全 文 :NO介导的油茶皂苷对在体大鼠产生的药理性预适应保护作用
黄起壬 ,曹守仪 ,何 明 ,李 萍 ,彭维杰
⒇
(江西医学院 药理教研室 ,江西 南昌 330006)
摘 要: 目的 研究油茶皂苷 ( SQS)预适应保护作用及 NO的关系。方法 以 ISO诱发大鼠心肌缺血损伤为模型 ,
使用特异性 NO合成抑制剂 M eth ylene blue( M ET )测定大鼠 ECG及 C PK活性 , FFA和腺苷含量。 结果 预适应
iv SQS能有效地保护 ISO所致大鼠心肌损伤 ;先 iv M ET后再给予 SQS,则 SQS对心肌损伤的保护作用明显减
弱。 结论 SQS对 ISO所致心肌缺血大鼠可产生药理性预适应保护作用 ,该作用由 NO所介导。
关键词: 油茶皂苷 ;一氧化氮 ;药理性预适应 ;心肌保护
中图分类号: R285 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2001) 01 0044 03
Protective effect and pharmacological ischemic preconditioning of sasanquasaponin
mediated byNO on intact rat heart
HU ANG Qi-ren, CAO Shou-yi, HE Ming , LI Ping, PENG Wei-jie
( Depa rtment o f Pharmaco log y, Jiangxi Medical Co lleg e, Nanchang Jiangx i, 330006, China)
Abstract: Object To study the pro tective effect and pharmaco logical ischemic precondi tioning of
sasanquasaponin ( SQ S) on intact rat heart and its rela tionship wi th NO. Methods A model o f rat
myocardial ischemia induced by sc injection of isopro tereno l ( ISO ) w as prepa red, and af ter the
administ ration o f selectiv e NO synthesis inhibitor methylene blue ( M ET) , the ECG, serum creatine kinase
( CK) activ ity, f ree fat ty acid ( FFA) and adeno sine contents w ere determined. Results Preconditioning iv
injection of SQS can effectiv ely pro tect the myocardium from ischemia induced by ISO. The cardio
pro tectiv e ef fect was significantly a ttenuated when the NO synthesis inhibi to r M ET were injected prio r to
SQS. Conclusion SQS can ef fectively protect myoca rdium ischemia induced by ISO and the protection is
most likely to be media ted by NO.
Key words: sasanquasaponin ( SQ S) ; ni t ric o xide ( NO) ; pharmacological ischemic preconditioning;
cardiopro tection
油茶皂苷 ( sasanquasaponin, SQS)为山茶科植
物油茶 Camel lia olei fera Abel. 的种子经榨油后的
渣滓中提取出来的一种混合皂苷。文献报道 SQ S具
有抗真菌、杀精子、杀钉螺、降血脂、抗炎和抗渗出等
