全 文 ：李仪奎 , 等 . 中药药理实验方法学 . 上海 : 上海科学技
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陈 奇 , 等 . 中药药理研究方法学 . 北京 : 人民卫生出
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k a t z a A M
, e t a l
.
C i r R e s
,
1 9 8 1
,
4 8
:
1
周金黄 ,等主编 . 中药药理与临床研究进展 . 第 1 册日匕
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1 2 孙锡铭 , 等 . 中草药 , 一9 9 1 , 2 2 ( l ) : 2 2
一3 王树立 , 等 . 中西医结合杂志 , 1 9 8 7 , 7 ( 8 ) : 4 8 3
( 1 9 9 7
一
0 7
一
3 1 收稿 )
S t u d i e s o n t h e H y P o l i P i d e m i e E f f e e t o f X i a o y u T a b l e t s
i n H y P e r l iP i d e m i e R a b b i t s a n d R a t s
X ie M
e i li
n ,
G
u Z h
e n l u n
,
C h
e n K e ji
, 。 t a l ( S u z h o u I n s t i t u t e o f C h in e s e M a t e r i a M e d i e a
,
S
u z
h
o u
2 1 5 0 0 7 )
A b s t r a e t H y P o l i P id
e m i e e f f e e t s o f X ia o y u t a b le t s w e r e e x a m in e d in e x p e r im e n t a l h y p e r li P i d e m i e r a bb i t s
a n d
r a t s i n d
u e e
d b y f
e e
d in g h ig h f
a t d i
e t
.
R
e s u l t s s h o w e d t h a t le v e ls o f s e r u m T C 如d L D L 一 C in r a b b it s t r e a t -
e
d w it h X ia o y u t a b l e t w e r e s ig n if i e a n t ly lo w e r t h a n t h o s e o f h y p e r li p id e m ie m o d e l g r o u p
.
I n h y p
e r li p i d e m i e
r a t s , th e d
r u g o b
v io u s ly l
o
w
e r e
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s e r u m T C
,
T G
,
L D L
一
C
a n d a p o B le v e ls
,
w i t h
s im u l t a n e o u s r e d u e t i o n o f h e p
-
a t i e f
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e g e n e r a t i o n a n d
e o e
f fi
e ie n t o f h e p a t ie w e ig h t
·
K e y w o r d s X i a y u T a b l e t H y P o li P id e m ie A e t io n
补益中药复方对环磷酞胺处理小鼠粒系造血的影响
湖南医科大学血液生理研究室 (长沙 4 1 0 0 7 8) 罗志 勇 ’ 谭孟群 王绮如 蒋德昭
摘 要 为了从传统中药中寻找防治化疗和放疗所致骨髓粒系造血抑制的药物 , 通过建立实验性
环磷酞胺 (C y : 。 . 08 9 k/ g )低白细胞血症小鼠模型 ,观察了参茂补苦复方 ( G A F S , 1 3 . 9 9 /k g · d
