全 文 ：槲寄生抗氧化物质的研究测定
宰学明 1 ,吴国荣 1 ,龚祝南 2 ,陆长梅 1 ,邵志广 1
( 1. 南京师范大学生命科学学院 ,江苏 南京 210097; 2. 南京大学 生物科学技术系 ,江苏 南京 210000)
摘 要:目的 研究槲寄生抗氧化物质并进行活性测定。方法 分别测定了槲寄生 Viscum coloratum ( Kom. ) Nakai
叶、茎、果中超氧化歧化酶 ( SOD) ,过氧化氢酶 ( CAT )、过氧化物酶 ( POD )、谷胱甘肽过氧化物酶 ( GSH-Px )等抗氧
化酶的活性 , GSH、绿原酸、类黄酮等小分子抗氧化物质的含量以及总抗氧化能力。 结果 发现该植物富含抗氧化
物质。 结论 表明槲寄生所含抗氧化活性物质种类多 ,数量大 ,具很强的抗氧化能力 ,尤以叶为最。
关键词: 槲寄生 ;抗氧化物质 ;抗氧化能力
中图分类号: R927. 2 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2001) 12 1081 03
Studies on antioxidative substances in stem of Viscum coloratum
ZAI Xue-ming
1
, WU Guo-rong
1
, GON G Zhu-nan
2
, LU Chang-mei
1
, SHAO Zhi-guang
1
( 1. Co llege o f Life Sciences, Nanjing No rma l Univ er sity, Nanjing Jiang su 210097, China; 2. Depar tment of Bio lo gical
Science and Technolog y , Nanjing Univ er sity , Nanjing Jiang su 210000, China)
Abstract: Object To determine the activi ties of va rious antioxidant enzymes, including superoxide
dismutase, catalase, peroxidase and glutathione peroxidase, and the contents of some simpler antioxidants
such as g lutathione, chlo rog enic acid and certain f lav onoids in the leaves, stems and frui ts o f V iscum col-
oratum ( Kom. ) Nakai. Methods The activi ties w ere determined as described in va rious li terature re-
ports. Results The plant w as found to be rich in various antioxidants. Conclusion V. coloratum , w ith
i ts abundant antio xidant constituents, is prov ed to be a st rong antioxidation drug for medical use especially
i ts leaves.
Key words: Viscum coloratum ( Kom. ) Nakai; antiox idativ e substances; antioxidant capaci ty
槲寄生为传统中药 ,其基源为桑寄生科 ( Lo ran-
theceae )植物槲寄生 Viscum coloratum ( Kom. )
Nakai干燥的带叶茎枝。其性平 ,味苦 ,有祛风湿 ,补
肝肾 ,强筋骨 ,养血 ,安胎 ,降血压作用。近年来生药
学研究报道槲寄生药效化合物主要为黄酮类化合物
和齐墩果酸、β -乙酸香树脂素脂、内消旋肌醇及和黄
槲寄生苷 A、黄槲寄生苷 B、高黄槲寄生苷 B及羽扇
豆醇、肉豆蔻酸等 [1～ 4 ]。另有报道槲寄生一些生物活
性极高的高分子化合物如毒肽 (硫堇 Thionins)类、
糖蛋白、多糖等物质具有很强的抗癌作用 [ 5, 6] ,而以
超氧物歧化酶 ( SO D)为代表的抗氧化酶和 VC、
GSH、绿原酸等非酶抗氧化物质尚未见报道 ,本文
主要测定了这些抗氧化物质 ,并比较了不同器官间
各种抗氧化物质的分布关系 ,为植物药槲寄生的深
度开发提供参考。
1 材料
材料来源: 2000年 10月于山西五台山采集 ,
- 20℃冰箱保存 ,分别取叶、茎、果作为材料。
2 方法
2. 1 抗氧化酶的鉴定及其活性测定:粗酶液的提
取 ,采用吴国荣、程光宇等方法 [7 ] ; SOD活性测定采
用 Stew ert和 Bew ley的 NBT光抑制法 [ 8] ;过氧化
氢酶 ( CAT)活性测定采用 Luis氧电极法 [9 ] ,以每分
