全 文 ：不同气候区银杏叶中黄酮和萜内酯含量的变化△
北京医科大学生药学生物技术研究室 ( 100083)　　刘叔倩 　郑俊华* * 　王　弘　陈　旭* * * 　丘　澄　果德安
摘　要　目的:为了比较不同气候区银杏叶中黄酮和萜内酯的含量 ,并进一步探讨影响二者含量的环境因素。 方
法: 采用 RP-HPLC法对样品中黄酮和萜内酯进行定量分析。 结果: 不同气候区之间银杏叶中两类成分的含量存在
很大差异 ,贵州高原区银杏叶中总黄酮和总内酯的含量明显高于其它地区。结论: 通过系统比较全国不同银杏分布
区银杏叶中有效成分的含量 ,为提高银杏叶质量 ,优化银杏叶资源提供了理论依据。
关键词　银杏　黄酮　萜内酯
Variation of Flavonoids and Terpenlactones in Ginkgo (Ginkgo biloba ) Leavic Conditions
from Regions with Different Climatic Conditions
　　 Depar tment of Pha rmacognostical Bio technolog y , Beijing Univ ersity o f Medical Sciences ( Beijing 100083 )　 Liu
Shuqian, Zheng Junhua, Wang Hong , Chen Xu, Qiu Cheng and Guo De an
Abstract　　 To compa re th e contents o f f lav onoids and terpenlactones in the leaves o f Ginkgo biloba
L. f rom dif ferent regions and discuss the influential facto rs of climatic environment. RP-HPLC was used
to determine the flav onoids and terpenlactones. The contents of these activ e constituents v aried g rea tly
f rom place to place. The contents of total f lav onoids and terpenlactones w ere much higher in the leaves of
G. biloba. f rom Guizhou Plateau than tho se f rom o ther regions. Da ta f rom this experiment may provide a
basis for the optimization of the quali ty and resources of G. biloba.
Key words　　Ginkgo biloba L.　 f lav onoids　 terpenlactones
　　目前 ,世界上许多厂家正在用银杏叶提取物
( GBE)制造各种药物。 90年代以来 ,我国银杏栽培
面积大幅度增加。 但研究表明 ,不同产地、不同采收
期的银杏叶 ,其有效成分含量相差甚远 [1, 2 ]。因此 ,有
必要对不同产地银杏叶黄酮和萜内酯含量变化进行
系统研究。本文测定比较了我国 6个农业气候区 23
份银杏叶中黄酮和萜内酯的含量 ,分析了不同生态
环境对两种成分含量的影响 ,为提高银杏叶质量 ,优
化银杏叶资源 ,同时对其进行道地性研究提供了理
论依据。
1　材料与方法
1. 1　材料: 全国银杏主产区可划分为 6个农业气候
区 [3, 4 ] , 1997年 9月本着具有产区代表性原则 ,在每
个农业气候区 2～ 4个银杏产区 ,采集 2～ 10年实生
银杏叶样品共 23份 (表 1)。采集时间均为当地银杏
叶采收期。银杏叶及时晒干粉碎 ,过 40目筛备用。
1. 2　仪器、药品、试剂: 测定黄酮含量的 HPLC仪
为美国 T SP公司 P400系统 ;测定萜内酯含量的
HPLC仪为惠普公司 1100系统。
表 1　材料来源
编号 农业气候区 采集地点 样品个数
