全 文 :·药剂与工艺·
麝香保心 pH依赖型梯度释药微丸的体外释放度研究
宋洪涛 1 ,郭 涛 1 ,张汝华 2 ,马 燕 2 ,李 铣 2 ,毕开顺 2⒇
( 1. 沈阳军区总医院 药剂科 ,辽宁 沈阳 110016; 2. 沈阳药科大学 ,辽宁 沈阳 110016)
摘 要: 目的 考察麝香保心 p H依赖型梯度释药微丸的体外释放度。 方法 分别以 HPMC, Eudragit○R L-30D-55,
Eudragit○R L100 /S100为包衣材料制备 pH依赖型梯度释药微丸 ,以冰片和人参总皂苷为检测指标 ,按照《中国药典》
2000年版溶出度测定法 ,在模拟人体胃肠道 p H变化条件下进行释放度实验。 结果 冰片和人参总皂苷释放度的
f 2值为 79. 6。 结论 脂溶性成分冰片和水溶性成分人参总皂苷在缓释的同时基本上达到了同步释放。
关键词: 麝香保心 pH依赖型梯度释药微丸 ;冰片 ;人参总皂苷 ;体外释放度
中图分类号: R927. 11 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2001) 11 0978 04
Studies on release of pH-dependent gradient-releasing
heart-protecting musk pellets in vitro
SON G Hong-tao1 , GUO Tao1 , ZHANG Ru-hua2 , M A Yan2 , L I Xian2 , BI Kai-shun2
( 1. Depar tment o f Pha rmacy , Sh enyang M ilitar y Gener al Hospital, Shenyang Liaoning 110016, China; 2. Sh enyang
Pha rmaceutical Univ e rsity , Shenyang Liaoning 110016, China)
Abstract: Object To investigate the release o f pH-dependent g radient-releasing hear t-protecting
musk pellets ( GRHPMP) in vit ro. Methods The pH-dependent GRHPMP was prepared by coating w ith
hydroxy propylmethy cellulo se, Eudragit○R L-30D-55 and Eudragi t○R L100 /S100, repectiv ely. The release
o f bo rneo l and to tal ginsenoside f rom GRHPM P were determined acco rding to method described in Chinese
Pha rmacopoeia ( 2000 ed) at simulated gast rointestinal pH condi tions. Results The f 2 value of release da-
ta o f bor neol and to tal ginsenoside was 79. 6. Conclusion Th e result suggested that , in v itro, the lipo so l-
uble bo rneol and w atersoluble total ginsenoside could release simultaneously at a sustained rate.
Key words: p H-dependent g radient-releasing hea rt-pro tecting musk pellets ( GRHPMP) ; bo rneol; to-
tal ginsenoside; in v itro release
麝香保心丸由麝香、人参、冰片、蟾酥等 7味中
药组成 ,具有芳香温通、益气强心之功能 ,现代临床