钟的放氧量表示酶活性的大小 ;过氧化物酶 ( POD)
活性测定采用愈创木酚显色法 [10 ] ,以单位时间内光
密度的变化量表示 ;谷胱甘肽过氧化物酶 ( GSH-
Px )参照 Leopo ld Flohe等的 DTN B法测定 ,以每分
钟吸光度变化值表示酶活性。
2. 2 抗氧化非酶物质的测定: V C含量的测定 ,参
照易现峰等的方法 [11 ]。 GSH含量的测定 ,参照 Ell-
man的方法 [12 ]以 DTN B显色 ,在 422 nm处测吸光
度值 ,用 GSH作标准曲线计算 GSH含量。绿原酸含
量测定按胡景江等方法 [13 ]。 类黄酮含量测定 ,参照
刑建民等方法 [14 ]。
·1081·中草药 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s 2001年第 32卷第 12期
收稿日期: 2001-01-17基金项目: 江苏省自然基金项目 (项目编号: BK99097)和南京师范大学资源生物技术重点实验室江苏省高校开放基金项目
( 1611003001)资助。作者简介:宰学明 ( 1968-) ,男 ,江苏仪征人 ,现南师大生科院攻读植物学硕士学位 ,主要从事植物化学、植物生理生化方面研究。现通讯地址:南京师范大学生命科学院 99级硕士。 E-mai l: zxm 000@ 263. n et
2. 3 总抗氧化能力的测定 ,参照 Nichloas等的方
法 [15 ]。
3 结果与分析
3. 1 抗氧化酶的鉴定和活性测定: SO D是生物体
内抗氧化酶系统的一个关键酶 ,其歧化 O÷2 ,形成 O2
和 H2O2。 测定表明槲寄生叶、茎富含 SOD,每克鲜
重均超过 320酶单位 ,这在植物药中是不多见的 ;果
中的较低 ,以每克鲜重计量的叶、茎中 SOD活性分
别是果的 4. 997倍 4. 150倍。 CAT和 PO D都是生
物体内 H2O2等活性氧清除酶 ,它们与 SOD协同作
用 ,维持机体内活性氧代谢平衡。实验结果显示
POD在叶、茎、果中的分布与 SOD相似 ; CAT分布
与 SOD有所不同 ,其在叶中活性非常强 ,活性分别
是茎中的 222. 2% ,果中的 272. 7% 。 GSH-Px则是
使还原型谷胱甘肽转变为氧化型谷胱甘肽 ,同时使
有毒的过氧化物变成无害羧基化合物 ,使过氧化氢
分解。 数据表明槲寄生叶、茎中的 GSH-Px活性都
较强 (表 1)。
表 1 槲寄生的不同组织内抗氧化酶活性比较
类型 SOD活性
U. g- 1 FW
CST活性
μmm olO2. g- 1
FW. min- 1
POD活性
ΔOD470. g- 1
FW. min- 1
GSH-PX
活性
ΔOD422. g- 1
FW. min- 1
叶 392. 490 6. 046 118. 759 8. 518
茎 325. 610 2. 720 97. 360 6. 239
果 78. 536 2. 217 48. 372 3. 294
3. 2 抗氧化非酶物质含量的测定: V C是生物体内
重要的抗氧化物质 ,能淬灭单线态氧和超氧阴离子
( O
÷
2 )。 实验结果显示槲寄生 V C含量很高 ,以每克
鲜重计量的 V C含量都超过了 3 mg。GSH是植物体
普遍存在的还原物质 ,能还原 S-S键 ,稳定蛋白质中
SH基团 ,在维持膜结构的完整性和防御膜脂被自
由基和脂氢过氧化中起着重要作用 [16 ] ,实验表明
GSH含量以叶最高 ,茎果次之。 绿原酸是由咖啡酸
和喹尼酸组成的缩酚酸 ,不仅有抗氧化作用 ,还具有
广谱抗菌作用 ,是一种重要的药用成分。数据表明 ,
槲寄生叶中的绿原酸含量在植物药中名列前茅。已
知槲寄生含有丰富的类黄酮物质 ,这是一种很强的
O
÷
2 捕捉剂和 O÷2 淬灭剂 ,具抗补体和抗氧化剂的功
能 ,在医疗保健中极具开发前景 [6 ]。分器官测定的结
果显示 ,各组织中类黄酮含量以叶最高 ,以每克鲜重
计量叶中类黄酮含量分别是茎中的 2. 431倍 ,果中
的 2. 837倍 (表 2)。
3. 3 总抗氧化能力的测定:总抗氧化能力是机体内
所有抗氧化物质抗氧化能力的总和 ,以每克鲜重计
量测定的槲寄生叶、茎、果总抗分别是 275. 06,
190. 04, 164. 56单位 ,显示出极强的抗氧化能力 ,提
示槲寄生在抗自由基损伤方面具有巨大的潜力。
表 2 槲寄生的不同组织内小分子抗氧化物质含量比较
(mg /g FW)
类型 V C GSH 绿原酸 类黄酮
叶 3. 551 0. 176 0. 903 3. 782
茎 3. 132 0. 161 0. 359 1. 556
果 3. 693 0. 085 0. 181 1. 334
4 讨论
实验结果表明 ,槲寄生的叶、茎、果中均含有丰
富的抗氧化活性物质 ,无论是抗氧化酶还是小分子
的抗氧化物质种类多 ,数量大 ,其中尤以叶最为显
著 ,与槲寄生祛风湿 ,补肝肾等中医学效用吻合。 祖
国医学中“邪之所凑 ,其气必虚”、“温阳、补气、驱邪”
等理论与自由基学说中机体致病 ,衰老的机制有许
多可以沟通的地方。 槲寄生等植物药含有丰富的抗
