全 文 ：内折香茶菜乙素抗肿瘤作用的研究△
河南医科大学医学实验中心 (郑州 450052)　　李继成 　杨丽嘉　刘兰琦
河南省医学科学研究所　　　　　　　 　　　叶启霞
摘　要　内折香茶菜乙素是从内折香茶菜 Rabdosia inf le xus ( Thumb) Kundo叶中分离得出的一种新的二萜化合
物 ,实验证明 ,在体外对艾氏腹水癌细胞有很强的细胞毒作用 ,对 Lewis肺癌 ,小鼠肉瘤 S180实体型及腹水型 、小鼠
肝癌 HCA实体型及腹水型等均有明显的抗肿瘤作用 ,对以小鼠溶血素形成为指标的体液免疫有轻度抑制作用 ,而
对由 DNCB诱导的小鼠迟发性超敏反应为指标的体内细胞免疫无明显影响。
关键词　内折香茶菜　内折香茶菜乙素　二萜化合物　抗肿瘤作用
　　内折香茶菜乙素是从河南省嵩县产内折香茶菜
Rabdosia inf lexus ( Thumb ) Kundo叶中分离得到
的一种化合物 ,经结构鉴定为螺断贝壳杉烯二萜 [1 ] ,
本文就其抗肿瘤作用进行研究。
1　材料
1. 1　内折香茶菜乙素 ,由河南医科大学医学实验中
心新药研究室提供 ,含量 0. 25% (原生药计算 ) ,为
无色棱形结晶 ,溶于水 ,实验时用生理盐水稀释到所
需浓度备用。
1. 2　动物:由河南医科大学实验动物中心提供的昆
明种小白鼠 ,体重 ( 20± 2) g ,雌雄兼用 ,室温为 22
℃～ 25℃ ,常规饲料喂养 ,饮水量不限。
1. 3　瘤株 , ECA艾氏腹水癌 , S180肉瘤实体型及腹
水型 , HCA肝癌实体型及腹水型 , Lewis肺癌实体
型 ,各瘤株均由河南省医科所药理室保种 ,按常规方
法传代接种。
2　实验方法
2. 1　对体外培养的 ECA瘤细胞生长的影响: 无菌
条件下 ,抽取荷 ECA肿瘤小鼠腹水 ,混悬于 RPM I
1640培养液中 ,按 5× 105 /mL细胞接种于培养瓶
中 ,每瓶接种细胞悬液 1. 9 mL,按拟定剂量加入药
液 0. 1 mL,总体积 2 m L,置 5% CO2 , 37℃培养箱
中培养 24 h后取出 ,采用台盼蓝拒染法测定细胞杀
伤率 [2 ]。
2. 2　体内抗肿瘤作用: 抗 S180肉瘤和抗 HCA肝癌
实验组动物均为昆明种小鼠 ,抗 Lewis肺癌实验动
物为 C57纯种小鼠 ,各实验组均分为 4组 ,即阴性对
照组 ,生理盐水 0. 1 mL /10 g;阳性对照组 , 5-Fu 20
mg /kg ,内折香茶菜乙素低、高剂量组 , 12. 5, 25
mg /kg。实验按常规方法接种 ,接种后次日按拟定剂
量 ip给药 ,每日 1次 ,连续 10 d,腹水型肿瘤以存活
期延长率为疗效指标 ,实体型肿瘤以瘤重抑制率作
为疗效指标 ,实验结果经统计学处理 ,按 t检验进行
显著性测定。
2. 3　对机体免疫功能的影响 [3 ]: 采用小鼠溶血素实
验和对二硝基氯苯 ( DNCB) 诱导的小鼠迟发性超
敏反应的影响 ,测定本品对小鼠体液免疫和细胞免
疫状态的影响 ,实验分组同 2. 2,昆明种小鼠以
20% 的压积绵羊红细胞致敏 ,每鼠 0. 5 m L,于致敏
后第 2天给药 ,连用 5 d,于致敏后的第 5天进行免
疫试验 ,取灭活的小鼠眼眶血清 2 mL,以 2倍稀释
法加入每一试验管 ,每试管加入 1∶ 30绵羊红细胞
( SREC) 0. 2 mL及 1∶ 5豚鼠血清 0. 2 mL。充分摇
匀 ,于 37℃ 培养 30 min,观察其最大溶血稀释度。
迟发性超敏反应实验各用药组动物按拟定剂量
连续用药 10 d,于实验的第 5天将小鼠腹部用新鲜
配制的 1% DN CB丙酮 -麻油 50 mL致敏 ,第 11天
再以新鲜配制的 1% 的 DN CB丙酮 -麻油 10 mL
涂于小鼠右耳进行攻击 , 24 h处死动物 ,剪下小鼠
左右两耳壳 ,用打孔器打下直径 为 8 mm的耳片精
确称重 ,以左右两耳重量之差为肿胀度 ,同时取其胸
腺 ,脾脏精确称重。 计算其脾指数和胸腺指数 ,实验
结果经统计学处理 ,经 t检验进行组间比较。
3　结果
