全 文 ：HPLC法测定市售贝母中贝母乙素含量
王　 1 ,张庆林 2 ,陈信义 1 ,唐仲雄2 ,吴祖泽2
⒇
( 1. 北京中医药大学 东直门医院 ,北京　 100700;　 2. 北京放射医学研究所 ,北京　 100850)
摘　要: 目的　为了选择贝母乙素含量较高的贝母原材料。 方法　建立了 HPLC法分析贝母原材料中贝母乙素含
量。 贝母生药粉用氨水 -95%乙醇 ( 1∶ 5)混合液提取 ,柱前用 2, 4-二硝基苯肼 ( DNPH)衍生 ,衍生化条件 50℃下反
应 30 min。分析色谱柱: Hype rsil C18 ODS2, 流动相: CH3CN-100 mmo l /L CH3COON H4 ( 41∶ 59, p H= 5. 0) ,流速为
1. 2 m L /min。 UV 375 nm检测。结果　 4种市售贝母中东贝母的贝母乙素含量最高。结论　方法灵敏 ,重现性好 ,
样品用量少 ,便于应用。
关键词: 贝母 ;贝母乙素 ;高效液相色谱
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 01 0024 02
Quantitative determination of peiminine in Bulbus Fritillaria
available on market by HPLC
WAN G Yue1 , ZHAN G Qing-lin2, CHEN Xin-yi1 , TAN G Zhong-xiong2 , WU Zu-ze2
　　 ( 1. Dong zhimen Hospita l, Beijing Univ e rsity o f TCM , Beijing 100700, China; 2. Beijing Institute o f Radia tion Medicine,
Beijing 100850, China)
Abstract: Object　 To develop a method for the quanti ta tiv e determina tion of peiminine in bullus
Fritil lariae as a guide fo r the choice of a better product on the market. Methods　 An HPLC method w as
developed. The powdered drug w as ex t racted wi th a mixed solution of ammonia-95% alcohol ( 1: 5) . The
crude peiminine obtained w as deriva tized to i ts 2, 4-dini t ro hydra zone a t pH 2. 0 and 50℃ fo r 30 min. The
HPLC condi tions w ere: Hypersil C18 column, w ith CH3CN: 100 m Mo l ammonium acetate ( 49: 51) at pH
5. 0 as the mobile phase and detected at the wave leng th o f 375 nm. Results　 Among the 4 samples
obtained from the market, F. thunbergii var. chek iangensis Hsiao et K. C. Hsia gave the highest peiminine
content. Conclusion　 The method w as highly sensi tiv e wi th good reproducibili ty and need only a small
amount o f sample, sui table fo r practical use.
Key words: Bulbus Fritillaria; peiminine; HPLC
　　近年来研究表明 ,贝母乙素具有逆转肿瘤细胞
多药耐药活性 ,可能具有临床应用前景 [1 ]。为了选择
易得且贝母乙素含量较高的贝母原材料 ,我们建立
了贝母乙素 HPLC定量分析方法 ,并对 4种市售贝
母中的贝母乙素含量进行了测定。
1　材料与方法
1. 1　仪器与样品: 液相色谱仪系统包括 Waters
600E泵 , 996二极管阵列检测器 , 2010色谱管理系
统 , 717plus自动进样器 ;分析色谱柱: Hypersi l C18
ODS2 ( Shadon, 英国 ) 5μm, 4. 6 mm× 150 mm
(大连依利特科学仪器公司预装 )。流动相: CH3 CN-
100 mmol /L CH3COONH4 ( 41∶ 59, pH= 5. 0) ,流
速为 1. 2 mL /min。
浙贝母 Frit illaria thunbergii Miq.、东贝母
F. thunbergii va r. chekiangensis Hsiao et K. C.
Hsia、 黄 炉 贝 F . delavay i Franch.、 松 贝 F.