氧化活性成分是宝贵的药用资源 ,药材中还含有促
进机体 SO D等抗氧化系统诱导和强化的物质如多
糖、皂苷等 ,也不容忽视。 如何坚持以中医中药理论
为指导 ,运用多学科手段和现代分离提取技术 ,改进
中成药的炮制工艺 ,尽可能地把其中的活性成分提
取并保存下来 ,是现代中医药正在深入研究的课题。
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芪参胶囊质量标准的研究
刘桂霞 1 ,倪 艳 2 ,苏 强 2 ,刘振权 2 ,李先荣 2
( 1. 天津中医学院 ,天津 300193; 2. 山西中医药研究院 ,山西 太原 030012)
摘 要: 目的 研究芪参胶囊的质量控制标准 ;方法 采用薄层色谱法对制剂中黄芪、人参、水蛭、赤芍和川芎进行
定性鉴别 ;同时采用双波长薄层扫描法对黄芪甲苷进行了含量测定 ;结果 平均回收率为 100. 14% , R SD为
1. 9% ;结论 该方法灵敏、简便、准确 ,重现性好 ,可作为该制剂的质量控制标准。
关键词: 薄层色谱鉴别 ;薄层扫描法 ;黄芪甲苷 ;含量测定 ;芪参胶囊
中图分类号: R927. 11 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2001) 12 1083 03
Studies on standard for quality control of QISHEN CAPSULE
LIU Gui-xia1 , N I Yan2 , SU Qiang2 , L IU Zhen-quan2 , L I Xian-rong2
( 1. Tianjin Co lleg e o f TCM , Tianjin 300193, China; 2. Shanxi Academ y of TCM , Taiyuan Shanxi, 030012, China )
Key words: identification of TLC; TLCs; ast ragalo sideⅣ ; content determina tion; QISHEN CAP-
SULE
芪参胶囊是由黄芪、人参、水蛭、川芎、麦冬、五
味子、赤芍、丹参、泽兰、土鳖虫等中药经现代科学手
段提取加工而成 ,具有益气活血、祛瘀通经、滋阴养
血、平肝熄风的功效 ,主要用于中风引起的各种症
状。本文对其质量标准进行了研究。
1 仪器与试药
CS-9301PC薄层扫描仪 (日本岛津 ) ;毛细点样
管 ( U. S. A. Drummond) ;薄层自动铺板器 (重庆南
岸贝尔德仪器技术厂 ) ; UV -8型紫外分析仪 (上
海 )。硅胶 G(青岛海洋化工厂 ) ;化学试剂均为分析
纯。黄芪甲苷、芍药苷、人参皂苷 Rg1对照品 ,川芎、
丹参对照药材 (中国药品生物制品检定所 ) ;水蛭对
照药材经鉴定为水蛭科动物蚂蟥 Whitmania pigra
Whitman的干燥虫体。 芪参胶囊为实验室自制。
2 水蛭的薄层鉴别
取本品内容物 4 g ,加硅藻土 3 g,充分混匀 ,加
甲醇 3 mL,超声处理 20 min,滤过 ,滤液水浴蒸干 ,
残渣加水 30 mL使溶解 ,用乙醚振摇提取 3次 ,每次
20 m L(水溶液备用 ) ,合并乙醚提取液 ,挥去乙醚 ,
残渣加甲醇 1 mL使溶解 ,作为供试品溶液。 取缺水
蛭的芪参胶囊阴性样品 5 g ,按上法制成阴性对照品
溶液。另取水蛭对照药材 1. 5 g ,加甲醇 10 mL,超声
处理 20 min,滤过 ,滤液浓缩至约 1 mL,作为对照药
材溶液。吸取供试品及阴性对照品溶液各 3μL、对
照药材溶液 2μL,分别点于同一硅胶 G薄层板上 ,
以氯仿-甲醇 ( 40∶ 1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷
以 5%香草醛 -硫酸溶液 ,在 105℃加热约 5 min。日
光下检视 ,供试品色谱中 ,在与对照药材色谱相应的
位置上 ,显相同颜色的斑点。 阴性对照无干扰 (见图
1-Ⅰ )。
3 赤芍的薄层鉴别
取水蛭的薄层鉴别项下乙醚提取后的水溶液 ,
用水饱和的正丁醇振摇提取 3次 ( 20, 10, 10 mL) ,
合并正丁醇提取液 ,用氨试液提取 3次 ,每次
15 mL,弃去氨液 ,正丁醇液蒸干 ,残渣加水 3 mL使
溶解 ,加于 D101型大孔吸附树脂柱 (内径 2 cm ,长
12 cm )上 ,以水 50 mL洗脱 ,弃去水液 ,再用 40%乙
醇 30 mL洗脱 ,浓缩 ,加乙醇 1 mL使溶解 ,作为供试
品溶液。 取缺赤芍的芪参胶囊阴性样品 5 g ,按上法
制成阴性对照品溶液。另取芍药苷对照品 ,加乙醇制
成每 1 mL含 2 mg的溶液 ,作为对照品溶液。 吸取供
试品及阴性对照品溶液各 10μL、对照品溶液 4μL,
·1083·中草药 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s 2001年第 32卷第 12期
收稿日期: 2001-04-28