多用于心肌缺血引起的心绞痛、胸闷及心肌梗死 [1 ]。
麝香保心 pH依赖型梯度释药微丸是在将原处方中
的 7味药材提取精制制成微丸剂的基础上 ,依据人
体自然的生理条件 ,采用可在不同 pH条件下溶解
的辅料作为包衣材料 ,制备而成的 pH依赖型包衣
微丸 ,以期随着微丸在人体胃肠道的转运而在不同
的生理部位梯度释药 ,从而达到缓释的目的。为考察
复方中药中理化性质差异显著的各成分在缓释的同
时是否达到同步释放 ,本文以脂溶性成分冰片和水
溶性成分人参总皂苷为测定指标 ,对麝香保心 pH
依赖型梯度释药微丸进行了体外释放度研究。
1 仪器与试药
GC-8A型气相色谱仪 ,日本岛津 ; UV -160A型
紫外分光光度计 ,日本岛津 ; ZRD6-A型药物智能溶
出度仪 ,上海黄海药检仪器厂 ; TGL-16B型高速台
式离心机 ; YKH-Ⅱ型液体快速混合器 ; AS5150A型
超声波清洗机 ;微型流化床式包衣机 ,自制。
麝香保心微丸 ,自制 ; Eudragi t○R L-30D-55, Eu-
dragi t
○R
L100, Eudragi t
○R
S100型甲基丙烯酸树脂 ,德
国 R o¨ hm 公司 ; 60RT5型羟丙基甲基纤维素
( HPMC,粘度 5 cps) ,肥城瑞泰精细化工有限公司 ;
D101型大孔吸附树脂 ,天津制胶厂 ;冰片、人参皂苷
Re,中国药品生物制品检定所 ;试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 pH依赖型梯度释药微丸的制备: 将适量麝香
保心微丸加入微型流化床式包衣机的流化室内 ,分
别采用 60RT5型 HPMC水溶液、 Eudragi t○R L-30D-
55水分散体和 Eudragit○R L100 /S100水分散体进行
包衣 ,包衣完成后取出包衣微丸 ,置 40℃恒温箱内
烘干 2 h ,将 3种包衣微丸按等量混合均匀即得。
·978· 中草药 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s 2001年第 32卷第 11期
⒇收稿日期: 2000-05-09
2. 2 冰片的测定方法
2. 2. 1 色谱条件: 固定液: 10% PEG-20M;担体:
chromoso rb wAw-DMCS 80~ 100目 ;柱:螺旋形玻
璃柱 2. 6 mm× 3 m; 柱温: 145℃ ; 气化室温度:
210℃ ;检测器: FID;检测温度: 210℃ ;氮气压力:
98 ( OT) kPa; 氢气压 力: 68. 6 kPa; 空 气压力:
49 k Pa;内标:萘。
2. 2. 2 制剂中冰片的含量测定:标准曲线的绘制:
精密吸取冰片对照品乙醇溶液 ( 2. 06 mg /mL) 1. 0,
0. 5, 0. 2, 0. 1, 0. 05 mL置于 5 mL容量瓶中 ,各加入
内标萘乙醇溶液 ( 2. 00 mg /mL) 0. 2 m L,用无水乙
醇稀释至刻度 ,混匀 ,进样 1μL,在拟定色谱条件下
进行测定 ,以被测组分与内标的峰面积比为纵坐标 ,
以被测组分与内标的质量比为横坐标 ,绘制标准曲
线 ,结果冰片在 20. 6~ 412μg /m L范围内线性关系
良好 ,冰片 (以异龙脑与龙脑的峰面积和计算 )的相
对校正因子为 1. 427 1, RSD= 1. 1% (n= 5) ,回归方
程为 Y= 0. 705 02X+ 7. 491 6× 10- 3 , r= 0. 999 9。
加样回收率实验: 精密量取冰片对照品溶液适
量 ,加入到样品粉末中 ,混匀 ,按样品含量测定法测
定 ,加样回收率为 98. 6% , RSD= 1. 3% (n= 3)。
样品含量测定: 分别精密称取麝香保心 pH依
赖型梯度释药微丸 200 mg,置 15 mL具塞离心管中 ,
加无水乙醇 10 mL,超声提取 30 min,过夜 ,次日离
心 10 min ( 2 500 r /min) , 上 清 液 用 微 孔 滤 膜
( 0. 45μm)过滤 ,吸取续滤液作为供试品溶液。精密
