全 文 ：出版社 , 1980: 39
6　杜泽乡 . Ch enia, Vol. 3～ 4: 123
7　林齐维 . 雷公山自然保护区科学考察集 . 贵阳:贵州人民大众出
版社 , 1989: 342
8　赵遵田 ,曹　同 . 山东苔藓植物志 . 济南:山东科技出版社 ,
1998: 15
( 1999-11-24收稿 )
杭菊花花瓣组织培养
南京农业大学园艺系 ( 210095)　　王康才 　张雪琼　茅毓英
摘　要　为了实现杭菊花优良种苗的有效快繁 ,用杭菊花始花期刚露白花蕾的花瓣为材料 ,按不同接种方向接种
于不同激素配比的培养基上诱导分化。 结果表明: 以 M S+ N AA 0. 2 mg / L+ KT 2 mg /L培养基较好 ,培养 40 d
后芽分化率为 72. 2% ～ 81. 8% ,不同的 KT浓度与不同接种方向对花瓣组培形成不定芽有显著影响 ;不同品种类
型间花瓣组培结果也有明显差异。
关键词　杭菊花　花瓣　组织培养
　　杭菊花是我国传统中药之一 ,具有散风清热 ,平
肝明目之功效 ,主要用于风热感冒、头痛眩晕、目赤
肿痛、眼目昏花等病痛。随着祖国中医药事业的不断
发展 ,各种开发产品如菊花茶、菊花酒不断推出 ,菊
花用量急剧增加。但目前生产上存在品种混乱、退化
等现象 ,因此良种选育工作势在必行。菊花多为无性
繁殖 ,这对新品种快速繁殖有一定限制。本试验利用
杭菊花花瓣为材料进行组培实验 ,其目的是为了找
到一种繁殖系数和芽分化率高的快速繁殖方法。
1　材料与方法
1. 1　材料:取自于南京农业大学校内试验基地的杭
菊花 (大白菊、小白菊、黄菊 )始花期花蕾的花瓣。
1. 2　培养条件: 以 M S培养基为基本培养基 ,光照
强度为 2 000 lx ,光照时间 12 h ,昼夜培养温度
( 25± 2)℃。
1. 3　方法
1. 3. 1　不同 K T浓度处理: 将小白菊的花瓣经过
灭菌消毒处理后 ,在 NAA浓度相同 K T浓度不同
的培养基 MS+ NAA 0. 2 mg /L+ KT 1 mg /L和
MS+ NAA 0. 2 mg /L+ K T 2 mg /L进行培养。
1. 3. 2　正反接种方向的结果:为了确定花瓣不同接
种方向对芽诱导的影响 ,将小白菊灭菌花瓣用正反
两种方法 (即将靠近花瓣基部的切面插入培养基中
叫正接 ,反之 ,将靠近花瓣顶端的切面插入培养基中
叫反接 )。 接种在 MS+ NAA 0. 2 mg /L + KT 2
mg /L培养基上培养 , 3次重复。
1. 3. 3　不同品种类型间差异:将小白菊、大白菊和
黄菊 3个品种的无菌花瓣接种于 MS+ NAA 0. 2
mg /L+ KT 2 mg /L培养基上培养 , 3次重复。
1. 3. 4　沙培花瓣组织苗的观察:观察记录愈伤组织
起动期、愈伤组织大小、质地、色泽、发芽块数等。
2　结果
2. 1　 K T浓度对愈伤组织及芽形成的影响: 从表 1
可知 , K T不同浓度对杭菊的愈伤组织形成率及大
小差异不明显 (P > 0. 05)。但从表 2可知 , KT浓
度对愈伤组织芽分化的影响差异明显 ,在 MS+
NAA 0. 2 mg /L + K T 2 mg /L上愈伤组织诱芽率
在培养 20 d后就达 80. 8% ,而培养基 MS+ NAA
0. 2 mg /L+ KT 1 mg /L仅为 34. 4% ,即使培养 40
d后也只有 42. 3% 。由此可见 ,在生长素浓度相同
表 1　KT浓度对愈伤组织形成的影响
处理
M S( mg /L)
K T　N AA 外植体
培养 20 d后
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
大小 ( cm)
愈伤组织
形成率 (% )
培养 40 d后
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
大小 ( cm)
愈伤组织
形成率 (% )
Ⅰ 1　 0. 2 26 23 0. 2△ 0. 7 88. 5 23 0. 4△ 1 88. 5
Ⅱ 2　 0. 2 26 22 0. 1△ 0. 8 84. 6 26 0. 3△ 1 100
　　　　△供试品种为小白菊 ;正接
·628· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 8期
Address: Wang Kangcai , Depar tment of Horticul tu re, Nan jing Ag ricul tu re University, Nan jing王康才　 1985年毕业于吉林农业大学中药材学院 ,分配到南京农业大学任教 ,在工作期间攻读硕士学位 ,现任中药材教研室副主任 ,副教授。 在完成《药用植物栽培学》等课程教学任务同时 ,进行科研和中药材生产指导工作 ,主要研究方向为薄荷、菊花、丹参、太子参等药材的栽培技术、栽培生理、组织培养。近年来获江苏省科技进步三等奖等奖励。