作用 [1~ 4 ];它还能对抗异丙肾上腺素造成的心肌损
伤 [5 ]。本研究将进一步就其与 NO的关系进行探讨 ,
旨在为其临床应用提供理论基础。
1 材料
1. 1 药品与主要试剂: SQS粉剂 ,从茶籽饼中按
Ueda方法 [6 ]分离提取 ,再经硅胶 G薄板层析鉴定。
由本教研室李宝华教授惠赠。用前用生理盐水新鲜
配制 , pH= 7. 0。盐酸异丙肾上腺素 ( ISO)注射液:中
国上海天丰药厂产品 ,批号: 960803。 肌酸 ( Crea t-
ine )、 5, 5′-二硫代对二硝基苯甲酸 ( DTN B)、 MET
为 Sigma公司产品。
1. 2 动物: Wista r雄性大鼠 ,体重为 190~ 230 g,
江西医学院动物实验科学部提供。
2 方法
2. 1 模型的建立:取心电图 ( ECG)正常的健康大
鼠 ,皮下多点注射 ISO 4 mg /kg , 24 h重复 1次 [7 ]。
2. 2 实验分组与给药: 取 ECG正常健康大鼠 ,雄
性 , 40只 ,体重为 190~ 230 g。 在注射 ISO前 ,先将
大鼠随机分为 4组 ,每组 10只 ,分别为生理盐水对
照组 ( N S组 )、 ISO诱发损伤组 ( I /R组 )、 SQS组
( I /R+ SQ S 0. 2 mg /kg )和 M ET组 ( I /R+ MET+
SQS)。 在注射 ISO前 ,从阴茎静脉预适应注射各被
·44· 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 2001年第 32卷第 1期
⒇ 收稿日期: 2000-05-16基金项目:江西省自然科学基金资助 ( C950102)作者简介:黄起壬 ( 1967-)男 ,医学硕士 ,讲师 ,中国药理学会、江西省生理科学会会员。研究方向:心血管药理学。 曾独立完成了“油茶皂苷药理性缺血预适应保护作用及机制研究”课题 ,并作为主要骨干参加了“三七皂苷、阿魏酸钠、粉防己碱等中药有效成分对实验性心肌损伤的保护作用及机制研究”课题 ,参与了重组性 bFGF在真核细胞中表达的研究工作。参加了复方银杏胶囊、益心冲剂等新药研制。获得江西医学院首届“联邦医学教育奖”。参与的江西省自然科学基金项目“油茶总皂苷对实验性心肌损伤的保护作用及机制研究”课题通过了江西省科学技术委员会的成果鉴定。 以第一作者发表学术论文数篇。
试药物或 N S,每天 1次 ,连续 3 d。末次给药后立即
皮下多点注射 ISO。 N S组皮下注射等量 N S。
2. 3 注射 ISO前 ,第一次注射 ISO 24 h后 ,第二次
注射 ISO 1 h后 ,分别记录标准Ⅱ及 3个胸导联的
ECG。
2. 4 行眼眶取血并制备血清 ,测定磷酸肌酸激酶
( CPK)活性 ,游离脂肪酸 ( FFA)和腺苷含量。
3 结果
3. 1 SQS对 ISO所致大鼠心肌损伤 ECG S-T段
改变的影响: 结果见表 1。 第一次给予 ISO后 24 h
及第二次给予 ISO后 1 h,均可使大鼠 ECG的 S-T
段明显抬高 (S-T) , S-T段升高次数 (N T)也明显
增多 ,与给 ISO前相比 ,具有非常显著性差异 ( P <
0. 01)。 SQS可有效对抗 ISO所致 S-T段抬高和
N T升高 ;而先预适应 iv M ET后 ,再予以 SQS,
SQS抗 ISO所致 S-T段抬高的作用明显削弱 ,其抑
制率分别为 37. 2%和 34. 6% (P < 0. 05)。 S-T升
高程度和 N T与 I /R组相近 ,无显著性差异 ( P>
0. 05)。
3 . 2 SQS对 ISO所致大鼠心肌损伤血清 CPK活
表 1 SQS对 ISO所致大鼠心肌损伤 ECG S-T段改变的影响
组别 给 ISO前 N Ta S-T( mv) b
第一次给 ISO后 24 h
N Ta S-T( mv ) b
第二次给 ISO后 1 h
N Ta S-T( mv) b
I /R 63 0. 78± 0. 57 117* * * 1. 89± 0. 60* * 146* * * 2. 05± 0. 41* * *
SQS 61 0. 85± 0. 44 73△ 0. 93± 0. 42△△△ 80△△ 1. 02± 0. 58△△