吸取供试品溶液 4. 0 mL,置 5 mL容量瓶中 ,加内标
溶液 0. 2 mL,补加乙醇至刻度 ,混匀 ,进样 1μL测定
峰面积 ,计算其含量。
2. 2. 3 在模拟人体胃肠道 pH变化条件下制剂中
冰片的释放度测定:标准曲线的绘制:量取释放介质
0. 7 mL,精密加入浓度分别为 0. 1, 0. 2, 0. 5, 1. 0,
2. 0, 5. 0 mg /mL的冰片对照品乙酸乙酯溶液各
10μL, 混 匀 , 精 密 加 入 萘 乙 酸 乙 酯 溶 液
( 0. 02 mg /mL) 290μL, 涡 旋 混 匀 5 min, 离 心
( 5 000 r /min) 10 min,吸取上清液 1μL进样进行
GC测定 ,以被测组分与内标的峰面积比为纵坐标 ,
以被测组分与内标的质量比为横坐标 ,标准曲线回
归方程为 Y = 0. 730 07X - 2. 680 4× 10- 3 , r =
0. 999 8。回收率为 99. 1% , RSD= 1. 8% (n= 3)。
释放度测定法:按《中国药典》 2000年版二部溶
出度测定法第三法装置 ,将溶出杯密闭 ,温度 ( 37±
0. 5) ℃ ,转速 100 r /min,释放介质 300 m L,分别在
pH 1. 2条件下实验 3 h , pH 6. 6条件下实验 2 h, pH
7. 5条件下实验 3 h,并分别于设定时间经 0. 8μm的
微孔滤膜滤过取样 ,取样量为 1. 0 mL,同时补加
1. 0 mL同温介质。精密吸取样品溶液 0. 7 mL,精密
加入萘乙酸乙酯溶液 ( 0. 02 mg /mL) 0. 3 mL,涡旋
混匀 5 min,离心 ( 5 000 r /min) 10 min,吸取上清液
1μL进样进行 GC测定。 以样品中实际含量为
100% ,计算冰片的累积释放百分率 ,见图 1。
2. 3 人参总皂苷的测定方法
2. 3. 1 制剂中人参总皂苷的含量测定:标准曲线的
绘制: 精密吸取人参皂苷 Re对照品甲醇溶液
( 1. 00 mg /mL) 20, 40, 80, 120, 160, 200μL,分别置
于 6支具塞磨口试管中 ,低温挥去溶剂 ,加入 5%香
草醛 -冰醋酸溶液 0. 2 mL、高氯酸 0. 8 mL,于水浴
60℃保温 15 min,取出 ,置冰浴中冷却 2~ 3 min,再
加入冰醋酸 5 mL,摇匀 ,随行试剂空白 ,在 560 nm波
长处测定吸光度。以吸光度 (Y )对质量 (X ,μg )绘制
标准曲线。结果 ,人参皂苷 Re在 20~ 200μg范围内
线性关系良好 ,回归方程为 Y = 4. 538× 10- 3 X -
0. 034 98, r = 0. 999 9。
加样回收率试验:取样品粉末数份 ,分别精密加
入适量人参皂苷 Re对照品 ,依法提取测定 ,计算加
样回收率为 97. 2% ,RSD= 1. 7% (n= 3)。
样品含量测定: 称取麝香保心 pH依赖型梯度
释药微丸适量 ,研细 ,精密称取粉末 5 g ,加无水乙醇
100 mL,超声处理 30 min,滤过 ,滤液蒸至约 5 mL时
加入 2 g硅藻土拌匀 ,蒸干 ,置索氏提取器中 ,用氯仿
加热回流脱脂 2 h,脱脂粉末再用甲醇连续回流提取
5 h ,回收甲醇至干 ,残渣用适量水溶解 ,移入已净化
处理的氧化铝 -D101型大孔吸附树脂柱上 ,加水冲洗
至无多糖反应为止 ,再用 70%乙醇洗脱 ,收集洗脱
液 ,蒸干 ,残渣加甲醇使溶解 ,定量转移至 10 m L量
瓶内 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为供试品溶液。精密吸
取供试品溶液 40μL,依法测定 ,计算含量。
2. 3. 2 在模拟人体胃肠道 pH变化条件下制剂中
人参总皂苷的释放度测定:按《中国药典》 2000年版
二部溶出度测定法第三法装置 ,释放介质 300 mL,
温度 ( 37± 0. 5)℃ ,转速 100 r /min,分别在 pH 5. 0
条件下实验 3 h, pH6. 6条件下实验 2 h, pH 7. 5条
件下实验 3 h,并分别于设定时间经 0. 8μm的微孔