的条件下 ,较高 K T浓度对芽诱导有利 ,以 2 mg /L
为较适浓度。
2. 2　花瓣不同接种方向对不定芽形成的影响: 由表
3可知 ,正接、反接两种方法的愈伤组织诱导率相
同 ,但是反接的花瓣愈伤组织芽分化率为 0,而正接
的花瓣愈伤组织芽分化率为 80. 8% 。以上两者之间
有极显著差异 (P < 0. 01) (表 3)。 培养过程中还发
现反接的花瓣愈伤组织有向下生长的趋势 ,但不能
出芽。
2. 3　不同品种杭菊愈伤组织及芽分化的关系:从表
表 2　 KT浓度对愈伤组织芽分化的影响
处理
M S( mg /L)
K T　N AA 外植体
培养 20 d后
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
诱芽数
芽分化率
(% )
培养 40 d后
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
诱芽数
芽分化率
(% )
Ⅰ 1　 0. 2 26 23 9 34. 6 23 11 42. 3
Ⅱ 2　 0. 2 26 22 21 80. 8 26 22 81. 8
表 3　不同接种方向对芽诱导的影响
接种方向 外植体数
培养 20 d后
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
大小 ( cm ) 发芽块数
发芽分率
(% )
培养 40 d后
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
大小 ( cm) 发芽块数
发芽分率
(% )
正接 26 22 0. 1△ 0. 8 21 80. 8 26 0. 3△ 1 22 81. 8
反接 26 22 0. 1△ 2. 3 0 0 22 0. 2△ 0. 4 0 0
　　　　△供试品种为小白菊 ;　培养基: MS+ N AA 0. 2 mg /L + KT 2 mg /L
4可见 ,不同品种杭菊培养 20 d后愈伤组织诱芽率
有明显差别。小白菊的诱芽率均达 80% 以上 ,而黄
菊的诱芽率仅为 17. 4% ,大白菊诱芽率为 66. 7% ,
同时可见不同花色品种间不定芽形成能力有强弱 ,
白色 (大白菊、小白菊 )明显强于黄色 (黄菊 ) ,而小白
菊的芽分化率又高于大白菊。
表 4　杭菊不同品种类型愈伤组织与芽诱导结果
品种 外植体数
培养 20 d后
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
发芽数
诱芽率
(% )
培养 40 d后
愈伤组织
形成块数
愈伤组织
发芽数
诱芽率
(% )
大白菊 26 23 17 66. 7 23 19 72. 2
黄　菊 26 20 5 17. 4 20 6 21. 1
小白菊 26 22 21 80. 8 26 22 81. 8
　　　　培养基为　M S+ N AA 0. 2 mg /L+ KT 2 mg /L;正接
3　讨论
3. 1　通过试验及相关资料可知 ,菊花花瓣的适宜培
养期为始花期花蕾 ,形成的愈伤组织块大 ,成苗率
高。这是因为始花期花蕾中所含营养物质丰富 ,花蕾
直径以 1. 5～ 2. 0 cm刚露白时为佳 ,外植体长度以
0. 5～ 0. 7 cm为好 [ 1]。 培养基最适配比为 MS+
NAA 0. 2 mg /L+ KT 2 mg /L。
3. 2　激素浓度对花瓣愈伤组织及芽诱导的影响取
决于生长素与细胞分裂素之比。 因为花瓣组织内缺
乏内源激素 ,当培养基中加入的外源激素 NAA /
KT值低时就能促使不定芽分化 ,当外源激素不能
满足芽分化即 NAA /K T 比例高则形成愈伤组
织 [2 ]。本试验的结果与该结论相符。
3. 3　不同花色对外植体产生的不定芽数影响很大 ,
不定芽形成强弱顺序为白色> 黄色> 红色> 粉红
色 ,这可能是由于过氧化物同功酶不同而引起的 ,因
在菊花几个重要性状的酶谱表达中 ,花色差异最
大 [2 ] ;而过氧化物同功酶在植物组织生理功能之一
是具有吲哚乙酸氧化酶的作用 ,它可控制不定芽形
成和生长发育 [3～ 6 ]。花瓣接种方向不同而产生明显
的结果差异 ,正向接种芽的分化率高于反向接种的
原因还有待于探讨。
3. 4　通过对花瓣组培苗的沙培观察 ,一般花瓣组培
苗不易成活 ,因此成苗率偏低 ,而本试验组培苗沙培
成苗率高达 90% 以上 ,且菊苗叶色正常 ,叶形裂缺
深浅与供试品种土培苗无明显差别 ,植株生长旺盛 ,
但就其染色体是否丢失或加倍而导致药效改变 ,因
实验条件限制 ,有待以后进一步试验。 从实验看出 ,
在相同的激素水平条件下 ,不同菊花品种愈伤组织
