全 文 ：桂竹糖芥强心昔 G对 Na +, K 十一 A T P 酶的抑制作用△
黑龙江商学 院中药系 (哈尔滨 1 5 0 0 76) 张晓丹 . 季宇彬 马 瑛 ” 乔 国芬… 孔 琪
摘 要 对照 哇巴 因观察糖芥 强心昔 G 对大 鼠心肌 A T P 酶活性 的影 响 . 结果表 明搪芥昔 G 体外
显著抑制心肌 N+a , K气A T P 酶 , 并呈浓度依赖性 。 而 A T P 对搪芥昔 G 的作用几无影响 。
关扭词 糖芥昔 G N a + , K 长A T P 酶 抑制剂
I n h i b i t o r y A c t i o n o f C h e i r a n t h o s i d e G o n N a +
,
K +
一
A T P a s e
Zh a n g X i a o d a n
,
J i Y
u b in
,
M
a
Y i n g
, 。 t a l . (块p a r t m e n t o f C h in e s e M a t e r ia M e d ie a , H e il o n g ji a n g C o m -
m e r e ia l C o l le g e
,
H
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n 1 5 0 0 7 6 )
A加 t r a e t T h e m e e h a n i s m o f i n h i b i t io n o f N a + , K + 一A T P a s e b y e h e i r a n t h o s i d e G w a s s t u d i e d . C h a r -
a e t e r i
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e s o f it s in h ib i t o r y a e t io n o f N a +
,
K +
一
A T P
a s e
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e r e e o m p a r e d w i t h t h o s e o f o u a h a i n
.
R
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-
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d t h a t e h e i r a n t h o s id e G w a s a n o n e o m p e t i t iv e in h i b it o r w i t h r e s p e c t t o N a +
,
K
+ , a n d t h e e f f e e t w a s d o s e d e
-
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.
A T P w
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w i t h o u t e f f e e t o n N a +
,
K +
一
A T P
a s e i n h ib i t i o n b y e h e i r a n t h o s i d e G
.
K e y w o r d s
e h e i r a n t h o s id e G N a +
,
K
+ 一
A T P
a s e
桂竹糖 芥 E yr is m u m ch el ar nt h ot’ d es .L
系十字花科二年生草本植物 , 主产于我 国东
北地区 , 除华南外全国各省均有分布 。 该植物
的全草和种子都含有多种强心昔川 , 具有毒
毛旋花子昔作 用 , 生物活性强 、 作用快 、 毒性
小 ,几无积蓄性 2[] 。 桂竹糖芥强心昔 G ( 以下
简称糖芥昔 G )是 自桂竹糖 芥种子强心昔中
分离纯化含量较高的有效成分 , 经化学分析
和 光 谱 ( U V , I R , F A B 一M S , ` H N M R , ` ” C N -
M R ) 鉴定 , 其化学结构为毒毛旋花子昔元 一 3 -
O
一件D 一洋地黄毒糖 1~ 4 a 一 L 鼠李糖昔 ( 见图
1 )
。 我们对糖芥昔 G 抑制大 鼠心肌 N a + , K 十 -
A T P 酶活力作用进行 了研究 , 并 与 o ua ( 哇
巴因 )进行比较 ,探讨其作用机制 。
l 材料与方法
1
.
1 材料 : 桂竹糖芥强心昔 G 由黑龙江商
学 院 中 药 系 台 宝 山 教 授 提 供 , 纯 度 为
r h a r n n o旧 ( 吻 i ot抑 e
圈 1 桂竹粉芥普 G
9 9
.
9 9% ; O u a 系 S i g m a 公司出品 ; 上述药物
均用少量 乙醇溶解后用蒸馏水稀释至所需浓
度 。 三磷酸腺昔 ( A T P 一 N a芬)为中科 院上海生
物 化 学 研 究 所 产 品 。 S D 雄 性 大 鼠 , 体 重
( 2 0。士 1 9 . 8 ) g , 由哈尔滨医科大学动物实验
中心提供 。
1
.