滤膜滤过取样 ,取样量为 2. 0 mL,同时补加 2. 0 mL
同温介质。样品溶液用 10 mL氯仿分 3次萃取 ,弃去
氯仿液 ,水溶液过已净化处理的氧化铝 -D101型大孔
吸附树脂柱 ,水冲洗后再用 70%乙醇洗脱 ,收集洗
脱液 ,蒸干 ,残渣按照人参总皂苷的测定方法进行
·979·中草药 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s 2001年第 32卷第 11期
UV测定。以样品中实际含量为 100% ,计算人参总
皂苷的累积释放百分率 ,释放度曲线见图 1。
图 1 在模拟人体胃肠道 pH变化条件下麝香保
心 pH依赖型梯度释药微丸中冰片和人参
总皂苷的释放度曲线
2. 4 冰片和人参总皂苷体外释放的相关性:比较某
一制剂与参比制剂释放度差异或两条释放曲线差异
性的方法有多种 ,如比较释药时间 ( tX% )、平均溶出
时间 ( MDTX% )法 ,相似因子 ( f 2 )或差异因子 ( f 1 )
法 ,以及模型依赖法等 ,其中 f 2是一种较好的区分
释放度差异的方法 [2~ 4 ]。 计算 f 2的公式如下:
f 2= 50 log { [1+ ( 1 /n )∑n
t= 1
W t ( Rt- Tt )
2
]
- 0. 5×
100}
其中 , Rt为对照制剂 t时间的累积释药百分率 ,
Tt 为试验制剂 t时间的累积释药百分率 ,n为释放
度试验的取样次数 , Wt为权重因子 (所有数据点同
等对待时 Wt= 1. 0)。
f 2值可灵敏地反映出制剂的释放度差异 , f 2值
越大 ,两种制剂的体外释放度越接近 , f 2= 100时 ,
两种制剂的释放度完全相同。 随 f 2值减小 ,两制剂
的释放度差异增大。这种比较释放度相似性的方法
已为美国 FDA的“药物评价与研究中心”采纳 ,认
为当 f 2值在 50~ 100之间时两种制剂释放度相似。
本文采用 f 2值比较释药曲线的差异。
结果 ,人参总皂苷与冰片释放度的 f 2值为
79. 6,二者在模拟人体胃肠道 pH变化条件下的释
放度无显著性差异。
3 讨论
迄今为止 ,复方中药缓释制剂的研究一直未取
得突破性进展 ,究其原因 ,关键在于如何使复方中药
中理化性质差异显著的各成分在缓释的同时达到同
步释放。麝香保心微丸由 7味中药材组成 ,其化学成
分非常庞杂 ,理化性质差异巨大 ,既有水溶性成分 ,
如人参总皂苷等 ,又有脂溶性成分 ,如冰片、麝香酮
等。这些成分治疗冠心病心绞痛的机制互不相同、各
有千秋 ,只有在体内同步释放、吸收才能达到复方中
药君臣佐使相互协同、相辅相成的目的 ,也才能与中
医用药的整体观相吻合 ,将其中的任何一个环节割
裂开来 ,均会违背中医药的基本理论与用药精髓 ,影
响药物疗效的发挥与临床治疗效果。
通过 pH敏感无线电遥测技术 ,现在已基本了
解了人体胃肠道的 pH变化情况 ,胃内的 pH一般在
1. 2~ 5之间 ,十二指肠 pH值一般为 6. 63± 0. 53,
空肠 pH值一般为 7. 41± 0. 36,回肠 pH值一般为
7. 49± 0. 46,结肠 pH值一般为 6. 63± 0. 67[5, 6 ]。 此
外 ,已有文献报道 ,微丸的平均胃排空时间在禁食状
态下一般为 1~ 3 h,标准餐后一般为 2~ 4 h;小肠
平均转运时间一般为 3 h左右 ,禁食与否对微丸的小
肠转运时间影响不大 ;微丸口服后平均结肠到达时
间为 5~ 7 h [7 ]。
为此 ,我们根据人体自然的生理条件 ,采用在不
同的 pH条件下溶解的 pH依赖型辅料丙烯酸树脂
作为包衣材料 [8, 9 ] ,制备了二种包衣微丸 ,一种采用
Eudragit○R L-30D-55包衣 ,在 pH≥ 5. 5时溶解 ,以期
在十二指肠部位崩解释药 ;一种采用 Eudragi t○R
L100与 Eudragi t○R S100的混合物作为包衣材料 ,使
其在 pH> 6. 8时溶解 ,以期在空回肠部崩解释药。
另外一部分微丸包以水溶性辅料 HPMC,以期在胃
内崩解释药。上述 3种微丸按一定比例混合装入胶
囊中 ,制备成一种具有 pH依赖性质的可望梯度释
