全 文 ：·药理实验与临床观察·
葛根异黄酮对去卵巢大鼠骨矿密度和骨强度的影响
郑高利 1 ,张信岳 1 ,方晓林 2 ,彭小英 1 ,龚维桂 1 ,郑筱祥 3
　 ( 1. 浙江省医学科学院药物研究所 ,浙江 杭州　 310013;　 2. 浙江省老年医学研究所 ,浙江 杭州　 310013;
　 3. 浙江大学生物医学工程与仪器科学学院 ,浙江 杭州　 310027)
摘　要: 目的　研究葛根总异黄酮 ( T IP)对雌激素缺乏引起的骨质疏松症的防治作用。 方法　 10月龄 SD大鼠 ,手
术切除双侧卵巢后 7 d,每天 ig T IP 100和 20 mg /kg ,并设假手术组 ( Sham)、模型对照组 ( OVX )和尼尔雌醇阳性组
( E3 )。在给药 4和 7个月时 ,测定大鼠全身骨矿总量 ( BMC)和骨矿密度 ( BM D)及骨生物力学强度等。结果　 ( 1)和
OVX组相比 , T IP大剂量组在给药 4个月时 BMC和 BMD分别提高 14. 6%和 12. 1% , 7个月时分别提高 6. 8%和
14. 2% ;小剂量组 4个月时分别提高 7. 8%和 6. 9% , 7个月时分别提高 8. 6%和 14. 9%。 ( 2) T IP大、小剂量组股骨
相对体积质量分别提高 3. 8%和 3. 4% ;胫骨相对体积质量分别提高 6. 8%和 6. 3% ;股骨 Ca盐密度均提高 15%以
上。 ( 3) T IP大、小剂量组股骨最大负荷分别提高 16. 1%和 9. 1% ;结构强度分别提高 19. 4%和 12. 5%。 ( 4) T IP使
大鼠子宫重量明显增加。 结论　 T IP对去卵巢引起的大鼠骨质疏松症具有明显的防治作用 ,这种作用可能和它的
弱雌激素样活性有关。
关键词: 葛根 ;异黄酮 ;骨质疏松症 ;雌激素样作用 ;骨矿密度
中图分类号: 285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 05 0422 04
Effects of total isoflavones of Puerar ia DC. on bone mineral dens ity and
bone strength in ovariectomized rats
ZHENG Gao-li1 , ZHANG Xin-yue1 , FANG Xiao-lin2 , PENG Xiao-ying1 ,
GONG Wei-gui1 , ZHENG Xiao-xiang3
　　 ( 1. Institute o f Ma teria Medica, Zhejiang Academy o f Medical Sciences, Hang zhou Zhejiang 310013, China; 2. Zhejiang
Geria tric Institute, Hang zhou Zh ejiang 310013, China; 3. Colleg e o f Biomedical Engineering and Inst rument Science, Zhe-
jiang Univ ersity, Hang zhou Zh ejiang 310027, China)
Abstract: Object　 To observ e the pro tectiv e effect o f to tal i so flav ones of pueraria DC. ( TIP) on os-
teopo rosis induced by est rog en-deficient rat. Methods　 42 10-month old female SD rats w ere bilaterally o-
va riectomized and 10 animals w ere made sham-operation ( Sham ) under anesthesia. Af ter 7 d, the ova riec-
tomized ra ts w ere div ided into 4 g roups: unt rea ted contro l ( OVX) g roup (n= 12) ; 2 treated g roups (n= 10
each ) , one wi th 100 mg /kg TIP ig and the other with 20 mg /kg T IP ig , and a niylest ro l g roup ( E3 ) (n=
10) . The to tal body bone minera l content ( BMC) , and bone mineral density ( BMD) and bone biodynamics
w ere detected a t 4th and 7th month. Results　 1. Compa red wi th OVX group, BMC and BMD in TIP 100
mg /kg g roup w ere increased by 14. 6% and 12. 1% at 4th month, by 6. 8% and 14. 2% a t 7th month,
w hi le in TIP 20 mg /kg g roup by 7. 8% and 6. 9% a t 4th month, by 8. 6% and 14. 9% at 7th month. 2.