的诱导率和愈伤组织块大小不同 ;同一菊花品种在
生长素相同 ,而细胞分裂素不同的条件下 ,虽然愈伤
组织诱导率相同 ,但愈伤组织诱芽率则以高水平的
KT高 ,所以在菊花组培中 ,要根据不同品种采用不
同激素浓度。
·629·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 8期
参 考 文 献
1　刘兴玉 . 西南农业大学学报 , 1990, 12( 2): 203
2　侯喜林 . 南京农业大学学报 , 1990, 13( 3): 42
3　李招文 . 园艺学报 , 1989, 16( 3): 233
4　裘文达 ,李曙轩 . 浙江农业大学学报 , 1983, 9( 3): 243
5　李　英 ,黄建华 ,董彩霞 ,等 . 河南职技师院学报 , 1992, 20( 1): 37
6　钱秀苇 .上海农学院学报 , 1996, 14( 3): 201
( 1999-06-29收稿 )
沙苑子及其伪品的可溶性蛋白质电泳鉴别
河北省职工医学院 (保定 071000)　　马晓莉 　周文英
摘　要　对沙苑子及其伪品进行了可溶性蛋白质电泳鉴别 ,同时比较了两种蛋白质染色剂考马斯亮蓝 R-250和
G-250的染色效果。
关键词　沙苑子　伪品　电泳鉴别
　　沙苑子为少常用中药 ,药典收载的正品为豆科
植物扁茎黄芪 Astragalus complanatus R. Br. 的干
燥成熟种子。由于同属植物种子性状相似 ,沙苑子的
异物同名品甚多 ,各地区的使用情况也不尽相同 ,我
们用连续性非解离型聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 ,对
沙苑子及其伪品进行了分析 ,所得蛋白电泳图谱有
显著差异 ,可作为鉴别依据 ,同时比较了两种蛋白质
染色剂考马斯亮蓝 R-250和 G-250的染色效果。
1　实验材料、仪器与药品
1. 1　实验材料
沙 苑 子: 豆 科 植 物扁 茎 黄 芪 Astragalus
complanatus R. Br.种子。
紫云英: 豆科植物紫云英 A. sinicus L.种子。
华黄芪:豆科植物华黄芪 A. chinensis L. 的种
子。
沙大旺: 豆科植物直立黄芪 A. adsurgens Pall
的种子。
以上材料由保定市药检所提供经张建英鉴定。
1. 2　仪器: DYY-Ⅲ 2型稳压稳流电泳仪 (北京市六
一仪器厂 ) ,圆盘电泳槽 (北京市六一仪器厂 ) , LD5-
10型离心机 (北京医用离心机厂 )。
1. 3　药品:丙烯酰胺为化学纯 ,双丙烯酰胺为进口
原装 ,四甲基乙二胺为生化试剂 ,考马斯亮蓝 R-250
和 G-250为进口分装 ,其余药品均为分析纯。
2　实验方法
2. 1　试剂的配制及凝胶的制备:见文献 [ 1, 2] ,凝胶浓
度为 6. 3% 。
2. 2　样品液的制备: 取实验材料 0. 5 g ,加电极缓
冲液 5 mL研磨成匀浆 ,静置 30 min ,移至离心管
中 ,按 3 000 r /min离心 15 min,取上清液 0. 5 mL
加入 0. 05% 溴酚蓝示踪指示剂 1～ 2滴 ,混匀备
用。
2. 3　电泳:调节电流按 1毫安 /管进行电泳 , 2 min
后按 3. 5毫安 /管进行电泳 ,待示踪指示剂行至距
末端 0. 5 cm时 ,关闭电源 ,全程约 40 min。
2. 4　染色:考马斯亮蓝 R-250染色法:将胶条置固
定液中固定 10 min,再置 90℃染色液中染色 10
min,最后用洗脱液反复洗脱 ,至背景清晰为止。 考
马斯亮蓝 G-250染色法: 将胶条置染色液中 ,室温
条件下染色 30 min即得。
3　结果与讨论
3. 1　沙苑子及其伪品的蛋白质电泳图谱 (图 1)各
不相同 ,有显著差别 ,通过多次重复实验 ,重现性好 ,
结果可靠 ,可作为鉴别依据。
1, 1′-沙苑子　 2, 2′-紫云英　 3, 3′-华黄芪　 4, 4′-沙大
旺　 1～ 4-用考马斯亮蓝 G-250染色所得图谱　 1′～ 4′-
用考马斯亮蓝 R-250染色所得图谱
图 1　沙苑子及其伪品的蛋白电泳图谱
3. 2　我们按颜色的深浅将谱带分为 2级 ,色深者为
Ⅰ级 ,色浅者为Ⅱ级。同种实验材料在相同条件下 ,
分别用两种蛋白质染色剂考马斯亮蓝 R-250和 G-
250染色 ,所得电泳图谱基本相同 ,只是一些细带、
弱带略有差异 ,如沙苑子和华黄芪用 G-250染色所
得图谱与用 R-250染色所得图谱相比 ,少了一些弱
·630· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 8期
Address: Ma Xiaoli, Hebei Medical Col leg e of Continuing Education , Baoding