生药样
品 3 份, 加入一定量的甘草苷和异甘草苷对照品, 按
超声提取 50 m in 方法制成供试液后, 按选定的色谱
条件测定甘草苷和异甘草苷的含量, 计算回收率。甘
草苷的平均回收率为 99160% , R SD 为 1120% (n=
3) , 异甘草苷的平均回收率为 98167% , R SD 为
2110% (n= 3)。
218　样品测定: 精密称取 3 个产地的甘草生药样
品, 按超声提取 50 m in 制备供试品, 并按选定的色
谱条件, 每个样品测定 3 次, 取平均值, 计算出甘草
苷和异甘草苷的含量, 结果见表 2。
表 2　不同产地甘草中甘草苷和
异甘草苷的含量测定 (n= 3)
Table 2　D eterm ination of l iquir itin and isol iquir itin　
in G. ura lens is from differen t habita ts (n= 3)
产　地 甘草苷含量ö% 异甘草苷含量ö%
黑龙江 2. 28 1. 32
内蒙古 2. 05 1. 08
新　疆 1. 45 0. 77
3　讨论
311　本实验对不同产地的甘草生药进行了考察, 结
果表明, 不同产地的甘草中甘草苷和异甘草苷的含
量差别很大, 其中黑龙江产的甘草苷和异甘草苷的
含量最高。这可能是因为甘草生药受生长环境、生长
时间及加工条件等因素的影响。
312　本实验对不同的样品制备方法 (索氏提取、回
流提取、超声提取)进行了考察, 对甘草苷来说, 超声
提取比索氏提取和回流提取的提取率高; 对异甘草
苷来说, 索氏提取比超声提取和回流提取的提取率
高, 但索氏提取与超声提取的测定结果无显著性差
异。同时超声提取时间短、操作简便易行, 故样品制
备方法确定超声提取, 提取时间以 50 m in 为宜。
313　为了考察流动相对色谱行为的影响, 曾选用不
同比例的甲醇2013% HOA c 为流动相。由于甘草生
药提取液中与甘草苷和异甘草苷相近保留时间的物
质较多, 为了达到基线分离的目的, 必须延长保留时
间, 减小流动相中甲醇的量。最后选用甲醇2013%
HOA c (1∶2) 为流动相, 甘草苷和异甘草苷均得到
较好分离, 两成分互不干扰而且甘草中的其他成分
对甘草苷和异甘草苷的测定基本不形成干扰。
314　本实验所建立的 R P2H PL C 测定甘草中甘草
苷和异甘草苷的定量方法, 为甘草的质量控制提供
了科学、有效的检测手段。
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