The densities o f femur in TIP 100 and 20 mg /kg groups w ere respectively increased by 3. 8% and 3. 4% ,
w hi le tho se o f tibia by 6. 8% and 6. 3% than tha t o f OVX control group. The Ca contents w ere increased
by mo re than 15% in the T IP treated g roups. 3. The maximum load and st ructural st reng th of femur w ere
increased by 16. 1% and 19. 4% in TIP 100 mg /kg g roup and 9. 1% and 12. 5% in TIP 20 mg /kg g roup
than OVX contro l g roup. These pa rameters in tibia w ere also improved. 4. U terine w eigh ts bo th in TIP
100 and 20 mg /kg g roups w ere almost increased by one-fo ld than OVX group. Conclusion　 TIP can pro-
tect o steopo rosis induced by ovariectomized rats and these ef fect may be at t ributable to i ts w eek est ro gen-
like action.
Key words: Pueraria lobala L. ; iso flavone; osteoporo sis; estrog en-like action; bone mineral densi ty
·422· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 5期
收稿日期: 2000-12-04基金项目:浙江省自然科学基金 No. 399037作者简介:郑高利 ( 1963-) ,男 ,浙江人。 1987年毕业于原上海医科大学药学院 , 1997年获原浙江医科大学医学硕士学位 ,现为浙江省医学科学院药物研究所副研究员 ,并在浙江大学生物医学工程与仪器科学学院攻读博士学位 (在职 )。主要从事骨代谢相关的药理学研究和新药开发。 Tel: ( 0571) 8076765
( BMD)
　　绝经后骨质疏松症 ( O P)可能和遗传、饮食习
惯、户外活动减少及内分泌改变等有关 ,但最根本的
原因是雌激素水平下降 [1 ] ,临床上也以雌激素替代
疗法 ( ERT)的疗效最肯定 ,但由于 ERT有增加生
殖系统肿瘤和血栓形成等危险而难以被广泛接受 ,
即使和孕激素合用也不能完全消除这种危险 [ 2]。近
年研究发现一些植物雌激素有着和天然雌激素相似
的抗 O P作用 ,但没有肿瘤和血栓之虞 ,其中主要的
食物异黄酮—— 大豆异黄酮在防治 O P上已积累了
大量资料 ,得到了肯定的结果 [3～ 5 ]。但大豆中异黄酮
含量甚微 ( 0. 1% ～ 0. 3% ) ,而中药葛根总异黄酮含
量可达到 8%以上 ,是大豆的几十甚至上百倍 [ 6] ,提
取和纯化十分方便 ,但它对 O P的防治作用迄今未
见任何报道。本研究以去卵巢大鼠模拟人绝经后
O P,观察葛根总异黄酮 ( T IP )对雌激素缺乏引起
O P的防治作用。
1　材料
1. 1　葛根异黄酮 ( T IP):野葛 ,购自浙江省药材公
司 , 85%乙醇冷浸提取 ,大孔树脂纯化 ,紫外分光光
度法测定含总异黄酮 630 mg /g干重。 使用时以
0. 5% CMC配成 10和 2 mg /mL(以总异黄酮计 )的
混悬液。
1. 2　尼尔雌醇 ( E3 ):片剂 ,北京四环制药厂生产 ,批
号: 960528, 在碾钵中碾细后以 0. 5% CMC溶液配
制成 0. 05 mg /m L的混悬液。
1. 3　动物: SD大鼠 ,雌性 , 10月龄 ,体重 320～ 380
g ,由浙江省实验动物中心提供。动物饲养合格证:
浙实验动物准字 ( 96) 002。
1. 4　饲料: 标准大鼠颗粒饲料 ,含蛋白质 20% ,含
钙 0. 6% ,由浙江省实验动物中心提供。
1. 5　双能骨密度仪 ( DEXA): 美国 LUNAR公司生
