全 文 ：桑叶多糖提取工艺优选
天津中医学院 ( 300193)　　赵　骏 　钟　蓉　王洪章　戚爱棣
摘　要　通过正交实验法 ,并综合考虑大生产的各种因素条件 ,优选出桑叶多糖的提取工艺。 药效学初探表明 ,桑
叶多糖有显著的降低血糖的作用。
关键词　桑叶　多糖　提取工艺　正交实验　药效学
　　桑叶为桑科植物桑的叶。历代中医药书籍中有
桑叶能治疗消渴症的记载。 近代医家也常将桑叶用
于治疗糖尿病 ,且得到满意疗效。目前国内外尤其是
日本对桑叶的有效成分研究较多 ,发现其有效成分
多糖具有降血糖的作用 ,并对多糖的结构进行了分
析。我国也有人对桑叶多糖进行过研究 ,但尚未见对
桑叶多糖提取工艺的研究。实验证明 ,桑叶总多糖对
四氧嘧啶造成的大鼠糖尿病有显著的降血糖作用。
因此提取其多糖成分制成各种中成药的前景十分广
阔。我们对桑叶多糖提取工艺优选进行了研究。
1　材料、仪器和试剂
材料: 桑叶: 购于天津中医学院门诊部 ,对照品
桑叶多糖自制 ; AB-8型大孔吸附树脂购于南开大学
化工厂 ;实验大鼠由中国中医药研究所提供。
仪器: DU5 30核酸蛋白 仪 ,血糖 测定仪
Accutrend Boeh ringer Mannheim U K Ltd.。
试剂:四氧嘧啶: Sigma公司 ,蒽酮、硫酸及其它
试剂均为 AR级。
2　提取工艺优选
本实验讨论用两种方法提取 ,水煎煮法和超声
提取法 ,设计了 2个正交实验表。
2. 1　水煎煮法: 水煎煮法选用 L12 ( 3× 24 )因素水
平 ,见表 1。
表 1　 L12 ( 3× 24 )因素水平
水平 提取时间 ( A) ( min ) 提取次数 ( B) 醇沉浓度 ( C) (% )
1 20 3 70
2 30 3 80
3 60
　　称取桑叶 50. 0 g,按表 1中条件水煎煮提取 ,提
取液浓缩至一定体积 ,离心除去沉淀 ,上清液走柱 ,
层析柱用 AB-8型大孔吸附树脂湿法填充 ,在大孔
吸附树脂柱中用蒸馏水洗至洗脱液加入 95%乙醇
无沉淀为止 ,再将洗脱液浓缩至约 50 mL,加入活性
炭脱色 ,趁热过滤 ,滤液浓缩后加入 95%乙醇使含
醇量达正交表所设计的浓度 ,静置后抽滤 ,沉淀用无
水乙醇、丙酮各洗 3次 , 60℃低温干燥 ,得到白色无
定形粉末。经实验 ,白色粉末溶于水 ,尤易溶于热水 ,
不溶于高浓度的乙醇和丙酮 , Molish反应和蒽酮-
浓硫酸反应成阳性 ,说明白色粉末中含多糖 ;茚三酮
反应为阴性 ,说明无蛋白质。 白色粉末称重 ,并测定
其多糖含量 ,计算提取总量。 每次实验平行做两次 ,
见表 2。
表 2　水煎煮正交实验及结果
1 2 3 4 5
A B
收率
( g)
含量
(% )
多糖总
量 ( g)
实
验
号
1 1 1 1 1 1 0. 968 1 30. 5 0. 295 6
2 1 1 1 2 2 0. 962 7 31. 7 0. 305 5
3 1 2 2 1 2 0. 821 1 37. 5 0. 307 6
4 1 2 2 2 1 0. 822 4 38. 4 0. 316 0
5 2 1 2 1 1 1. 885 7 39. 1 0. 737 5
6 2 1 2 2 2 1. 175 0 39. 9 0. 684 1
7 2 2 1 1 1 1. 582 6 41. 5 0. 656 3
8 2 2 1 2 2 1. 664 4 44. 3 0. 737 7
9 3 1 2 1 2 2. 393 6 39. 5 0. 942 5
10 3 1 1 2 1 2. 872 3 38. 9 1. 116 8
11 3 2 1 1 2 2. 247 0 42. 6 0. 956 1
12 3 2 2 2 1 2. 511 6 51. 6 1. 294 7
Ⅰ 1. 224 7 4. 068 0 3. 898 3
Ⅱ j 2. 815 6 4. 285 1 4. 454 8
Ⅲ j 4. 312 8
∑12
i= 1
yi= 8. 353 1
Ⅰ j 0. 306 1 0. 678 0 0. 649 7
Ⅱ j 0. 703 9 0. 714 2 0. 742 5
Ⅲ j 1. 078 2
R 0. 772 1 0. 036 2 0. 092 8
∑12
i= 1
yi
12
= 5. 814 5
　　根据表 2的极差 R的大小 ,其影响因素的顺序
为 A> C> B,即依提取时间、醇沉浓度、提取次数的
次序减小。提取次数对实验影响不显著。分析结果
认为 ,水煎煮提取中最佳工艺是: 水煎煮 60 min,煎
煮 2次 ,加 95%乙醇使含醇量达 80% ,产量为
1. 294 7 g。
2. 2　超声提取法:超声提取法选用 L4 ( 23 )因素水平
(表 3) ,结果见表 4。