i p 6 d )对粒系造血的影响 。 结果表明 : G A F S 对 c y 所致外周血白细胞和中性粒细胞数下降具有对
抗和促恢复作用 ( p < 。 . 01 ) ,能防治骨髓有核细胞数 、粒 一巨噬系祖细胞 ( C F U 一 G M )数的减少 (尸 <
。 . 01 ) ,促进 c F U 一 G M 增殖并诱导其 向粒系 、 巨噬系分化 ,且其促粒系造血作用优于鳖肝醇 。
关键词 环磷酞胺 低 白细胞血症小 鼠模型 参蔑补苦复方 粒系造血程序性细胞死亡
许多接受化疗 、 放疗的肿瘤患者 , 由于治
疗的毒副作用 , 存在免疫及造血的双重抑制 。
目前临床上大多应用细胞因子 r h G M 一 c s F 、
r h G C S F 以对抗放 、 化疗药物所造成 的造血
干 、祖细胞减少及外周血粒细胞下降 ,并显示
出较好的疗效 。 然而 , 最近研究表明 ,外源性
或 内源性生长因子存在可抑制细胞毒剂引起
的程序性细胞死亡 (P C D ) 导致肿瘤细胞的持
续存活及对化疗药物的抗性 「`〕 。 因此 ,寻找安
全 、 高效 、 低毒既能调节机体免疫功能又能促
进粒系造血的中药可能具有直接的应用前
景 。 本研究运用中医 “ 辨证论治 ” 的理论并结
合中草药升白作用的现代药理研究成果 , 选
用补 肾壮阳药补骨脂 , 益气养血药人参 、 黄
蔑 , 清热燥 湿药苦参 , 并观察 了参蔑补 苦
( G A F )S 对 C y 处理小鼠外周血白细胞 、 中性
A d d r e s s
:
L u o Z h i y o n g
,
R e s e a r e h C e n t e
r o f M o l e e u l a r B i o l o g y
,
学专业
H u n a n M e d i e a l U n l v e r s i t y
,
C
罗志勇 男 , 1 9 9 C研工作 。 研究方向 : 白年毕
业
血病分
于湖南医科大学 医疗系 , 获生理 硕士学位 。 现在本校分子生
二h a n g s
物学研
h a
究中心从事教学 、 科子生物学及中西医结合治疗机理 。 参加国家自然科学基金项目 1
《中草药 》 19 9 8 年第 29 卷第 3 期
项 , 共发表论文 6 篇 。
·
1 8 1
.
粒细胞数 、 骨髓有核 细胞数和 cF u一G M 增
殖 、 分化的影响 。
1材料
1
.
1主要药物及试剂 :白参 尸 a a n xg ins eng
C
.
A
.
M ey
.吉林长白山产 , 黄蔑 A st ar g al us
m e m br a n ac eu : B ge
. 内蒙古产 , 补 骨脂 尸 5 0 -
ar l e a c o即 l ifo l i a L
. 苦参 S oP 人o ar if a v e s c e n s
A it
. 均由湖南省长沙市制药二厂传统技术开
发药号提供 ,其提取液制备见方法 2 . 1 ; 鳖肝
醇 ( b a t i o l u m , B A , m p 6 8 c 一 7 2 ℃ )江苏宜兴
市 制 药 厂 , 批 号 : 9 5 0 3 2 4 ; 环 磷 酞 胺 ( c y -
C l o p h o s p h a m id e
,
C y
,
rn p 4 9℃一 5 3 ` c ) 上 海
第十二制药 厂 ; 经基脉 ( h y d or xy 盯 e a )瑞士
lF uk
a 公司 ,使用时均以无菌生理盐水配制 。
1
·
2 动物 : B A L B c/ 近交系小鼠 ,雌雄各半 ,
日龄 60 一 80 d ,体重 18 一 2 9 , 由本校实验动
物中心提供 。
2 方法
2
.
1 中药提取 : 人参川 : 白参粗粉以 95 % 乙
醇 回流 提取 , 提取液经水浴去醇 , 加注射用
水 , 以 2 0% N a O H 调 p H 7 . 0 , G : 过滤除菌 ,
制成生药浓度为 0 . 2 9 /m L ;黄蔑 仁2〕 : 内蒙古
黄蔑饮片 , 先 用 蒸馏水浸 泡 30 m in , 后 以
1 0 。℃ 水洛提取 ,提取液以 95 % 乙醇分别调
含醇量 至 65 % 、 85 % , 冷藏过滤 , 水浴除醇 ,
加注射 用水至 1 : 1 , 以 20 % N a 0 H 调 p H
8
.