2 方法
1
.
2
.
1 N a +
,
K 忆 A T P 酶的制备 [3〕 : S D 大 鼠
断头处死 , 速取心 脏 , 置于预冷的 T ir s 一 H CI
缓冲液 中 , 冲洗 2 次后加入 5 倍体积的 T ir s
A d d r e s s
: 压p a r t m e n t o f C h in e s e M a t e r i a M e d i e a , H e i l o C o m m e r e i a l C o lle张晓丹 毕业于哈尔滨 医科 大学 ,在职 硕士研究生 , 副教 江商学院 中药系药管药理及抗衰老药理 ,先后承担 了国家科 委及黑 龙江省科委 自然科学基金项 目多项 ,其 中《抗 心衰新药— 桂竹砧芥 的并爱研究 》获黑龙省教委科学技术进步 一等奖 。 主要 著作有 《新编 医药商 品学 》 (主编 ) 、 《中药活血化癣有效成分药理 与应 用 》 (副
士追 、
, ’ 黑龙江省计划生育药具站 ” ` 哈尔滨 医科大学药理教研室
△该课题 为黑龙 江省科委 自然科学基金资助项 目
·
7 5 8
·
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ǎ月óe、汉飞呈à娜牌.氏卜哎:城二逻
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八=J·旨、`飞巨à
胆塑.ó破。.二`.N
缓 冲液 (含 蔗糖 0 . 2 5 m o l / L 、 T r i s 一 E D T A I
m m o l / L
、
H C I 1 0 m m o l / L
,
p H 7
.
4 )
, 剪碎并
制 成 匀浆 , 高 速 离 心 ( 1 . 1 X 1 0 4 r /m i n , 1 5
m in )
, 取上层溶 液再行超速 离心 ( 1 . 0 x l护
r / m i n
,
3 0 m i n
,
2 次 ) , 将沉淀物加上述缓 冲
液混匀 , 即得大鼠心微粒体液悬液 , 以 B or d -
fo
r d 比色法 4[] 测定酶蛋 白含量 , 配成 。 . 5 9 /
L 的心微粒体液蛋 白混悬液 ,备用 。 上述操作
均在 O一 4 ℃进行 。
1
.
2
.
2 酶活力测定 : 应用光电比色法以复管
测定 A T P 酶活力 。 在 1 m L 反应体系中含咪
哇 一盐 酸 3 0 m m o l / L , M g Z+ 5 m m o l / L , 含 或
不 含 N a + 10 0 m m o l / L , 含 或 不 含 K + 5
m m ol / L
, 测心肌酶活力与酶蛋 白浓度为 25
m g / L
,
p H 为 7 · 4 , 不含 N a + , K 十 的酶活力与
M g
Z七 A T P 酶活力 。 3 7 C温育 1 0 m i n 后加人
5 m m ol / L 的 A T P 开始反应 , I O m in 后取各
测定浓度反应液 0 . 1 m L 按文献阁方法测定
无机磷含量 。 酶活力单位以 l h 由 l m g 蛋 白
水解生成的无机磷的微摩尔数表示 , 即 拼m ol
P i / ( m g
·
h )
。 总酶活力减去 M g , + 一 A T P 酶
活力 即得 N a + , K 气 A T P 酶活力 。
2 结果
2
.
1 糖芥 昔 G 对大 鼠心 N a + , K 长A T P 酶
的抑制作用 : 不同浓度的糖芥昔 G 对大鼠心
N a 十
,
K +
一
A T P 酶的抑制作用曲线 与哇巴 因
的抑制曲线形状相似 , 在 1 拼m ol / L 时都能达
到最大抑制 , 其抑制率糖芥昔 G 为 95 % , 哇
巴因为 1 0 0% ,见图 2 。
.2 2 N +a
,
K + 对糖芥昔 G 抑酶作用的影响 :
在 〔N a 十 〕和 〔K + 〕改变时 ,糖芥昔 G 和哇巴因
对 N a 十 , K气 A T P 酶 的 抑 制 作 用 , 都 符 合
M i e h a e l i s
一
M e n t e n 图型 ,见图 3 , 4 。 所得数据
以 l / 〔K + 〕 (或 1 / 〔N a + 〕对 〔N a + , K + 一 A T P
酶 〕一 ’ 作图 , 两 者呈现相似的动力学图型 ,见
图 5 。
2
.