·347·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 5期
Address: Zh ao Ju n, Tianjin College of Tradi ti onal Chines e Medicine, Tianjin
表 3　 L4 ( 23 )因素水平
水平 提取时间 ( A) ( min ) 提取次数 ( B) 醇沉浓度 ( C) (% )
1 20 1 70
2 30 2 80
　　根据表 4中极差 R的大小 ,从超声提取的直观
分析表中得出的结论是 B1C2 A2 ,即超声提取 30
min, 1次 ,使含醇量达 80% ,产量为 2. 665 8 g。其相
对含量也较高。
表 4　超声提取法正交实验及结果
1 2 3
A B C
收率 ( g) 含量 (% ) 多糖总量 ( g)
1 1 1 1 1. 765 7 58. 9 1. 039 1
2 1 2 2 1. 795 4 60. 2 1. 079 9
3 2 1 2 3. 614 1 73. 8 2. 665 8
4 2 2 1 3. 751 5 64. 83 2. 432 1
Ⅰ j 2. 119 0 3. 704 9 3. 471 2
Ⅱ j 5. 097 9 3. 512 0 3. 745 7
Ⅰ j 1. 059 5 1. 852 5 1. 735 6
Ⅱ j 2. 549 0 1. 756 0 1. 872 9
R 1. 489 5 0. 096 5 0. 137 3
3　桑叶多糖的含量测定
3. 1　桑叶多糖对照品的制备: 取桑叶 50 g ,加水
500 mL,煎煮两次 ,每次 1 h,合并滤液 ,浓缩至约
150 mL,加 9 mL 10%三氯醋酸 ,放置数小时 ,离心
除去不溶物 ,取上清液浓缩至 50 mL,加 95%乙醇
使含醇量达 80% ,于冰箱中放置 48 h,取出抽滤 ,将
沉淀加水溶解 ,过大孔吸附树脂柱 ( AB-8型 ) ,用蒸
馏水洗至洗脱液中加入 95%乙醇无沉淀为止。洗脱
液浓缩 ,加活性炭脱色处理 ,加入 95%乙醇使含醇
量达 80% ,放置 ,沉淀反复用水溶 ,加活性炭处理再
醇沉 ,得到白色絮状沉淀 ,抽滤 ,用无水乙醇、丙酮各
洗 3次 , 60℃低温干燥得到白色无定形粉末 ,置于
干燥器中备用。
3. 2　对照品溶液的配制:精称减压干燥至恒重的桑
叶多糖 50 mg,蒸馏水定容至 10 mL。
3. 3　标准曲线的制备:分别精密吸取桑叶多糖对照
品溶液 0. 1, 0. 2, 0. 4, 0. 6, 0. 8, 1. 0 mL置于干燥具
塞试管中 ,补加蒸馏水至 2. 0 mL,摇匀 ,加入 0. 2%
蒽酮浓硫酸显色剂 4. 0 m L,迅速摇匀 , 45 min后 ,
以蒸馏水 2. 0 mL加显色剂 4. 0 mL为空白 ,按分光
光度法在 620 nm处测定吸光度 ,得回归方程 A=
0. 008 6+ 0. 263 7C , r= 0. 991,基本呈线性关系。
3. 4　提取物的多糖含量测定:精密称取桑叶多糖提
取物 100 mg ,蒸馏水定容至 10 m L,精密吸取 0. 5
mL,按“标准曲线的制备”项下操作 ,测定 A值并计
算多糖含量。
4　桑叶多糖的药效学初探
桑叶多糖提取物配成溶液 ,在中国中医药研究
所药理组进行降血糖的预实验。实验结果表明 ,桑叶
多糖 200 mg /kg在给药后 4, 6 h血糖下降率为
49. 4%和 40. 1% ,有较显著的降血糖作用 ,尤以给
药后 4 h效果明显 (P < 0. 05)。
5　结果及讨论
5. 1　从超声提取的正交实验直观分析表中可以看
出 ,超声提取的产量明显多于水煎煮 ,且所耗时间、
提取次数少于水煎煮法 ,所以可提倡使用超声波方
法提取桑叶多糖。
5. 2　药理初实验证实 ,我们采用的方法所提多糖对
四氧嘧啶所造成的大鼠高血糖有明显的降血糖作
用。
5. 3　提取物通过 Molish反应和蒽酮 -浓硫酸反应
均呈阳性 , Liebermann-Burcha rd反应和 Salkanski
反应均为阴性 ,说明提取物中无甾醇类化合物。
参 考 文 献
1　陈福君 ,等 .沈阳药科大学学报 , 1996, 13( 1) : 25
2　刘重芳 ,等 .中成药 , 1997, 10: 6
3　袁晓华 ,等主编 . 植物生理生化实验 . 北京:北京高等教育出版
社 , 1983: 1
( 1999-08-24收稿 )
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·348· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 5期