药的缓释制剂。
由于人参皂苷在 pH 1. 2的盐酸溶液中可发生
水解 [10 ] ,故对于 HPMC包衣微丸 ,采用的释放介质
为 pH 5. 0磷酸盐缓冲液 ,通过冰片的释放实验可
知 ,介质的 pH对 HPMC薄膜衣的溶解几乎没有影
响 ,故可以预计 , HPMC包衣微丸中人参总皂苷的
释放在 pH 5. 0与在 pH 1. 2介质中没有差异。人参
总皂苷的释放速率稍快于冰片 ,这与人参总皂苷水
溶性较大是有关的。 通过在模拟人体胃肠道 pH变
化条件下的释放度实验证明 ,由于 pH依赖型梯度
释药微丸的溶出是受 pH控制的 ,故水溶性的人参
总皂苷与脂溶性的冰片除在释放开始时有所差异
外 ,在其它时间段的释放是基本同步的 ,由此也可以
推测 ,麝香保心 pH依赖型梯度释药微丸中性质差
异很大的各种成分基本上可以在缓释的同时达到同
步释放 ,从而使最初的设想得以实现。
参考文献:
[1 ] 中国药典 [ S] . 2000年版 .一部 .
·980· 中草药 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s 2001年第 32卷第 11期
[2 ] Pi llay V, Fas sihi R. Evaluation and comparison of dis solu tion
data d erived f rom dif ferent modi fied releas e dosage forms: an
al ternativ e method [ J ]. J Con tr Rel, 1998, 55: 45-55.
[3 ] Moore J W, Flanner H H. Mathematical com paris on of di sso-
lution profil es [ J ]. Pharm Technology, 1996, 20( 6): 64-74.
[4 ] Pol li J E, Rekhi G S, Augsb urger L L, et al . Meth od s to
compare diss olution profi les and a rationale for w ide dis solu-
tion sp ecif icat ions for m etoprolol tart rate tab lets [ J] . J Pharm
Sci , 1997, 86( 6): 690-700.
[5 ] Ev ans D F, Pye G, Bramley R, et a l. Measuremen t of gas-
t roin test inal pH p rof il es in normal am bulant h uman subject s
[ J] . Gu t, 1988, 29: 1035-1041.
[6 ] Peter J, Wat ts , Lisbeth I. Colonic Drug Delivery [ J ] . Drug
Dev Ind Pharm, 1997, 23( 9): 893-913.
[7 ] Clarke G M, New ton J M , Sh ort M B. Comparative gas troin-
test inal t ransit of p ellet sys tems of varying densi ty [ J] . Int J
Pharm, 1995, 114: 1-11.
[8 ] Khan M Z, Prebeg Z, Ku rjakovic N. A pH-depend ent colon
targeted oral drug delivery sys tem using meth acrylic acid
copolymers. Ⅰ . Manipulat ion of drug releas e using Eudragit
L 100-55 and Eudragi t S100 combinations [ J ] . J Cont r Rel,
1999, 58( 2): 215-222.