产 ,型号: EX PERT-XL。
1. 6　电子万能试验仪:型号 CSS-44100,精度 1 N,
长春试验仪厂生产。
2　实验方法
2. 1　分组及给药: 52只大鼠 ,其中 42只 ip 40 mg /
kg戊巴比妥钠麻醉后 ,按常规方法切除双侧卵巢 ,
余 10只大鼠做相同的手术操作 ,但不切除卵巢 ,作
为假手术组 ( Sham)。 将切除卵巢的大鼠分为 4组 ,
在手术后 1周开始 ig给药 , Sham和 OVX组每天给
予 0. 5% CMC溶液 ; E3组给予尼尔雌醇 0. 5 mg /
kg ,每周 2次 (周一和周四 ) , T IP大、小剂量组分别
每天 ig TIP 100和 20 mg /kg ,给药体积均为 1. 0
mL /100 g体重 ,连续 7个月。 饲养室温度 20℃～
26℃ ,湿度 50% ～ 70% ,喂以普通饲料 ,自由饮水。
每周称一次体重并按新体重调整给药体积。
2. 2　骨密度测定: 于给药 4和 7个月时 ,大鼠 35
mg /kg 戊巴比妥钠 ip麻醉后 ,在 DEXA上以前臂
骨密度测量软件测定大鼠全身骨矿含量 ( BMC)和
全身骨矿密度 ( BMD)。仪器参数: 134 kV, 1. 0 mA,
扫描长度 26 cm,宽度 14. 4 cm。
2. 3　股骨相对体积质量测定: 最后一次给药 1 d
后 ,处死大鼠 ,分离一侧股骨和胫骨 ,剔尽附着的肌
肉和结缔组织 ,于电子天平上称湿重后 ,在自制的排
水法体积测定装置上测定其体积 ,计算其湿相对体
积质量。
2. 4　骨生物力学性能测定:采用电子万能试验仪做
股骨和胫骨的三点弯曲试验 ,仪器参数: 加载速度 6
mm /min,最大负荷 200 N ,跨距 20 mm,描记负荷-
变形曲线 ,计算最大负荷及结构强度 (引起 1 mm变
形需要的负荷 ,相当于曲线上的斜率 )。
2. 5　股骨灰相对体积质量:测定力学指标后 ,收集
残断的股骨 ,马弗炉灰化后称灰重 ,灰重和体积之比
即股骨灰相对体积质量。
2. 6　股骨钙含量和钙盐密度测定:将骨灰溶解在
40 mL ( 6 mo l /L)盐酸中 ,并以 EDTA络合滴定法 ,
钙红作指示剂 ,测定钙含量 ,并计算出单位体积 Ca
含量 (钙盐密度 )。
2. 7　子宫重量系数测定: 解剖取出子宫 ,轻挤出子
宫腔内的液体 ,于电子天平上称重 ,它和体重之比即
为子宫重量系数。
2. 8　统计方法:所有计量结果均表示为 x± s ,并进
行组间 t检验。
3　　实验结果
3. 1　 TIP对去卵巢大鼠 BMC和 BMD的影响: 大
鼠在切除卵巢后 4和 7个月全身 BMC和 BMD显
著降低 ,尤以 BMD为甚。 T IP 100和 20 mg /kg连
续 ig 4和 7个月 ,显著提高 BMC和 BMD。 4个月
时 , T IP 100 mg /kg 组 BMC和 BMD分别提高
14. 6%和 12. 1% , TIP 20 mg /kg组分别提高 7. 8%
和 6. 9% ;在 7个月时 , T IP 100 mg /kg组分别提高
6. 8%和 14. 2% , TIP 20 mg /kg组分别提高 8. 6%
和 14. 9% 。而 E3组 BMD在 4和 7个月时均显著提
高 , BMC仅在 4个月时显著提高 ,但在 7个月时没
·423·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 5期
有明显改善 (表 1)。 3. 2　 TIP对大鼠股骨相对体积质量及钙盐密度的
表 1　 TIP对去卵巢大鼠 BMC和 BMD的影响
组别 剂量
( mg /kg)
动物数
(只 )
4个月
BM C(g ) BMD(g /cm2)
7个月
BM C(g ) BMD(g /cm2)
Sh am - 10 　 5. 32± 0. 51 　　 0. 278 2± 0. 014 9 　 5. 68± 0. 45 　　 0. 281 6± 0. 017 6
OVX - 12 4. 90± 0. 29# 0. 249 5± 0. 016 8# # 5. 37± 0. 24 0. 256 9± 0. 008 8# #
E3 1. 0 10 5. 32± 0. 40* 0. 270 0± 0. 022 1* 5. 21± 0. 37 0. 269 9± 0. 016 8*
TIP 100 10 5. 62± 0. 77* 0. 279 7± 0. 026 7* * 5. 73± 0. 52* 0. 293 1± 0. 016 4* *