1 辽东半岛区 丹东　大连 3
2 黄淮海平原区 郯城　泰安　邳州 4
3 江苏南部栽培区 泰兴　南京　杭州 4
4 伏牛山 -大别山区 新县　随州　安陆 4
5 贵州高原区 盘县　正安　惠水 4
6 南岭山地区 南雄　兴安　灵川　桂林 4
　　对照品: 槲皮素 ( Q)、白果内酯 ( BB)、银杏内酯
A( GA)、银杏内酯 B( GB)购自 Sigma公司 ;芦丁、银
杏内酯 C( GC)购自中国药品生物制品检定所 ;山柰
酚 ( K)、异鼠李素 ( I)由北京市新技术研究所惠赠。
提取溶剂均为分析纯 ,色谱用甲醇为色谱纯 ,水为双
蒸水。
1. 3　方法
1. 3. 1　黄酮含量测定: a )色谱条件: 色谱柱:
Inertsil ODS-3柱 , 4. 6 mm× 150 mm , 5μm;流动
相: 甲醇 -水-磷酸 ( 60∶ 40∶ 0. 2) ;流速: 1. 0 mL /
min;检测波长 360 nm;柱温 30℃ ;进样量 10μL。
b)线性关系:分别称取 Q, K, I对照品 5. 1 mg、
4. 1 mg、 2. 2 mg,加甲醇溶解 ,定容 50 mL, 按上述
·424· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 6期
Addrees: Liu Shuqian, Departm ent of Ph armacognost ical Biotech nology, Beijing Univ ersi ty of M edical Sciences , Bei jing刘叔倩　北京医科大学药学院 97级博士研究生
* * 课题负责人　* * * 现在桂林医学院△国家教育部高等学校博士学科点专项科研基金 ( 9720)资助课题
色谱条件分别进样 2, 4, 6, 8, 10μL,测定峰面积 ,以
峰面积对进样量 (μg )进行回归分析 ,得到 3条直
线 ,其线性范围和相关系数为 Q: 2. 04～ 10. 2μg , r
= 0. 999 9; K: 1. 64～ 8. 2μg, r= 0. 999 9; I: 0. 88～
4. 4μg , r= 0. 999 7。总黄酮苷的计算方法参照文献
的方法计算 [5 ] ,即将 3种苷元之和乘以系数 2. 51。
c)样品处理采用酸水解法 [6 ] ,色谱图见图 1。
d)精密度和回收率:吸取上述对照品溶液 ,依色
谱条件进行分析 ,重复进样 5次 ,每次 10μL,测得
Q, K, I峰面积 RSD分别为 1. 2% , 0. 9% , 0. 7% 。称
取加入一定量芦丁的银杏叶样品 ,按上述方法处理 ,
计算芦丁的回收率为 97. 6% (n = 3) , RSD 为
1. 22% ,表明该方法水解完全。
图 1　HPLC图谱
1. 3. 2　萜内酯含量测定: a)色谱条件: 色谱柱: 惠普
公司 HP ODS hypersl柱 , 4 mm× 125 mm 5μm;流
动相: 甲醇 -水 ( 23∶ 77) ;流速: 0. 5 m L /min;检测
器:示差折光检测器 ;柱温 25℃ ;进样量 5μL。
b )线性关系: 称取 GA, GB, GC和 BB对照品
10. 80, 12. 40, 10. 70, 9. 70 mg ,加甲醇溶解 , 定容 2
m L,依次稀释原浓度的 1 /2, 1 /4, 1 /8, 1 /16, 1 /32,
按上述色谱条件 ,各进样 5μL,测定峰面积 ,以峰面
积对进样量 (μg )进行回归分析 ,得到 4条直线 ,其
线性范围和相关系数为 GA: 0. 844～ 27. 00μg, r=
0. 999 9; GB: 0. 969～ 31. 00μg, r= 0. 999 9; GC:
0. 836～ 26. 75μg , r= 0. 999 9; BB: 0. 758～ 24. 25
μg, r= 0. 999 9。
c)样品采用双柱法处理 [7 ] ,色谱图见图 1。
d)精密度和回收率:吸取上述对照品溶液 ,依色
谱条件进行分析 ,重复进样 4次 ,每次 5μL,测得
GA, GB, GC, BB峰面积 RSD分别为 0. 7% , 0. 5% ,
