全 文 ：·药理实验与临床观察·
瑞香狼毒水提物小鼠药物血清
对小鼠白血病 L1210细胞增殖、克隆形成和DNA合成的影响
贾正平1 ,樊俊杰2 ,王彦广1 ,谢景文2 ,徐丽婷, 王　荣2a
( 1. 浙江大学 化学系, 浙江 杭州　310027;　2. 兰州军区兰州总医院,甘肃 兰州　730050)
摘　要: 目的　从整体水平探讨瑞香狼毒水提物( SCLA )的抗癌作用及机制。方法　以不同剂量 SCLA ig 给药后,
不同时间采集小鼠血清, 处理体外培养的小鼠白血病 L 1210细胞,观察肿瘤细胞 MTT 还原,克隆形成能力和 DNA
合成的改变。结果　SCLA 3, 6, 12 g / kg 给药 1, 2, 4, 8 h 后的药物血清处理肿瘤细胞后, 其 MT T 还原及克隆形成
率均显著降低; 给药2 h 时的药物血清表现出更强的抑制肿瘤细胞增殖作用。SCLA 小鼠药物血清也显著抑制[ 3H]
TdR 掺入 L 1210细胞 DNA。结论　直接抑制癌细胞增殖及 DNA 合成是瑞香狼毒的重要抗癌机制。
关键词: 瑞香狼毒;血清药理学; L1210细胞; 克隆细胞; DNA 合成
中图分类号: R286. 91　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 09 0807 03
Effect of serum Ruixiang Langdu ( Stellera chamaej asme) extract on proliferation,
clonal formation and DNA synthesis of mouse L1210 leukemic cells
JIA Zheng-ping 1, FAN Jun-jie2, WANG Yan-guang 1, XIE Jing-w en2, WANG Rong 2
　　( 1. Depar tment o f Chemist ry , Zhejiang Univ ersity, Hang zhou Zhejiang 310027, China; 2. Gener al Hospital o f Lanzhou
Command, PLA , Lanzhou Gansu 730050, China)
Abstract: Obj ect　To explo re, on the w ho le, the ant icancer act ivity and mechanism of the aqueous
ext ract of Ruix iang Langdu ( S tel lera chamaej asme L. ) ( SCLA ) . Methods　Mice w ere given dif ferent i. g .
do ses of SCLA and their ser um collected at differ ent intervals af ter drug administ ration. The ef fects of the
serum on the pro liferation of mouse L 1210 leukemic cells w er e observed w ith MT T assay, clone formation
and incor por at ion o f [
3
H] TdR into DNA of the cells. Results　Serum SCLA collected 1, 2, 4, 8 h after
adm inist rat ion of 3, 6, and 12 g / kg SCLA show ed signif icant decrease of M TT fo rmazans and clone fo rma-
tion. Ser um SCLA co llected 2 h after dr ug administ rat ion show ed more str ong inhibit ion of cancer cell pro-
liferat ion. It also inhibited the incorporat ion o f [ 3H] T dR into DNA o f L 1210 cells. Conclusion　SCLA
show ed a remarkable inhibitory ef fect on pr oliferat ion and DN A synthesis o f cancer cells cultured in vi tro,
w hich may be the main ant icancer mechanisms of SCLA .