20 10 5. 28± 0. 59 0. 266 7± 0. 018 3* 5. 83± 0. 43* * 0. 295 1+ 0. 015 6* *
　　　　与 OVX组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01;　与 Sham组比较: # P < 0. 05　# # P < 0. 01
影响:和 Sham组相比 ,去卵巢后大鼠股骨相对体积
质量降低了 4. 49% ,而钙元素含量降低更多
( - 11. 3% )。TIP大、小剂量组使股骨相对体积质量
分别增加 3. 8%和 3. 4% ,骨灰相对体积质量分别增
加 11. 1%和 7. 8% 。同时 ,股骨钙盐密度得到完全恢
复 ,甚至比 Sham组还高。 E3组有类似作用 ,但增加
的幅度比 TIP大剂量组略小 (表 2)。
3. 3　 TIP对去卵巢大鼠股骨和胫骨生物力学性能
的影响:切除卵巢 7个月后 ,大鼠股骨的生物力学性
能显著下降 ,股骨的最大负荷和结构强度分别下降
了 15. 0%和 17. 3% ,胫骨的最大负荷也下降了
13. 5% 。TIP显著改善骨生物力学指标 ,大剂量组股
骨最大负荷与强度分别提高 16. 1%和 19. 4% ,小剂
量组分别提高 9. 1%和 12. 5% 。胫骨的力学指标也
得到恢复 ,结构强度甚至超过 Sham组。 E3组在最
大负荷没有得到改善 ,但结构强度明显提高 (表 3)。
表 2　 TIP对去卵巢大鼠股骨、骨灰和钙盐相对体积
质量的影响 ( mg /mm3 )
组别 剂量
( mg /k g)
动物数
(只 )
相对体积质量
股骨 骨灰 钙盐
Sh am - 10 1 560± 41 720± 43 256± 16
OVX - 12 1 490± 32# # 655± 46# # 227± 14# #
E3 1. 0 10 1 543± 26* * 686± 46 259± 15* *
TIP 100 10 1 547± 57* * 728± 50* 261± 23* *
20 10 1 541± 35* * 706± 36* 264± 10* *
　　和 OVX组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
和 Sh am组比较: # P < 0. 05　# # P < 0. 01
表 3　 TIP对去卵巢大鼠股骨和胫骨生物力学性能的影响
组别 剂量
( mg /kg)
动物数
(只 )
股骨最大负荷
( N)
股骨结构强度
( N /mm)
胫骨最大负荷
( N)
胫骨结构强度
( N /mm)
Sh am - 10 　　 112. 9± 13. 3 　　 300± 24 　　　 76. 5± 3. 8 　　　 118. 1± 26. 6
OVX - 12 95. 9± 10. 7# # 248± 15# # 66. 2± 10. 3# 107. 9± 22. 4
E3 1. 0 10 98. 9± 18. 1 284± 26* * 66. 1± 19. 4 123. 8± 25. 3
TIP 100 10 111. 3± 14. 3* * 296± 28* * 74. 8± 14. 7 134. 0± 28. 0*
20 10 104. 6± 11. 3* 279± 25* * 71. 7± 11. 9 134. 4± 28. 3* *
　　　　与 OVX组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01;　与 Sham组比较: # P < 0. 05　# # P < 0. 01
3. 4　 TIP对大鼠体重和子宫重量的影响: T IP大剂
量组和雌激素一样引起大鼠体重明显下降 ,小剂量
组不影响体重。切除卵巢后大鼠子宫明显萎缩 ,重量
显著减轻 ,仅为 Sham组的 1 /3左右。E3组则能使子
宫重量完全恢复至 Sham组水平。 TIP也能显著增
加子宫重量 ,大、小剂量组使子宫重量系数均提高 1
倍左右 ,但比 E3组低得多 (表 4)。
4　讨论
表 4　 TIP对去卵巢大鼠体重和子宫重量的影响
组别 剂量
( mg /kg)
动物数
(只 )
实验开始体重
( g)
实验结束体重
( g)
子宫重量
( mg)
子宫重量系数
( mg /g)
Sh am - 10 345± 28 　　　 405± 46 566± 129 　　　 1. 42± 0. 34
