全 文 ：毛细管区带电泳法测定石明止血合剂中没食子酸的含量
丁　华 1 ,曹　红 2 ,水彩虹 2 ,邢俊波 2
( 1. 鄂尔多斯市药品检验所 ,内蒙古 鄂尔多斯　 017000; 2. 中国人民解放军总后勤部卫生部药品仪器检验所 ,北京　
100011)
　　石明止血合剂是由石榴皮、五倍子、明矾等制成
的中药制剂 ,具有止血、固涩、收敛之功效 ,用于各种
原因所致的上、下消化道出血 ,如消化道溃疡 ,出血
性胃炎等病症。方中石榴皮、五倍子的主要有效成分
都是没食子酸 [1 ]。 本品原质量标准为采用紫外分光
光度法测定没食子酸的含量 [ 2]。没食子酸的含量测
定文献报道还有高效液相色谱法 [3, 4 ]。本实验采用毛
细管区带电泳 ( capi llary zone elect ropho resis, CZE)
法测定石明止血合剂中没食子酸的含量 ,操作简便 ,
样品分离完全 ,结果准确可靠。
1　仪器与试药
HP
3D
CE毛细管电泳仪 ( Agilent公司 ,美国 ) ,
DAD检测器 , HP3D CD化学工作站。熔融石英毛细
管柱 (河北省永年光导纤维厂生产 )。
石明止血合剂由解放军第 454医院制剂室提供
(批号为 020501, 020601, 020602)。 没食子酸 (批号
为 0831-9501)、绿原酸 (批号为 0753-200111)对照
品均由中国药品生物制品检定所提供。试剂均为分
析纯 ,实验用水为超纯水。
2　方法与结果
2. 1　电泳条件:毛细管柱:未涂层毛细管 ( 48 cm×
50μm,有效长度 40 cm ) ;缓冲液: 25 mmol /L硼砂
( p H 9. 68) ;分离电压: 30 kV;检测波长: 214 nm;温
度: 25℃ ;进样条件: 5 k Pa , 3. 0 s。每天分析之前 ,用
0. 5 mo l /L氢氧化钠溶液冲洗毛细管 15 min。超纯
水冲洗 3 min。运行缓冲液冲洗 10 min。进样前分别
用 0. 5 mo l /L氢氧化钠溶液运行缓冲液冲洗 5
min。 电泳图见图 1。
2. 2　标准曲线和线性范围:分别取没食子酸对照品
和内标绿原酸适量 ,用乙醇溶解 ,定容 ,分别制得
0. 5 mg /mL对照品溶液及 1 mg /mL内标溶液。 分
别取对照品溶液 0. 25, 0. 5, 0. 75, 1. 0, 2. 0, 2. 5 mL
置 5 mL量瓶中 ,各加内标溶液 1. 0 mL,用乙醇稀
释至刻度 ,按选定的电泳条件测定 ,以没食子酸峰面
积与内标峰面积的比值 (Y )对没食子酸对照品的浓
度 ( X )作回归曲线 ,得标准曲线方程 Y= - 0. 210 3+
0. 028 1X , r = 0. 999 7。 线性范围为 25～ 250
μg /mL。
1-绿原酸　 2-没食子酸
1-ch lorogenic acid　 2-gallic acid
图 1　没食子酸对照品 (A)、石明止血合剂供试品 ( B)和空白样品 (C)的色谱图
Fig. 1　 CZE chromatograms of gallic acid (A) , Shiming Zhixue Mistura ( B) and blank sample (C)
2. 3　精密度试验: 在选定的测定条件下 ,将含有内
标的没食子酸对照品溶液连续进样 6次 ,结果峰面
积比值的 RSD= 1. 1%。
2. 4　重现性试验: 取同批号供试品 ( 020601)按 2. 7
项下方法制备溶液 ,重复测定各样品 5次 ,测得石明
止血合剂中没食子酸平均含量为 33. 44 mg /mL,
RSD= 2. 8% 。
2. 5　稳定性试验: 取同一份供试品溶液 ,每隔 1 h
进样一次 ,测定其没食子酸含量 ,结果 ,供试液在 6
h内所测结果一致 ,没食子酸含量 RSD= 1. 3%。
·910· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2002-11-26作者简介: 丁　华 ( 1973— ) ,女 ,内蒙古鄂尔多斯人 ,主管中药师 , 1993年毕业于内蒙古农业大学药用植物专业 ,研究方向为中药质量评价。 Tel: ( 0477) 8323808
2. 6　回收率考察:采用加样回收法。 按 2. 7项下方
法精密吸取石明止血合剂 ( 020601) 3份 ,每份 2. 5
m L,分别加入 74 mg没食子酸对照品 ,继续按 2. 4
项下的方法操作 ,求得没食子酸平均回收率为
96. 75% , RSD= 2. 5% , (n= 6)。
2. 7　样品溶液的配制和测定:精密吸取石明止血合
剂 5. 0 mL,加盐酸 0. 5 mL,于水浴中微沸水解 1 h,
冷却后用乙醚 20 mL,分 10, 5, 5 mL 3次萃取 ,合并
萃取液置蒸发皿中 ,蒸干 ,用乙醇定容至 25 mL量
瓶中。精密吸取 1 mL置 5 mL量瓶中 ,加乙醇稀释
至刻度 ,摇匀。精密吸取 1 m L上述溶液和 1 mL内
标置 5 mL量瓶中 ,加乙醇稀释至刻度 ,作为供试品