Key words: Ruix iang Langdu ( Steller a chamaej asme L) ; serum-pharmacolog y; L 1210 cells; clone cells;
DNA synthesis
　　瑞香狼毒 Steller a chamaej asme L. 为瑞香科植
物瑞香狼毒的根[ 1]。我们以往的研究结果表明, 瑞香
狼毒水提物( SCLA)对小鼠移植肿瘤 S180肉瘤, 肝癌
HePS 和Lew is肺癌生长有显著抑制作用[ 2, 3]。为了
从整体水平探讨其抗癌机制, 本研究采用血清药理
学方法, 研究了 SCLA 对体外培养的小鼠白血病
L 1210细胞 MTT 还原, 克隆形成和 DNA 合成的
影响。
1　材料与方法
1. 1　动物: Balb/ c小鼠, 体重 18～22 g , SPF 级(医
动字第 14-006号) ,由兰州生物制品研究所实验动
物中心提供, 标准实验室(医动字第 14-002 号)喂
养、实验。
1. 2　SCLA 的制备: 将瑞香狼毒(兰州市药材供应
站) 200 g 制粗粉后加水 400 mL 煮沸 20 min, 2
次,上清液混合后过滤、浓缩, 制成口服液,每毫升含
生药 1. 0 g。
1. 3　主要试剂: RPMI-1640 培养基为 Gibco 产品;
·807·中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2001 年第 32卷第 9期
a 收稿日期: 2000-12-04作者简介:贾正平( 1960-) ,男,山西忻州人,主任药师,教授,理学博士。现在浙江大学化学系做博士后研究。主要研究方向:抗肿瘤药理学。完成的鬼臼毒素衍生物抗肿瘤药理学研究获军队科技进步二等奖。Tel: ( 0931) 8975478
MTT 为 Sigma 产品; [ 3H] T dR ( 740 GBq/ mmoL,
37 MBq/ mL)为中国原子能科学研究所产品。
1. 4　细胞系:小鼠白血病 L 1210细胞引自中国科学
院上海细胞生物研究所细胞库, 用RPM I-1640培养
液(含 10%小牛血清、100 kU / L 青霉素、100 mg / L
链霉素) , 37 ℃、5% CO2培养,传代。
1. 5　药物血清制备: Balb/ c 小鼠 56只,随机分成7
组,禁食 12 h 后分别 ig 给药, 设 SCLA 3, 6, 12 g/
kg 3个剂量组,对照组 ig 等量生理盐水; 6 g/ kg 组
设 4 个采血时相, 即给药后 1, 2, 4, 8 h 无菌条件下
采血;其余给药组给药 2 h 后采血。血样 1 000 g 离
心 20 m in 取血清, 56 ℃, 30 m in 灭活, 用 RPM I-
1640 配制成 10%的小鼠血清培养液。用含 10%正
常小鼠血清的 RPM I-1640培养液为对照。
1. 6　克隆形成试验[ 3] :将生长旺盛的 L 1210细胞用含
10%小鼠药物血清和 10%小牛血清的 RPM I-1640
培养液处理 12 h, 用 Hanks 液洗涤 2次, 用 10%小
牛血清的 RPM I-1640 培养液制成 1 000/ mL 的细
胞悬液,取 4 mL 置入试管,加入 L 1210细胞培养上清
液和 56 ℃融化状态的 2%琼脂各 0. 5 mL,迅速混
均,按每皿 1 mL 液分装到直径 35 mm 培养皿中,
置 CO 2 培养箱培养 10 d 后取出,倒置显微镜下计
克隆数( 50个细胞以上者为 1克隆) ,每组 4皿, 按
均值, 据公式:克隆形成率= 克隆数/接种细胞数×
100%, 计算克隆形成率。
1. 7　MT T 比色法[ 4] :将生长旺盛的 L 1210细胞用不
同剂量 SCLA 处理不同时间所制备的小鼠血清 RP-
MI-1640培养液制成 1×105/ mL 的细胞悬液,接种
于 96孔培养板( 200 LL/孔) , 37 ℃、饱和湿度培养
44 h 后,加入 MTT ( 5 g / L , 10 LL/孔) ,继续培养4
h 后, 弃上清,加入二甲基亚砜( DM SO) 200 LL,溶
解 MT T formazan, 于酶标仪 ( Dynatech MR580)
540 nm 测定吸光度值( A 540 )。细胞增殖抑制率( %)
= A 对照- A 药物/ A 对照×100。
1. 8　[ 3H] T dR掺入试验:参照文献[ 7] ,细胞处理同
上,每孔 1 mL 分装到 24孔培养板中,置 CO 2培养