0. 5% , 0. 3%。称取加入一定量 4种对照品的银杏叶
样品 ,按以上方法提取分离及测定。计算 GA、 GB、
GC、 BB的加样回收率分别为 96. 0% , 91. 4% ,
99. 3% , 99. 1% , RSD分别为 4. 7% , 3. 6% , 4. 1% ,
4. 9% (n= 3)。
2　结果与分析
2. 1　不同气候区银杏叶各成分平均含量及变异程
度: 表 2为全国 6个气候区银杏叶中各成分的平均
含量、气候区之间的变异系数及方差分析结果。由表
2各成分的平均值可见 , 6个气候区银杏叶中总黄
酮的平均含量为 0. 781% ,萜内酯类为 0. 372% ,两
类成分占叶干重的 1. 153% ,在 3种黄酮苷元中 ,槲
皮素 ( Q)的含量最高 ,约占 1 /2,其次为山柰酚 ( K)。
在 4种内酯中 ,银杏内酯 A( GA)和白果内酯 ( BB)
的含量较高 ,银杏内酯 B( GB)的含量较低。由变异
系数可以看出 ,不同气候区之间总黄酮含量的变异
小于总内酯的变异 ;黄酮苷元中 Q含量变异较大 ,
内酯类中 GA和 BB的含量变异较大。 由单因素方
差分析的 F值可见 , 6个气候区之间的银杏叶中除
异鼠李素 ( I)外 ,其综合成分的含量差异均达到极显
著水平 ( P < 0. 01)。 这说明生态条件和栽培技术对
银杏叶中以异鼠李素为苷元的黄酮苷的含量影响较
小 ,而对总黄酮、总内酯及其它各成分含量影响较
大 ,表现出地区间的显著差异。
表 2　 6个气候区银杏叶各成分平均含量及气候区之间的变异程度
黄酮 (% )
　 Q 　 K 　 I 总黄酮
内酯 (% )
BB GA GB GC 总黄酮
x 0. 154 0. 118 0. 035 0. 781 0. 104 0. 148 0. 037 0. 082 0. 372
s 0. 062 0. 034 0. 010 0. 224 0. 064 0. 096 0. 014 0. 028 0. 197
R SD% 40. 40 28. 53 27. 32 28. 70 61. 28 64. 71 38. 19 34. 07 53. 05
F值 7. 1* * 13. 1* * 1. 5 10. 7* * 13. 8* * 16. 8* * 5. 6* * 6. 1* * 13. 1* *
　　 x: 23份样品的平均值　　 6个气候区之间各成分含量的比较: * * P < 0. 01(F 0. 05= 2. 81,F 0. 01= 4. 34)
2. 2　不同气候区银杏叶中总黄酮和总内酯含量的
差异: 对 6个气候区银杏叶总黄酮和总内酯的含量
进行多重比较 (表 3) ,结果表明 ,贵州高原区的银杏
叶中两种成分的含量均为最高 ,并与其它气候区的
含量呈显著差异。 这说明该气候区的生态环境和栽
培技术有利于银杏叶黄酮和内酯的积累。其它几个
气候区黄酮和内酯的含量未表现出一致性 ,如长江
中下游区银杏叶中总黄酮含量较低 ,而总内酯含量
较高。二者综合比较 ,除贵州高原区外 ,南岭山地地
区两种成分的含量较高。
·425·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 6期
表 3　 6个气候区银杏叶中总黄酮和总内酯含量的多重比较
气候区
编号*
总黄酮
平均含量 (% ) 差异显著性 P < 0. 01
总内酯
平均含量 (% ) 差异显著性 P < 0. 01
5 1. 132 1 A 0. 631 4 A
6 0. 909 8 AB 0. 413 4 C
2 0. 794 3 B 0. 281 3 D
1 0. 704 6 BC 0. 145 0 E
4 0. 629 3 BC 0. 532 1 B
3 0. 494 5 C 0. 170 5 E
　　* 编号的代表地区见表 1
2. 3　银杏叶中各成分间的相关关系: 由表 4可见 ,
总黄酮和总内酯含量呈显著正相关 ,槲皮素和山柰
酚呈显著正相关 , 4种内酯成分相互之间均为正相
关关系。由此说明 ,环境条件对这些成分含量的影响
是比较一致的。异鼠李素与其它成分均呈负相关 ,但
未达到极显著水平。
表 4　银杏叶中各成分间的相关系数
成分 K I 总黄酮 BB GA GB GC 总内酯