przewalsk ii Maxim. 为市售统装 ,品种经北京中医药
大学中药鉴定室鉴定 ,符合药典标准。生药粉碎 ,过 60
目筛。贝母乙素标准品购于中国药品生物制品检定所。
1. 2　 2, 4-二硝基苯肼 ( DN PH): 分析纯 ,用 CH3CN-
H2O重结晶 2次 ,溶于乙腈中 ,浓度为 3. 0 mg /mL,
该溶液每周新鲜配制。
1. 3　贝母乙素提取溶剂:将纯氨水与 95%乙醇按
1∶ 5体积比混合 ,配成贝母乙素提取溶剂。
1. 4　样品处理及衍生化方法: 称取 0. 5 g贝母生药
粉 ,置 10 mL离心管内 ,加入 5. 0 mL提取溶剂 ,振
荡。室温放置 48 h后 ,超声提取 30 min,离心 ,吸取
0. 25 mL上清液置小烧瓶中 ,旋转蒸干。衍生化方法
为在上述提取物中加入 10μL 2. 0 mol /L盐酸和
100μL DN PH溶液 ( 3. 0 mg /mL) ,混合均匀后在
·24· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 1期
⒇ 收稿日期: 2000-02-18作者简介:王　 ( 1973-) ,女 ,北京人 ,硕士 ,研究方向为贝母乙素逆转肿瘤细胞多药耐药性。 现就职于 Procter & Gamble ( China)。
Tel: ( 010) 62780088
50℃下反应 30 min,取 5μL进行分析。
2　结果
2. 1　最大吸收波长的选择:吸取 0. 2 mL贝母乙素
标准溶液 ( 190μg /mL) ,衍生化后 ,注入色谱系统 ,
用二极管阵列检测器于 190～ 450 nm波长范围进
行扫描 ,结果表明 ,最大吸收波长为 375 nm,故选作
测定波长。
2. 2　色谱图比较:见图 1。
a-空白对照　　 b-标准品　　 c-贝母样品
图 1　贝母乙素 2, 4-二硝基苯腙色谱分离图
2. 3　标准曲线: 分别吸取 0. 095, 0. 19, 0. 95, 1. 9,
9. 5, 19, 38, 57, 76μg 贝母乙素标准溶液置小烧瓶
中 ,旋转蒸发至干 ,衍生化后分析。测定峰面积值 ,同
一浓度测定 5次 ,空白对照组加 10μL 2. 0 mol /L
盐酸和 100μL DNPH溶液 ,操作步骤同前。结果表
明 ,贝母乙素在 0. 095～ 76μg范围内呈线性关系 ,
标准曲线方程为 Y= 8. 49X - 0. 0487, r= 0. 996 6;
式中 Y为峰面积值 , X为贝母乙素量 (μg )。
2. 4　精密度: 吸取含 9. 5μg和 38μg贝母乙素的
标准溶液 ,按标准曲线项下操作。日内精密度分别为
RSD= 9. 2% , RSD= 8. 4% ; 日间精密度分别为
RSD= 3. 6% , RSD= 3. 9% (n= 4)。
2. 5　回收率: 称取 0. 5 g两组浙贝母生药粉 ,在其
中一组内加入贝母乙素 1. 01 mg ,另一组设定为对
照样品 ,两组按测定方法项下操作。平均回收率为
93. 9% , RSD= 8. 0% (n= 3)。
2. 6　样品测定结果: 4种市售贝母中贝母乙素含量
测定结果见表 1。
3　讨论
表 1　 4种市售贝母中贝母乙素含量 ( n= 3)
贝母品种 贝母乙素含量 (% ) R SD (% )
浙贝母 0. 016 8± 0. 000 9 5. 2
东贝母 0. 040 3± 0. 001 7 4. 2
黄炉贝 0. 002 1± 0. 000 2 9. 5
松　贝 0. 001 8± 0. 000 2 8. 5
　　贝母乙素属甾体生物碱 ,其特异性 UV吸收峰
为 290 nm。由于吸收强度较弱 ,无法满足样品中贝
母乙素含量分析。因贝母乙素结构中含有酮基 ,很容
易与 2, 4-二硝基苯肼反应 ,选择 UV 375 nm测定贝
母乙素苯腙衍生物能满足样品中贝母乙素定量分析
要求。色谱图表明贝母乙素 2, 4-二硝基苯腙色谱峰
能与其它杂质峰良好分离 ,不受其它色谱峰的干扰。
已有文献报道甾体生物碱的其它分析方法 ,如
毛细管气相色谱法、羟基柱前衍生化液相色谱法
等 [2, 3 ]。本文报道了用 2, 4-二硝基苯肼柱前衍生化
HPLC定量分析含酮基甾体生物碱的方法 ,可不受
样品中其它非酮基生物碱的干扰。 本研究测得贝母
乙素含量与文献报道基本相同 [4, 5 ]。 该方法具有灵
敏、重复性好、样品用量少和便于应用等优点。
开展对市售贝母中贝母乙素的含量测定 ,选择
易得且贝母乙素含量较高的品种 ,是贝母作为肿瘤-
白血病细胞多药耐药逆转剂的研究基础 ,可为今后
选择原材料提供依据。本文研究结果表明 ,浙贝母、
东贝母、黄炉贝和松贝 4个品种中 ,东贝母中贝母乙
素含量最高 ,提示该种贝母有可能作为提取贝母乙
素的药物来源。 贝母种类繁多 ,分布广泛 [6 ] ,有待进
一步研究。
参考文献:
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[5 ]　李　萍 ,徐国钧 ,徐珞珊 . 贝母中的贝母碱、去氢贝母碱含量测
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