0
,
G
。 过滤除菌 ,制成生药浓度为 1 9 /m I J ;
苦参 仁3二:取苦参粗粉 , 10 C水浴提取 ,滤液浓
缩至 比重达 1 . 1~ 1 . 2 时 ,加 95 %的乙醇 2 . 5
倍量沉淀杂质 , 水浴除醇 , 加适量注射用水 ,
并以 10 % 的盐酸调 p H 5 . 6 , G : 过滤除菌 ,制
成生药浓度 0 . 5 9 /m L ; 补骨脂团 : 取压碎的
补骨脂 , 以 75 %乙醇回流提取 ,提取液 4℃冷
藏过夜 , 过滤 , 水浴除醇 , 加适量注射用水 ,
G
S过滤除菌 ,制成生药浓度 0 . 5 9 / m L 。
2
.
2 给药剂量 : 人参 、 黄 蔑 、 苦参 iP L D S。分
别为 5 、 4。 、 1 4 . 5 9 / k g 以 〕 ,剂量参考值拟参照
I_ D
: 取 1 / 5 , 1 / 1。 , 即高 、 中两个剂 量 ;补骨脂
依据 1 9 9 5 年中华人 民共和国药典 (一部 ) 人
的 用药量 (9 g )按动物体型 系数换算成小 鼠
.
1 8 2
·
的用药量 1 . 15 9 k/ g 。 以外周血白细胞升高
的百分率为指标 ,从 L 。 ( 2 , )正交试验固方差
分析结果确定 G A F S 最佳组方为 13 . 9 ( 1 :
16
: 5 : 5
.
8) 9 k/ g
。 鳖肝醇给药剂量由人和
小鼠体表面积换算得 出 。
2
.
3 低 白细胞血症小鼠模型 : 以环 磷酞胺
( C y ) 0
.
0 8 9 / k g i p
, 第 3 天可造成实验性 c y
白细胞减少模型 , 第 5 天外周血白细胞下降
至最低点 。
2
.
4 外周血白细胞和中性粒细胞总数测定 :
从小鼠尾静脉采血 ,用 白细胞稀释液稀释 , 在
血细胞计数板上计数 ; 尾静脉采血涂片 ,待凉
干后 , 经 G i e m s a 一 W r i g共“ s 染色 ,在油镜下进
行白细胞分类计数 , 中性粒细胞 总数由白细
胞总数及中性粒细胞所占百分比得出 。
2
.
5 骨髓粒 一巨噬系祖细胞 ( C F U 一 G M )集落
数及 C F U 一 G M 分化的测定 : 按常规方法制
成骨髓单细胞悬液 。 G F U 一 G M 培养体系内含
有核细胞 I X I 。丫m l , , 24 % 的马血清 , 10 %小
鼠肺条件液 , 0 . 3%琼脂 。 吸取该体系 1 m I J ,
种入 35 m m 玻璃培养皿内 ,每组 3 皿 , 置室
温 10 m i n 后 ,移入 3 7 oC 5 % C O Z 饱和湿度培
养箱培养 7 d , 原位集落染色 ,于低倍镜下计
数含 50 个细胞以上的集落总数及各型集落
数 ( C F U 一 G 、 C F U 一 M 、 C F U 一 G M ) 。
2
.
6 C F U
一
G M 自杀率的测定 6[] : 计算 C F U -
G M 自杀率 以此代表 C F U 一G M 处 于 D N A
合成期 (S 期 )的比例 :
S 期的比例一对照组集落数 一羚基脉组集落数对照组集落数
1 0 0%
2
.
7 统计处理 : 统计分析用 S P S S for M S
W IN D O W S 软件包进行数据处理 , 正交设
计 、 完全随机设计 ,统计方法均采用 F 检验 。
3 结果
3
.