Q 0. 630* * -0. 223 0. 949* * 0. 551* * 0. 302 0. 658* * 0. 276 0. 580* *
K -0. 225 0. 808* * 0. 403 0. 164 0. 638* * 0. 444* 0. 514*
I -0. 085 -0. 334 -0. 427* -0. 394 -0. 333 -0. 402
总黄酮 0. 508* * 0. 217 0. 666* * 0. 317 0. 560* *
BB 0. 863* * 0. 878* * 0. 677* * 0. 962* *
GA 0. 741* * 0. 707* * 0. 873* *
GB 0. 687* * 0. 963* *
GC 0. 762* *
　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01(r 0. 05= 0. 413, r 0. 01= 0. 526)
4　讨论
不同地区的银杏叶 ,其有效成分的含量也存在
很大变化。贵州高原区银杏叶中黄酮和内酯含量明
显高于其它地区。我们比较了 6个气候区的海拔、年
降水量、 > 10℃积温、年平均温度及土质 5个环境
因子与银杏叶总黄酮和总内酯含量的关系 ,发现单
一的环境因子与二者含量无明显的相关性。如贵州
高原区海拔最高 ,为 1 000～ 1 500 m,而黄淮海平原
区海拔最低 ,为 100 m以下 ,但该区银杏叶中黄酮
和内酯的含量均不是最低。又如 ,江苏南部栽培区和
南岭山地区年降水量较接近 ,分别为 1 100～ 1 800
mm和 1 500～ 1 500 mm ,但这两个气候区银杏叶中
黄酮和内酯的含量存在显著差异。再如 ,江苏南部栽
培区和伏牛山 -大别山区年均温度均为 15℃～ 17
℃ , > 10℃积温均为 4 500～ 5 000℃ ,但这两个气
候区银杏叶中内酯的含量存在显著差异。由此可见 ,
银杏叶总黄酮和总内酯的含量变化可能是多种环境
因子相互作用的结果 ,而并非只与单一的环境因子
有直接的相关关系。 总黄酮和总内酯的含量均为最
高的贵州高原区属中亚热带 ,年平均气温 13. 5℃～
16℃ ,年降水量 900～ 1 300 mm ,土壤为黄壤和黄
棕壤 ,这些环境条件对银杏生长发育较为有利 ,而对
银杏叶中黄酮和内酯的积累是否有利 ,尚需进一步
研究。
致谢:本文承蒙北京医科大学药学院药物分析
教研室徐秉玖教授、生药生物技术研究室马小军博
士审阅。
参 考 文 献
1　庄向平 ,等 .中草药 , 1992, 23( 3): 122
2　池静端 ,等 .药物分析杂志 , 1998, 18( 6): 367
3　席承藩 ,等编著 . 中国自然区划概要 . 北京:科学出版社 , 1984
4　张云跃 ,等 .’ 97银杏国际研讨会论文集 . 1997: 66
5　 Hasler A, et al . J Chromatog r, 1992, 605: 41
6　范可武 ,等 .中草药 , 1997, 28( 4): 211
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( 1999-09-08收稿 )
　　 (上接第 403页 )
参 考 文 献
1　中国药材公司 . 中国中药资源 .北京:科学出版社 , 1995: 152
2　傅立国主编 . 中国植物红皮书——稀有濒危植物 . 北京:科学出
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3　中国药材公司 . 中国常用中药材 .北京:科学出版社 , 1995: 161,
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4　陈品良 ,等 .植物资源与环境 , 1992, 1( 4): 6
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( 1999-12-14收稿 )
·426· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 6期