OVX - 12 347± 29 413± 41 176± 40# # 0. 42± 0. 08# #
E3 1. 0 10 347± 32 349± 27* * 487± 168 1. 40± 0. 47* *
TIP 100 10 344± 38 365± 50* 293± 67* * 0. 82± 0. 24* *
20 10 348± 47 409± 50 310± 170* * 0. 78± 0. 47*
　　　　与 OVX组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01;　与 Sham组比较: # P < 0. 05　# # P < 0. 01
　　传统中医认为葛根属解表药 ,功能解肌退热、生
津止渴、升阳止泻等。其主要有效成分异黄酮具有活
血化瘀作用 ,能扩张血管、抑制血小板聚集和降低血
压等 [7, 8 ]。 TIP包括葛根素、大豆苷、金雀异黄素、拟
雌内酯 ( coumest rol)和芒柄花黄素等 ,又以前二者
为主 [9 ]。文献报道大豆苷或苷元具有弱的雌激素样
·424· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 5期
作用 ,我们的研究也表明葛根素能增加幼年和去卵
巢小鼠子宫重量 ,表现一定的雌激素样活性 (另文
报道 )。
许多具雌激素样活性的异黄酮在体内和体外均
能改善骨质代谢。 口服大豆苷和金雀异黄素能增加
去卵巢大鼠股骨 BMD、抗压强度、灰重和钙、磷含
量 ;减少尿钙、磷排泄 [3 ]。大豆苷元在体外能增强成
骨样细胞株碱性磷酸酶活力 [10 ]。金雀异黄素在体外
能抑制破骨细胞功能 [11 ] ;使大鼠骨骺组织的碱性磷
酸酶活性、 DNA和钙含量增加 ,表明能增加成骨细
胞的增殖和功能 ,促进矿盐沉积 [12 ]。
本研究所用剂量的 TIP对子宫的刺激作用比
E3弱得多。 E3组大鼠有 3只乳腺增生明显 ,但 TIP
组未见任何形式的乳腺增生现象。但它对骨代谢的
保护作用比 E3组强许多 ,其原因可能是: ( 1) TIP具
有明显的活血化瘀作用。 OP在中医属骨痿 ,血瘀是
发病原因之一 ,研究发现活血化瘀方治疗有部分疗
效 [13 ] ; ( 2) TIP对雌激素受体 ( ER)可能有一定选择
性作用 ,如和 17β E2相比 ,拟雌内酯、金雀异黄素和
大豆苷元与 ER-β的亲和力分别是 ER-α(主要存在
于子宫和乳腺等 )的 7, 22和 5倍 [14 ] ,文献报道在大
鼠骨骼 [15 ]和人成骨样细胞 [ 16]中 ER-β占多数。尚不
清楚葛根素是否也有类似的选择性作用。
本研究提示雌激素样作用可能是 T IP防治 OP
的主要作用机制 ,但其确切机制还不清楚 ,如能否促
进 OVX大鼠胃肠对钙、磷的吸收 ,是通过抑制骨吸
收还是增加骨形成 ,对骨代谢相关因子如 IL-6和降
钙素的分泌有无影响等还有待进一步研究。
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2. 教学、发证及学费:①函授生在职自学 ,考试成绩合格 ,发给省教委验印 ,国家承认学历的本科、大专、中专毕业证书②
另类函授生在职自学 ,考核合格学院发加盖钢印的本科、大专学业毕业证书 ,可申请提前毕业 ,学院建立学籍档案 ,可向有关
人事部门寄发。 本科学费 800元、专科 700元 ,免试入学随报随读③全日制住校生免试入学 ,考试成绩合格发国家承认学历的
本科、专科、中专毕业证 ,并推荐安置就业 ,可签订就业保障协议及办理农转非户口。 秋季班 9月上旬开学 ,春季班 3月上旬开
学 ,可随时接收插班生 ,每年学费 3 000元。
3. 报名方法及地址:邮汇报名费 6元 ,即寄报名登记表、详细招生简章。汇款时请用正楷写清详细地址、邮编 ,并在汇单上
写明学习专业 ,不必另外再来信。
汇款及来函请寄: 江西九江市老马渡 88号付 A48号九江学院招办孙武平老师收　邮编: 332000咨询电话: 0792-8130039　手机: 013507066206　传真: 0792-8130269　此广告长年有效 ,欢迎来校参观考察
另: 本院欲在全国各地设招生代办点 ,待遇优 ,也接洽有关人员及单位搞联合办学 ,有意者可来函来电洽谈。
广告审批文号: 赣教社广字 [2001]第 023号　许可证号:赣教社证字 ( 98) 036号
·425·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 5期