1 参蔑补苦复方 ( G A F )S 对 C y 处理小鼠
外周血 白细胞 数 ( P W B C )及 中性粒细胞数
( N C )影响的动态观察 : 取健康小鼠 60 只 ,雌
雄各半 , 随机分为对照组 、 阳性对照药鳖肝醇
组 、 G A F S 组 , 各组 于 C y 处理前 l d (一 l d )
测 P W B C , 第 1 天各组均 i p C y 0 . 0 8 9 / k g 。
同时 G A FS 、 阳性对照药鳖肝醇 ( BA )组分别 过程分别类似于鳖肝醇 ,能在第 3 天至 5 天
以 1 3 . 9 、 0 . 0 4 9 / k g iP 给药 ,连续 6 d ,对照组 对抗 C y 所致 P W B C 和 N C 减少 , 并于第 5
给予等量的生理盐水 ,并于第 3 、 5 、 7 、 9 、 15 天 天至 7 天可促进其恢复 , 与对照组相比在第
从小鼠尾静脉取血测定 PW B C 、 N C 。结果 (见 7 天能显著升高 PW B C 和 N C ( p < 0 . 01 )并
表 l) 显示 : a) 对照组第 3 、 5 天 PW B C 、 N C 明 使之恢复正常 ,且在第 5天的升白 /粒效优于
显降低 (尸 < 0 . 0 1 ) ,第 5天降至最低点 ,说明 鳖肝醇 。
C y 能造成白细胞和粒细胞减少实验模型 ; b) 3 . 2 G A F S 对 C y 处理小鼠骨髓有核细胞
G A F s 对 P w B c 和 N c 的影响的动态变化 数
表 1 G A F S 对 C y 处理小鼠 P w B C 和 N C 的影响 ` 士 、 )
组别 一 l d
对照组
鳖肝醇组
G A F S 组
13
.
28士 3 . 61
1 1
.
96士 3 . 83
10
.
98士 3 , 2 4
5
.
6 8士 1 . 8 6 苍 普
6
.
0 0士 1 4 7 登 赞
7
.
8 6士 4 . 32
PWBC ( 只 10 , / L )
5 d 7 d g d
4
.
6 0士 1 . 59 粉赞 8 . 56士 2 . 54 芳 12 . 93士 4 . 00
4
.
6 8士 1 . 0 8 , 试 13 . 9 1士 3 . 6 7山盛 12 . 9 5士 3 . 7 2
6
.
64士 2 . 15 关 鑫 14 . 2 9士 3 . 3盛▲ 16 . 4 3士 10 , 8
1 1
.
2 8士 0 . 64
1 1
.
4 9士 0 . 71
1 1
.
32士 3 . 80
一 l d
对照组
鳖月干醇组
G A F S 组
4
.
33士 .0
3
.
7生士 1 .
3
.
79士 1 .
N C ( X 10 , / L )
5 d
0
.
34士 0 . 1 9苍 僻
1
.
06士 0 . 4 4
1
.
42士 0 . 2 3关 人立
1
.
4 9士 0 . 4 7供 畏
3
.
1 4士 0 . 5 2 . `
3
.
4 1士 0 . 4 5` ▲
3
.
51士 1 1 7
3
,
5 6士 1 72
3
.
44士 1 . 2 3
1
月.占飞ǐ了O口月八上O曰5行了
与对照组比较 ` p < 。 . 05 “ 尸< 0 . 01 ; 与一 l d 比较 ` 尸< 。 . 05 ” P < 。 . 01 ; 与鳖肝醇组比较△尸< 。 . 05
(B M N C )
、
C F U
一
G M 数的影 响 : 从上述 3 组
中随机取部分小鼠 ,于第 7 天处死 , 无菌取股
骨 ,计数每根股骨的 B M N c ,检测 c F u 一 G M 。
结果 (见表 2) 显示 , G A F S 可 显著增 加股骨
BM N C 和 C F U 一G M 数 ( P < 0 . 0 1 ) 。
表 2 G A r s 对 C y 处理小鼠 B M N C 和
C F U
一
G M 数的影响
组别 剂量 BM N C (又 1 0 5 /根股骨 ) CF U一 GM ( / 10 5 细胞
(g /k g ) (王士 s , n二 7 ) (王士 : , 。 = 5)
对照组 N S 9 . 22士 1 . 2 8 70士 17
鳖肝醇组 0 . 0 4 13 . 8 3士 1 . 32▲▲ 14 5士 3 9▲`
G A F S 组 13 . 9 1连. 17士 0 . 69“ 17 8士 37▲么
与对照组比较▲▲尸 < 0 . 01
3
.