3 不 同浓度 A T P 对糖芥甘 G 抑酶作 用
的影响 : 见表 1 。 结果可见 , 不同浓度 A T P 对
糖芥昔 G 抑制 N a + , K + 一 A T P 酶活性几乎无
影响 。 哇 巴因对 A T P 为非竞争抑制 。
《中草药 》 1 9 9 9 年第 3。 卷第 10 期
I
,i’
A’
圈 2
卜一怡一一一 r一弓
~ .叩 . . (抑创荆 )
箱芥普 G对 N a+ , K + 一 A T P 曲活性的影晌
` 0 r . 井曹 G
卜下叮二 二`. 竺电瓦
, 户一
圈 3
. . . . . . . . . . . . 山 . . . 一 . 司 . ~ . ` . . . . ~ ~ 日
0 阅 12 0 18 0 2 4 0
( N .
`
) (
~
l / L )
〔锗芥普 G〕 l 尸m o l / L ; 〔哇巴 因〕 1拌m o l / L
M i e h a e l i s
一
M e n t e n 作圈 〔N a + 〕不同时枯芥普 G
和哇巴 因对 N +a , K 十 一 A T P 醉活性影晌
6 0 , . 井普 G
` 。
}厂 ; . … _ _二 、 、 .` 。。
! .f
-
0 10 2 0 30 4 0
〔 K ’ ) (~ d / L 、
〔搪芥昔 G 〕 1 拌 m o l / L ;〔哇巴 因 〕 l 拜m o l /L
圈 4 M i e h a e l i s一M e n t e n 作圈〔 K十 〕不同时摘芥普 e
和哇 巴因对 N a + , K 十 一 A T P 醉活性影晌
3 讨论
本文 结果 表明 , 糖 芥 昔 G 对大 鼠心肌
N +a
,
K 长A T P 酶活性具有显著的抑制作用 ,
并与哇 巴因对 N a + , K 气 A T P 酶抑制作用极
为相似 ,故我们推测糖芥昔 G 的强心作用可
能与对心肌 N a 十 , K 气 A T P 酶活性的抑制作
用有关 。 这种作用与其共同的强心幽烯的基
·
7 5 9
·
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巴 l
币万 i而 6“ L) 一 。 ,。 : 。 、
〔搪芥普 G 〕 l “ m o l / L ; 〔哇 巴 因〕 l 拜 m o l / L
图 5 L i n e w e a r e r 一 B u r k 作 圈 〔N a + 〕不 同时精芥
普 G 对 N a + , K 七 A T P 醉抑制曲线
本结构 亡6 〕有关 , 如 C l ; 和 件( )H 、 C * , 的 各不饱
和 内醋环及 C / D 环顺式稠合有关 ,可能形成
一 个具有相 当刚性的非极性凹 陷 ,通过疏水
作用 ,使非极性 同酶表面互相补合 ,而起抑制
作用 。 两者的结构的不同 ,均在于 C I。 , C , 1及
C
1 5位上 的 取代 基 不 同而 已 。 糖芥 昔 G 对
N a +
,
K
, 一
A T P 酶的抑制几乎不受 A T P 浓度
表 1 不 同浓度 A T P 对精芥普 G 抑制 N a + , K + 一 ^ T P 醉活性的影响〔“ m o l P i / (m g · h )〕
A T P ( m m o l / L )
搪芥昔 G ( l ” m o l / L )
哇 巴因 ( 1 拜m o l / L )
0 0
.