箱 37 ℃、饱和湿度培养 24 h,加入 [ 3H] TdR 达终
浓度 37 kBq/ mL 继续培养 16 h 后,将各孔细胞收
集到玻璃纤维纸上, 置 FJ-2100型液体闪烁计数器
测定,计算 dpm 值。
2　结果
2. 1　不同剂量药物血清对小鼠白血病 L 1210细胞的
影响: SCLA 3～12 g / kg 处理小鼠 2 h 的药物血清
对 L 1210细胞克隆形成、MT T formazan 的产生均有
显著的抑制作用;随着给药剂量的增加,药物血清的
细胞增殖抑制作用增强。SCLA 小鼠药物血清对
[ 3H] T dR 掺入 L 1210细胞 DNA 也呈显著抑制作用
(表 1)。
表 1　SCLA处理小鼠 2 h的药物血清对小鼠白血病
L1210细胞MTT还原、克隆形成能力和 DNA
合成的影响( x±s)
剂量
( g/ k g)
克隆数 A 540 DNA 掺入量
(d pm)
0 　　139±28 　　0. 897±0. 113 　　32 611±2 735
3 83±21* 0. 452±0. 057* 14 283±2 059*
6 31±10* 0. 236±0. 031* 5 429±1 108*
12 21±6* 0. 209±0. 018* 4 371±1 315*
　　n= 4,与对照组比较: * P < 0. 01
2. 2　SCLA 不同处理时间的药物血清的作用: 以 6
g / kg 处理小鼠不同时间的药物血清处理 L 1210细胞
发现, 给药 2 h 后的药物血清表现出更强的抑制
L 1210细胞 MTT 还原、克隆形成能力和 DNA 合成效
果,而 1, 4 h 的血清抑制作用较弱。8 h 后的药物血
清对肿瘤细胞增殖无显著抑制作用(表 2)。
表 2　SCLA( 6 g/ kg)不同处理时间的药物血清对小鼠
白血病 L1210细胞MTT还原、克隆形成能力和
DNA 合成的影响( x±s)
处理时
间( h ) 克隆数 A 540
DNA 掺入量
(d pm)
对照组　　139±28 　　0. 897±0. 113 　　32 611±2 735
1 67±13* 0. 384±0. 102* 11 742±1 266*
2 31±10* 0. 236±0. 031* 5 429±1 108*
4 63±17* 0. 429±0. 084* 12 583±1 387*
8 115±31 0. 723±0. 121 28 325±3 021
　　n= 4,与对照组比较: * P < 0. 01
3　讨论
近年来中草药治疗肿瘤越来越受到国内外医药
界的重视,不仅可改善患者生存质量,而且在延长患
者生存期等方面也确有疗效 [ 7]。然而中草药所含化
学成分复杂,故其抗癌机制难以探讨清楚。由于人和
动物属不同宿主,人肿瘤与动物肿瘤株也有差异, 单
一的小鼠体内实验难以确切阐明药物的抗癌效果与
抗癌机制。有人借助中草药提取物直接实验, 以探讨
其抗癌作用机制, 常以粗提物直接加于体外培养的
人癌细胞,这就存在着 2个难以解决的问题: ¹ 非生
理环境的影响: 中药粗制剂的杂质、电解质或鞣质引
起细胞培养液渗透压、pH 等的改变, 影响细胞生存
环境;º无效成分的作用: 体内非吸收物质,或经体
内代谢失活的物质影响细胞生长,这些都会影响药
物的实际效果。以整体动物灌胃给药采集血清,作用
于培养的肿瘤细胞, 则可以克服以上诸多缺点,较好
·808· 中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2001 年第 32卷第 9期
地反映中草药的药理作用机制。本研究结果表明,
SCLA 药物血清对小鼠白血病 L 1210细胞增殖的抑制
作用与药物剂量呈正相关,与我们所做的体内抑瘤
实验结果一致。给药后 2 h 的药物血清表现出更强
的抑制肿瘤细胞增殖作用, 而给药后 1, 4, 8 h 血清
抑制作用较弱,这可能与机体吸收不全和代谢造成
血清中的药物浓度不同有关。瑞香狼毒对肿瘤细胞
增殖的抑制作用, 可能是该药抗癌的重要机制之一。
参考文献:
[ 1 ]　江苏新医学院 . 中药大辞典 [ M ] . 上海:上海人民出版社,
1977.
[2]　樊俊杰,贾正平,谢景文,等 . 瑞香狼毒对小鼠移植肿瘤生长的
影响[ J ] . 兰州医学院学报, 1994, 20( 4) : 228-230.
[ 3]　樊俊杰,贾正平,谢景文,等 . 瑞香狼毒抗肿瘤作用 [ J] . 药学
实践杂志, 1996, 14( 1) : 9-12.