3 G A F S 对 C y 处理小 鼠骨髓 C F U 一 G M
增殖状态及分化的影响 : 结果显 示 , 对照组 、
G A F S 组小鼠骨髓 C F U 一G M 处于 S 期比例
分别为 27 . 78 % 、 42 . 6 % , 提示 G A F S 对促进
C F U
一
G M 进入 S 期有一定作用 ; C F U 一 G M 集
落经原位染色 鉴定并分型 , 结果 (见表 3) 显
示 , 各组均以 C F U 一G M 集落为主 。 鳖肝醇能
促进 C F U 一 G M 向粒 系分化 , G A F S 可促进
C F U
一
G M 向粒 、 巨噬分化 。
3
.
4 G A F S 对 c y 处理小鼠骨髓有核细胞
P C D 的影响 : 取雄性小鼠 12 只 , 随机分为正
常组 ( N ) , C y 处理后 3 、 5 、 7 d 组 , C y + G A F S
《中草药》 1 9 98 年第 29 卷第 3 期
组 。 各组处理方法同上 , G A F s 组小鼠于第 7
天处死 , 取股骨制备骨髓细胞悬液 ,经 iF c ol l -
H y p a q u e ( 1
·
0 7 9 / e m
3
)密度梯度离 心分离出
骨髓有核细胞 ,参 照文献田进行 D N A 抽提及
琼脂糖凝胶电泳 , 以检测凋亡的发生 。 结果显
示 : 抽提骨髓有核细胞 D N A 并进行琼脂糖凝
胶电泳 , 各组均未见 1 80 一 20 0 碱基对及其整
数倍 D N A 特征性的梯状图谱 。
表 3 G A F S 对 C y 处理小鼠骨髓 C F U 一 G M
分化的影响 (厉士 、 , n 一 5)
组别 剂量 ( g / kg ) CF U一 G /皿 CF U一M /皿 C F U一G M /皿
对照组 N S 12士 5 1 5士 6 43士 1 4
鳖肝醇组 0 . 0 4 3 6士 1 1“ 1 9士 8 90 土 2 5
G A F S 组 1 3 . 9 26士 1 3▲ 44士 15“ △ 10 8士 37▲
与对 照组 比较 A p < 0 . 肠 ` ▲尸 < 0 . 01
与鳖肝醇组比较△ p < 。 . ()5
4 讨论
目前 , 中药治疗化 、 放疗所致的白细胞 /
粒细 胞减少症多着眼 于脾 、 肾 , 采用 补益之
法 。 近年来研究发现 ,人参皂贰川 、 黄蔑侧 、 补
骨脂 l0[ 〕均能对抗 C y 所致小鼠 P W B C 降低作
用 , 同时增加 PW B C 数 ;苦参的有效成分 之
一氧化苦参碱 ( O M T ) 与 C y 合用有协同抗癌
作用 , 使 C y 引起的白细胞降低的毒性作用明
·
1 8 3
·
显减轻仁1 1: 。
本研究结果表 明 : G AF S对 C y 致 P WC B
和 C N下 降具有对抗和 促恢复作用 , 能使
P w B C 和 N C 升高时间提前至第 5 夭 , 第 7
天达峰值 , 恢复时相缩短近 Z d ,并能防治骨
髓有核细胞数 、 粒 一巨噬系祖细胞 (C F U 一 G M )
数的减少 , 促进 C F U 一G M 的增殖并诱导其向
粒系 、 巨噬系分化 ,其促粒系造血作用优于西
药鳖肝醇 。 提示参蔑补苦复方用于对抗化 、放
疗所致粒系造血抑制有较好的疗较 ; 与化疗
药物合用 , 有助于提高化疗药物的用量 , 提高
缓解率 ,延长生存期 。
正常造血调控中的一个重要环节就是造
血生长 因子通过阻抑和诱发程序性细胞死亡
( P C D )调节血细胞的生成仁` ’ 〕 。 P e D 最典型的
生化特征是 D N A 断裂成 不同倍数的 1 80 一
20 。 碱基对的片断口 3 〕 , D N A 琼脂糖凝胶电泳