3. 1　对体外培养的 ECA瘤细胞生长的影响: 见表 1。
　　由表 1可以看出 ,内折香茶菜乙素剂量为 2
μg /mL时 ,细胞杀伤率为 100% ,当减小到 0. 125
μg /mL时则为 48% ,作用明显减弱 , 表明该化合物
·681·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 9期
Address: Li Jich eng , Laboratory Cent re of M edical Research, Henan Univ ersi ty of M edical Sciences, Zhengzh ou李继成　男 , 47岁 ,北京医科大学药学院毕业 ,现任河南医科大学新药研究室主任 ,副研究员。 1997～ 1998年应日本摄南大学药学部的邀请作为客员研究员赴日本留学。 承担国家、省重点科研项目 12项 ,从药物中分离活性单体近 40个 ,发表论文 30余篇 ,其中有 20余篇被《美国化学文摘》、《中国药学文献》等刊物录用。国际刊物发表论文 8篇 ,出席国际会议 5次。著书 2本 ,获科技成果奖 6项 ,获省市优秀论文奖 3项。△国家人事部留学回国人员资助项目 ,人发 [1999 ]122号 ;河南省科技攻关资助项目 ,课题号: 991180121
表 1　内折香茶菜乙素对体外培养的 ECA
瘤细胞生长的影响
组别 剂量 (μg /mL) 蓝染率 (% )
对照 — 0～ 5
内折香茶菜乙素 2 100
1 100
0. 5 87
0. 25 64
0. 125 48
在体外对 ECA肿瘤细胞有较强的细胞毒作用 ,且
随剂量增大而作用增强 ,显示出剂量依赖性。
3. 2　体内抗肿瘤作用:由表 2～ 6可以看出 ,内折香
茶菜乙素在剂量为 12. 5 mg / ( kg· d) 时 ,对实体型
及腹水型肿瘤表现有一定抑制作用 ,而剂量为 25
mg /( kg· d) 时 ,疗效提高 ,表现出明显抗肿瘤作
用 ,与对照组相比 , P < 0. 01。
3. 3　对小鼠溶血素的影响:由表 7可以看出 ,对照
组的最大溶血稀释度为 1∶ 512,内折香茶菜乙素两
剂量组的最大稀释度分别为 1∶ 512, 1∶ 256,表明
本品在 25 mg /( kg· d) 时 ,对以溶血素反应为指标
的体液免疫可能有轻度抑制作用。
3. 4　对 DN CB诱导的小鼠迟发性超敏反应的影
响:见表 8。
表由 8可以看出 ,内折香茶菜乙素与正常组相
比 ,两剂量组的耳肿胀度、脾指数和胸腺指数均无差
异 ( P > 0. 05) ,表明该样品对小鼠体内细胞免疫
无明显作用。
4　讨论
表 2　对 C57小鼠实体瘤 Lewis肺癌的影响 (x± s)
组　别 剂量
( mg /kg· d )
动物数
始　末
体重 ( g)
始 末　　 瘤重 ( g)
抑瘤率
(% )
对照 — 8　 8 18. 88± 0. 83 23. 50± 1. 28 3. 07± 0. 34
5-Fu 20(第 1, 4, 7天给药 ) 8　 8 19. 00± 0. 93 19. 69± 0. 75 1. 18± 0. 78* * * 62. 79
内折香茶菜乙素 12. 5 8　 8 18. 88± 0. 89 20. 88± 0. 69 1. 69± 0. 58* * 44. 95
25 8　 8 18. 80± 0. 89 21. 13± 1. 03 1. 48± 0. 68* * * 51. 5
　　　　与对照组比较: * P > 0. 05　 * * P < 0. 05　 * * * P < 0. 01 (下表同 )
表 3　对小鼠实体瘤 S180肉瘤的影响 (x± s)
组　别 剂量
( mg /kg· d )
动物数
始　末
体重 ( g)
始 末　　 瘤重 ( g)
抑瘤率
(% )
对照 — 8　 8 20. 00± 0. 93 23. 06± 1. 29 2. 55± 0. 65