7 5 1
.
5 2
.
2 5 3
.
0 4
.
5 6
.
0 ’
2 6 1
.
4 2 7 3
。
3 2 7 2
.
4 2 6 6
.
2 2 5 4
.
4 2 6 3
.
4
3 3 6 2 5 12 2 5 2 6
.
4 6 6 2
.
2 6 3 1
.
3 5 6 3
.
5
韩晓燕 ,等 . 中国中药杂志 , 19 96 , 2 1 (5 ) : 2 9
且〕 r d f o r d M M . A n a l B io e h e m , 1 9 7 9 , 7 2 : 2 4 8
徐友涵 ,等 . 生物化学 与生物物理进展 , 19 86 , 4 ( l ) : 64
北 京医 学院北 京中医学 院主编 . 中草药成分化学 . 北
京 : 科学 出版社 , 1 9 80 : 4 08
( 1 9 9 9
一
0 5
一
1 7 收稿 )
月JJ任亡几b的影 响 , 提 示糖 芥 昔 G 可 能 主 要 作 用 于
N a +
,
K 十 一 A T P 酶作用机制的第一步 。
参 考 文 献
l 台宝山 , 等 . 药学通报 , 1 9 8 2 , 1 6 ( 6 ) : 3 2 5
2 常福 久 , 等 . 中医 药学报 , 1 9 7 , (1 ) : 27
当归四逆加吴茱英生姜汤和关木通 、
八月扎茎短期肾毒性实验研究△
天津 中医学院 ( 3 0 0 1 9 3) 马红梅 ’ 张伯礼 范英昌 孙静美 李 答
摘 要 对 比进行关 木通及 其所在 的当归 四逆 加吴茱英生 姜汤 旧方 和八月 扎茎及其所 在的 当归
四 逆加吴茱 英生姜汤新方 短期小 鼠肾毒性实验 , 每 日 咭 1次 . 关木通组 9 9 / k g 、 旧 方组 3 0 9 k/ g 、 八
月扎茎组 9 9 / k g 和新方组 3 0 9 k/ g , 连续 7 d 。 观察小鼠体重和血红蛋 白 、 肾功能及肾组织学变化 。
结果发现 :关木通组 及旧 方组 的体重 、 尿 蛋 白和 肾组织 均明显异常 , 与阴性对 照组 比有显著性差异
(尸 < 0 . 0 5 ) , 关木 通组病变较重 ;而八月扎茎组及新方组 未见 明显 异常 。 提示 :关木通及其组成 的旧
方有相 同的肾毒性趋 向 , 而八月 扎茎及其 组成的新方未见 肾毒性 反应 , 因而 , 当归四 逆加吴茱英生
姜 汤中用 木通科八月扎茎 可能 比用马兜铃科关木通更 安全 。
关健词 当归四逆加昊茱 黄生姜汤 关木通 八 月扎茎 肾毒性
中草药安全性 日益受到重视 , 自 1 9 9 3 年
始国际上连续报道中草药肾病 巨`一 5〕 , 1 9 9 7 年
日本又报告多例服用天津当归 四逆加吴茱英
生姜汤颗粒剂 (代号 K M 一 3 8 , 其 中关 木通用
量 1 9 / d ) 和关 木 通 茶后 出现 肾损 害 的 病
人阶 ’ 〕 。 国内也有报道因大量服用关木通导致
急性肾衰的病 例 8j[ , 但关木通作为 当归四 逆
加吴茱英生姜汤复方中的非君药成分 , 在中
国药典 ( 九五 版 ) 常用剂 量 (6 g 以下 ) 下使
用 , 以前未见 肾毒性的报道 。 为指导临床安全
A d d r e s s
:
M a H o n g m e n
,
T ia n ji n C o l le g e o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e m e d i e i n e
,
T i a n j i n
△本课题为天津市 自然基金资助项 目 ( 9 8 3 6 0 9 31 1)
一
7 6 0
.