可见特征性的梯形样图谱 。 我们的观察结果
未见特征性的梯形图谱 。 而参茂补苦复方对
抗 C y 导致粒系造血抑制是否可能与 P C D 有
关尚无报道 ,值得进一步探讨 。
综上所述 , G A F S 防治 C y 所致的白细胞
/粒细胞减少症 , 其机理可能是通过促进骨髓
中白细胞 /中性粒细胞的释放及刺激 c F u -
G M 的增殖 、分化达到升白 /粒细胞作用 。 本
文为 G A F s 与化疗药物合用对抗化疗的毒副
作用 , 提供了实验依据 。
致谢 : 本研 究得到湖南 医科 大学生理室
贺石林教授及卫 生统计学室 罗建清讲 师热情
指 导 。
参 考 文 献
1 L o t e rn J
, e t a l
.
C e l l G r o w t h D i f f e r
,
1 9 9 3
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3 曹春林 . 中草药制剂汇编 . 北京 : 人 民卫 生 出版社 ,
1 9 8 3
.
19
4 阴 健 , 等 . 中药现代研究与临床应用 . 北京 : 学苑出
版社 , 1 9 9 4 . 1 9 、 3 8 5 、 4 2 9 、 5 9 9
5 金王焕 . 医用统计方法 . 上海 : 上海 医科大学出版社 ,
1 9 9 3
.
8 5
6 B y r o n J W
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B l o o d
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1 9 7 2
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7 H e r
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T r e l , d
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I m rn u n o l T o d a y
,
1 9 9 3
,
1 4
:
1 2 6
( 1 9 9 6
一
1 2
一
3 0 收稿 )
《中草药 》杂志 1 9 9 7 年第 28 卷增刊 (总第 2 97 期 )征订启事
为了扩大学术交流 , 提高新药研究水平 , 经国家科委 ( 国科发信字 〔1 9 9 7〕 2 8 1 号文 )批准 , 我们编辑出版了
《中草药 》杂志 1 9 9 7 年第 28 卷增刊 (总第 297 期 ) 。 本增刊共收入论文 92 篇 ,其中紫杉醇研究方面的论文 12
篇 , 包括紫杉醇的化学成分 、 提取工艺 、 组织培养等方面科研论文 , 并特邀国内从事紫杉醇研究的知名专家和
中青年学科带头人撰写综述文章 ,充分反映了我国从事紫杉醇研究方面的新成果 ,新进展和新动态 。 另外 , 还
有反映国内中药植化 、 药理 、 分析 、 制剂 、 药材 、 临床等方面的新理论 ,新方法 ,新成就的科研论文和有关综述性
文章 80 篇 。 本增刊选题广泛 , 内容丰富 ,学术水平较高 , 科学性较强 ,集中反映了我国中草药研究领域近 1一 2
年的新进展 。
增刊为 16 开本 ,采用激光照排 ,胶版印刷 , 1 4 页 (约 洲 万字左右 ) , 夭津市报刊增刊特许准印证 ( , 7 )第
06 1号 , 本部发行 , 定价 40 元 , 另加包装费 、 邮局附加费 5 元 。 凡订阅者请向我部索取订单 : 3。。 1 9 3 天津市鞍
山西道 3 08 号《中草药 》杂志编辑部 。
·
1 8 4
·