5-Fu 20(第 1, 4, 7天给药 ) 8　 8 20. 00± 0. 46 22. 88± 1. 25 1. 21± 0. 19* * * 52. 7
内折香茶菜乙素 12. 5 8　 8 19. 63± 0. 74 22. 00± 2. 28 2. 08± 0. 72* * 18. 4
25 8　 8 19. 37± 1. 06 23. 13± 1. 38 1. 48± 0. 73* * * 45. 1
表 4　对小鼠实体瘤 HCA (肝癌 )的影响 (x± s )
组　别 剂量
( mg /kg· d )
动物数
始　末
体重 ( g)
始 末　　 瘤重 ( g)
抑瘤率
(% )
对照 — 8　 8 19. 13± 0. 64 24. 88± 1. 46 3. 36± 0. 41
5-Fu 20(第 1, 4, 7天给药 ) 8　 8 19. 63± 1. 41 22. 13± 0. 83 1. 89± 1. 01* * * 43. 75
内折香茶菜乙素 12. 5 8　 8 19. 83± 1. 06 25. 50± 1. 77 2. 13± 0. 53* * 36. 60
25 8　 8 19. 13± 0. 35 22. 50± 1. 19 1. 82± 0. 87* * * 45. 83
表 5　对小鼠腹水瘤 S180的影响 (x± s )
组　别 剂量
( mg /kg· d )
动物数
始　末
体重 ( g)
始 末　　
存活天数　　
( d)　　
生命延长
率 (% )
对照 — 8　 0 20. 13± 1. 13 27. 13± 9. 36 12. 37± 0. 74
5-Fu 20(第 1, 4, 7天给药 ) 8　 1 19. 75± 0. 46 23. 38± 2. 13 40. 00± 11. 30* * * 223. 36
内折香茶菜乙素 12. 5 8　 0 19. 63± 0. 74 29. 25± 1. 58 27. 63± 5. 88* * * 123. 36
25 8　 0 19. 63± 0. 74 24. 38± 2. 01 36. 50± 6. 48* * * 195. 07
表 6　对小鼠腹水瘤 HCA的影响 (x± s)
组　别 剂量
( mg /kg· d )
动物数
始　末
体重 ( g)
始 末　　
存活天数　　
( d)　　
生命延长
率 (% )
对照 — 8　 0 18. 5± 1. 13 27. 88± 2. 69 13. 25± 1. 29
5-Fu 20(第 1, 4, 7天给药 ) 8　 2 9. 13± 0. 78 22. 63± 3. 42 35. 13± 7. 67* * * 165. 13
内折香茶菜乙素 12. 5 8　 0 18. 75± 0. 71 27. 31± 2. 89 23. 50± 9. 61* * * 73. 50
25 8　 2 19. 13± 0. 83 26. 63± 3. 94 33. 00± 19. 22* * * 149. 06
·682· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 9期
表 7　溶血素试验
组别 剂量
( mg /kg· d ) 最大稀释度
对照组 — 1∶ 512
5-Fu 15 1∶ 32* * *
内折香茶菜乙素 12. 5 1∶ 512*
25 1∶ 256* *
　　小鼠肝癌 HCA、肉瘤 S180 , Lewis肺癌 ,均为抗
肿瘤药物筛选实验中常用的动物移植性肿瘤模型 ,
本文采用这些瘤株进行了内折香茶菜乙素的抗肿瘤
作用实验。并通过小鼠溶血素实验和 DNCB诱导的
小鼠迟发性超敏反应实验对小鼠的机体免疫状态影
响进行了实验研究。结果表明 ,内折香茶菜乙素具有
表 8　对 DNCB诱导的小鼠迟发性超敏反应的影响 (x± s)
组　别 剂　量
( mg /k g· d) 动物数
耳肿胀度　　
( mg)　　
脾指数　　
( mg /10 g )　　
胸腺指数　　
( mg /10 g )　　
对照 — 8 1. 53± 0. 21 84. 52± 8. 24 45. 04± 4. 39