[ 4]　贾正平,张培炎,梁重栋 . 4-[ 4″-( 2″, 2″, 6″, 6″-四甲基哌啶氮氧
自由基)氨基] -4′-去甲表鬼臼毒素对 L1210细胞增殖,克隆形成
和 DNA 合成的影响 [ J] . 中国药理学与毒理学杂志, 1991, 5
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[5]　贾正平,谢景文,谢廷泉 . MT T 快速比色法在肺癌化疗药物敏
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基抗肿瘤及毒性中的作用[ J ] . 中国药理学报, 1999, 20 ( 6) :
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实用癌症杂志, 1995, 10( 4) : 290-294.
人参皂苷 Rg2与毒毛旋花子苷 K 的强心作用及毒性比较
刘　洁1 ,孙文娟1 ,吕文伟1,叶金梅2,李龙云2a
( 1. 吉林大学新民校区基础医学院, 吉林 长春　130021;　2. 吉林省中医中药研究院,吉林 长春　130021)
摘　要: 目的　观察人参皂苷 Rg 2(简称 Rg 2) 与毒毛旋花子苷 K( SK) 对衰竭犬心的强心作用及毒性比较。方法　
复制戊巴比妥钠致心力衰竭模型。给予 Rg 2 0. 5 mg / min 和 SK 0. 062 5 mg / min, 观察对心功能的影响及药物毒性
反应。结果　二药均能升高血压 ( BP )、加强心肌收缩力, 增加左室内压( LVSP )和左室内压最大变化速率(±dp /
dtmax) ,强心效力 SK 稍大于 Rg 2,但治疗宽度及治疗指数 Rg 2明显大于 SK。结论　Rg 2是一种安全范围宽的中效强
心药物。
关键词: 人参皂苷 Rg 2;毒毛旋花子苷 K; 心力衰竭;心功能; 安全范围
中图分类号: R286. 21; R285. 53　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 09 0809 03
Comparison of cardiotonic and toxic effects between ginsenoside Rg2 and strophanthin K
L IU Jie1, SUN Wen-juan1, LU¨ Wen-w ei1 , YE Jin-mei2, L I Long-yun2
　 　 ( 1. Pr eclinical Medical Colleg e, Jilin U niver sity , Changchun Jilin 130021, China; 2. Jilin Academy o f TCM ,
Changchun Jilin 130021, China)
Abstract: Object　To observ e and compare the cardiotonic and tox ic ef fects of ginseno side Rg 2( Rg2 )
and str ophanthin K ( SK) . Methods　In duplicated heart failure model induced by sodium pentobarbital ei-
ther Rg2 0. 5 mg / min or SK 0. 062 5 mg / min w ere given by iv to obser ve the cardiotonic and tox ic effects on
the models. Results　Both of them can improve blood pressur e, str engthen myocardium contract ility and
increase LVSP and ±dp/ dtmax SK has a st ronger max imum cardiotonic ef fect , while Rg 2 has a bro ader ther-
apeut ic marg in and higher ther apeut ic index. Conclusion　Rg2 is a cardiotonic of medium effect w ith br oad-
er therapeut ic margin.
Key words : ginsenoside Rg 2; st rophanthin K; heart failure; cardiac funct ion; therapeutic mar gin
　　人参皂苷 Rg 2(简称 Rg2 ) 为人参三醇系皂苷单
体,大量研究表明, 人参皂苷有加强心肌收缩性能,
升高血压,增加冠脉流量和心输出量,对缺血心肌有
保护作用[ 1～3]。我们复制失血性休克和缺血性心源
性休克模型,证明了 Rg 2有改善休克时血流动力学
状态,对缺血心肌有较好的保护作用(待发表)。本文
报道 Rg 2对戊巴比妥钠致犬心力衰竭的强心作用与
毒性,并与毒毛旋花子苷 K ( st rophanthin K, SK)
进行比较研究。
1　实验材料
·809·中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2001 年第 32卷第 9期
a 收稿日期: 2000-12-18基金项目:国家科委资助项目( No. 951035)作者简介:刘　洁( 1953-) ,女,吉林省长春市人,副主任技师,主要从事心血管药理研究。