[9 ] Khan M Z, Stedu l H P, Ku rjokovic N. A pH-dependent
colon-targ eted o ral d rug delivery sys tem using meth acrylic acid
copolymers. Ⅱ . Manipulat ion of drug releas e using Eudragit
L 100 and Eud ragi t S100 combinations [ J ] . Drug Dev Ind
Pharm, 2000, 26( 5): 549-554.
[10 ] Odani T, Tanizaw a H, Takino Y. Studies on the absorption,
dis t ribution, ex cretion and metabolism of ginseng saponins.
Ⅳ . Decomposit ion of gins enoside-Rg1 and Rb1 in the diges-
tiv e t ract of rats [ J ]. Ch em Ph arm Bull , 1993, 31( 10): 3691-
3697.
HPLC法测定麻黄汤分煎及合煎汤剂中甘草酸含量
曹佩雪 1 ,梁光义 1* ,徐必学 1 ,靳凤云 2 ,贺祝英 2⒇
( 1. 中国科学院天然产物化学重点实验室 ,贵州 贵阳 550002; 2. 贵阳中医学院 ,贵州 贵阳 550002)
摘 要:目的 测定麻黄汤分煎、合煎汤剂中甘草酸含量。方法 采用 HPLC法测定麻黄汤分煎与合煎液中甘草酸
的含量。 选 Hyper sil C18柱 ,流动相: 乙腈 -0. 1%乙酸水溶液 ( 33∶ 67) ,检测波长 254 nm。 结果 分煎液甘草酸平均
回收率为 102. 43% , RSD= 2. 65% ;合煎液甘草酸平均回收率为 99. 41% , R SD= 3. 11%。 结论 方法简便、准确 ,
复方中其它成分对测定无干扰。
关键词: 甘草酸 ;麻黄汤 ; HPLC
中图分类号: R927. 2 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2001) 11 0981 03
Determination of glycyrrhizic acid in MAHUANG DECOCTION
*
by HPLC
when decocted separately or as a whole
CAO Pei-xue
1 , LIANG Guang-yi
1 , XU Bi-xue
1 , JIN Feng-yun
2 , HE Zhu-ying
2
( 1. Key Labor ato ry of Chemistr y fo r Na tural Pr oduc ts, Chinese Academy o f Sciences, Guiyang Guizhou 550002, Chi-
na; 2. Guiyang Co lleg e o f TCM , Guiyang Guizhou 550002, China)
Abstract: Object To determine the content of g lycyrrihizic acid obtained when each individua l ing re-
dient in MAHUANG DECOCTION was decocted sepa ra tely and then mixing the ex t racts w ith boi ling w a-
ter in compa rison wi th tha t obtained by decocting the to tal composi tion to gether as a w hole in the t radition-
al w ay. Methods Th e contents of g lycy rrhizic acid w as determined by HPLC. Hypersil C18 co lumn w as
used, w ith acetoni t rile∶ 0. 1% acetic acid ( 33∶ 67) as the mobile phase and detected at the w aveleng th of
254 nm. Results The average recovery o f g lycyrrhizic acid when sepa ra tely decocted w as 102. 43% , RSD
= 2. 65% , while that of decoction in w ho le w as 99. 41% , RSD= 3. 11% . Conclusion The method w as
simple and accurate and w as no t interfered by o ther consti tuents in the prescription.
Key words: g lycy rrhizic acid; MAHUANG DECOCTION (Ephedra decoction) ; HPLC
*
M AHUAN G DECOCTION (Ephedra decoction) was composed o f Herba Ephedrae , Ramulus Cinnamomi , Semen Ar -
meniacae Amarum , and Rad ix Glycy rrhiz ae Praceparata.
·981·中草药 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s 2001年第 32卷第 11期
收稿日期: 2001-03-18基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 39960083)作者简介:曹佩雪 ,女 , 98级在读研究生 , 1995年毕业于贵阳中医学院药学系 ,主要研究方向为中药复方化学成分的研究。
*通讯联系人