CPA 15 8 2. 02± 0. 33* * 43. 82± 9. 02* * 19. 21± 3. 07* *
内折香茶菜乙素 12. 5 8 1. 67± 2. 04* 76. 45± 9. 61* 39. 66± 5. 37*
25 8 1. 65± 2. 87* 79. 65± 7. 45* 43. 35± 2. 14*
较强的抗肿瘤作用 ,且抗瘤谱较广 ,能抑制 Lewis
肺癌 ,肉瘤 S180实体型 ,以及肝癌 HCA实体型等实
体瘤的增长 ,也能明显延长荷肉瘤 S180腹水型和荷
肝癌 HCA腹水型小鼠的生命延长率 ,其抗肿瘤作
用的强弱呈现剂量依赖性。
内折香茶菜乙素其抗肿瘤作用稍逊于 5-Fu,对
机体免疫机能没有明显影响。内折香茶菜盛产于河
南山区 ,资源丰富 ,内含的内折香茶菜乙素具有较好
的临床应用价值 ,可做为一种有前途的抗肿瘤药物 ,
值得进一步深入研究与开发。
参 考 文 献
1　李继成 ,袁宝梅 ,苏金玲 ,等 . 中草药 , 1996, 27( 6): 323
2　王庆端 ,王绵英 ,刘海君 ,等 . 河南医科大学学报 , 1987, 22 ( 4):
372
3　徐叔云 . 药理实验方法学 . 第二版 . 北京:人民卫生出版社 ,
1992: 11
( 1999-11-02收稿 )
鲨鱼软骨制剂诱导人肝癌细胞凋亡及 p21WAF1和 PCNA
表达调控的研究△
武警医学院细胞与分子生物学实验室 ( 300162)　　陈　莉 　陈小义　徐瑞成
摘　要　目的: 探讨鲨鱼软骨制剂 ( SCP)能否诱导 SMM C7721细胞凋亡及其机制。方法: 以不同浓度 SCP加入体
外培养的 SM MC7721 细胞中 ,用 M T T 比色法 ,荧光显微镜 ,琼脂糖凝胶电泳和免疫细胞化学方法 ,观察
SMM C7721细胞形态学 ,生化和基因表达的变化。结果: SCP明显抑制 SM MC7721细胞生长 , IC50值为 1 mg /mL ,
荧光显微镜下可见典型的凋亡细胞的形态学改变 ;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带 ( DN A ladder );免疫细胞化学检
测显示 p21WAF1表达增强 , PCN A表达减弱。结论: SCP诱导 SMM C7721细胞凋亡 ,使 p21WAF1表达上调 , PCNA表
达下降 ,提示 SCP是一种有前途的抗肿瘤药物。
关键词　 SMM C7721细胞　鲨鱼软骨　细胞凋亡　 p21W AF1　 PCN A
　　近年来研究表明 ,鲨鱼软骨的有效成分具有抗
血管生成和抗炎作用 [1 ] ,并可通过抑制血管生成而
抑制肿瘤细胞的增殖 [ 2] ,也有报道 ,鲨鱼软骨对肺
癌、结肠癌和淋巴瘤具有潜在的治疗效果 [3 ]。沈先荣
等人以鲨鱼软骨为原料 ,经盐酸胍抽提等步骤得到
鲨鱼软骨制剂 ( Shark Car ti lage Prepa ra tion, SCP)
能抑制血管生成和 HeLa细胞的生长 ,同时提高机
体免疫功能 [4 ] ,但关于 SCP诱导人肝癌细胞凋亡的
研究未见报道。本研究以人肝癌细胞 ( SMMC7721)
为靶细胞 ,进一步研究 SCP抑制肿瘤细胞生长的机
制 ,为 SCP防治肿瘤的应用提供实验依据。
1　材料
鲨鱼软骨粉由天士力药业公司赠与 ,人肝癌细
胞株 ( SMMC7721) 由天津市肿瘤研究所生化室引
·683·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 9期
Address: Ch en Li, Tianjin Medical College of Chines e People s Armed Police Forces, Tianjin陈　莉　女 , 1981年毕业于内蒙古医学院研究生班 ,现任武警医学院生物教研室副教授。主要从事抗癌药物作用机制的研究 ,发表科研论文 10篇 , 1997年以第一作者获武警部队科技进步二等奖。△武警部队资助科研项目 ,批准号: WK H98027