溶液。按选定的方法 ,测定石明止血合剂中没食子酸
含量 ,结果见表 1。
表 1　石明止血合剂中没食子酸的含量 (n= 3)
Table 1　 Determination of gallic acid in Shiming
Zhixue Mistura ( n= 3)
批　号 没食子酸含量 /( mg· mL- 1 ) RSD/%
020501 27. 96 2. 9
020601 33. 44 2. 7
020602 31. 26 2. 3
3　讨论
3. 1　最低检测限:以信噪比等于 3∶ 1为标准 ,测定
没食子酸的最小检测浓度为 1μg /mL。
3. 2　运行缓冲液的 pH对分离效果的影响: 在 25
mmol /L硼砂缓冲液 ( pH= 9. 68)中添加不同浓度
的氢氧化钠溶液 (相应 pH分别为 10. 52, 12. 24)。结
果表明 , pH为 9. 68时的分离效果最佳。
3. 3　检测波长的选择: 在实验中 ,对没食子酸对照
品溶液在 200～ 600 nm进行光谱扫描。结果没食子
酸在 214 nm处吸收值最大 ,灵敏度最高 ,故选择其
为测定波长。
3. 4　空白试验:按处方比例制备不含石榴皮、五倍
子药材的阴性对照溶液 ,按样品含量测定方法操作 ,
结果空白溶液在与没食子酸对照品相同保留时间
处 ,未显示明显色谱峰 (图 1) ,认为无干扰。
References:
[1 ]　Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed. VolⅠ .
[2 ]　 Bian A F, Ch ang Y P, Jin R L. Determination of galli c acid in
Shiming Zhixue Mis tu ra [ J] . China J Ch in Mater Med (中国
中药杂志 ) , 1994, 19( 5): 287-289.
[3 ]　 Wang B Q. Research of Qual ity Stan dard of Stand ard Mate-
r ials on Chinese Patent Med icine (中成药质量标准与标准物质
研究 ) [M ] . Beijing: China M edico-Pharmaceutical Science
and Techn ology Pub li shing Hou se, 1994.
[4 ]　 Mao X J, Xu Q L, Xiong H L, et al . Determination of gallic
acid in Relingqing Capsu les by HPLC [J ]. China J Ch in Mater
Med (中国中药杂志 ) , 2002, 8( 8): 589-591.
[5 ]　 An D K. Selected Topics on Mondern Pha rmaceut ical Analysis
(现代药物分析选论 ) [M ]. Beijing: China Medico-Pharma-
ceu tical Science and Technolog y Publi shing House, 2000.
HPLC测定刺五加软胶囊中异秦皮啶含量
赵陆华 ,屠　颖 ,赵振宇 ,徐继华 ,王广基
(中国药科大学 分析中心 ,江苏 ,南京　 210009)
　　刺五加软胶囊由刺五加浸膏粉、黄芪、枸杞等 6
味中药经特殊制剂工艺提取后 ,加定量植物油和赋
形剂制成 ,具有益气健脾、补肾安神之功效 ,用于脾
肾阳虚、体虚乏力、腰膝酸痛等。 刺五加含有多种化
学成分 ,其中异秦皮啶 ( iso f raxidin)具有明显的镇静
作用。 因制剂成分较多 ,干扰较大 ,文献报道的异秦
皮啶含量 HPLC测定方法 [ 1～ 3]不适宜本品。 经色谱
优化 ,样品处理方法考察 ,本实验建立了一种 HPLC
法测定其中总异秦皮啶含量 ,重现性好 ,可用于评价
刺五加及其制剂中该成分的指标。
1　仪器与试药
日本岛津 LC— 10A高效液相色谱仪 , SPT—
10A检测器 , C— R6A记录仪。甲醇为色谱纯 ,其余
均为分析纯 ,水为二次重蒸水。异秦皮啶对照品 (中
国药品生物制品检定所提供 ) ,刺五加软胶囊 (自制 ,
批号: 991011, 991013, 991016)。
2　方法与结果
2. 1　测定波长的选择: 取异秦皮啶对照品适量 ,加
流动相溶解 ,在 200～ 400 nm波长扫描 (图 1)。本品
在 343. 4 nm处有最大吸收 ,故选择 344 nm作为检
测波长。
2. 2　色谱条件:色谱柱: Alltima C18 ( 4. 6 mm× 250
mm , 5μm);流动相: 甲醇-水 -冰醋酸 ( 45∶ 55∶ 1) ;
流速: 1 mL /min;检测波长: 344 nm;进样量: 20μL。
·911·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2003-03-31