MET 73 0. 92± 0. 36 112▲▲ 1. 48± 0. 37▲ 120▲ 1. 56± 0. 34▲
α-χ2检验 , b-t检验 ; 与给 ISO前比较: * * P < 0. 01 * * * P < 0. 001; 与 I /R组比较: △ P < 0. 05 △△ P < 0. 01 △△△ P < 0. 001;
与 SQS组比较: ▲ P < 0. 05 ▲▲ P < 0. 01
性和 FFA含量的影响: I /R组血清 CPK活性、 FFA
含量明显高于 N S组 ,分别为 ( 4. 72± 0. 76) mmo l /
L· min、 ( 816. 88± 91. 80) μmol /L ( P < 0. 01和
P < 0. 001)。 SQS可明显抑制 CPK活性和 FFA含
量的升高 ,其抑制率分别为 15. 2%和 16. 5% ( P <
0. 05)。 MET则能减弱 SQ S抑制 CPK活性、 FFA
含量升高的作用 ,与 SQS相比 ,具有显著性差异
(P < 0. 05) ,见表 2。
表 2 SQS对 ISO所致大鼠心肌损伤血清 CPK活性
和 FFA含量的影响 ( (x± s,n= 10)
组别 CPK
( mmol /L· min)
FFA
(μmol /L)
NS 3. 44± 0. 62 536. 88± 89. 84
I /R 4. 72± 0. 76* 816. 88± 91. 80* *
SQS 4. 00± 0. 53△ 681. 88± 72. 92△△
M ET 4. 80± 0. 68▲ 796. 00± 68. 62▲▲
与 N S比较: * P < 0. 01 * * P < 0. 001;与 I /R组比较: △ P <
0. 05 △△ P < 0. 01;与 SQS比较: ▲ P < 0. 05 ▲▲ P < 0. 01
3. 3 SQS对 ISO所致大鼠心肌损伤时血清腺苷含
量的影响: I /R组血清中腺苷含量明显低于 N S组 ,
分别为 ( 5. 58± 0. 82 ) μmol /L 和 ( 7. 19± 0. 62)
μmo l /L ( P < 0. 001) ; SQS能抑制 ISO所致腺苷的
降低 ,其抑制率为 19. 6% ( P < 0. 01) ;而在预先适应
iv M ET后 ,再予以 SQS,则 SQS抗 ISO所致腺苷
降低的作用被削弱 ,具有显著性差异 ( P < 0. 05)。见
图 1。
4 讨论
心肌缺血预适应 ( Ischemic Precondi tioning ,
与 NS比较: * * P < 0. 01; 与 I /R组比较: △△ P <
0. 01; 与 SQS比较: ▲ P < 0. 05
图 1 SQS对 ISO所致心肌缺血大鼠血清腺苷含量的影响
IPC)是指心肌经一次或多次短暂缺血之后对随后
较长时间缺血耐受性增加 , Murry等人称这种现象
为预适应 [8 ]。各种实验证实预适应保护作用包括减
轻心肌细胞损伤程度、延搁梗死进程、减轻心律失
常、保护心肌收缩功能和保护心脏内血管神经组织。
有关 IPC的作用机制的学说很多 ,比较肯定的有
IPC能诱导内源性心肌保护物质 (如腺苷、NO、缓激
肽和前列腺素等 )的生成。其中 NO在 IPC中发挥
着重要作用 [9 ]。 NO是以 l-arginine(左旋精氨酸 )为
底物在一氧化氮合酶 ( NOS)和其它辅因子 (如黄素
腺嘌呤二核苷酸、黄素单核苷酸、血红素和四氢叶
酸 )共同参与下合成的。 文献报道 ,心脏中存在着
NOS,但大多数为内皮型一氧化氮合酶 ( eNO S)亚
型 ,其遍布于心肌间动脉、静脉和毛细血管网络 [10 ]。
有人通过生物化学方法发现心肌中不存在诱导型一
氧化氮合酶 ( iNOS) ,但当心肌细胞受炎性细胞因子
诱导后可产生 iNOS[ 12]。由此可推断出当心肌细胞
·45·中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 2001年第 32卷第 1期
缺血缺氧时 ,可产生大量炎性因子 ,因此可诱导 NO
的合成来发挥抗心肌损伤的作用。
本研究发现在注射 ISO前预适应地给予 SQS
后 ,可明显对抗 ISO所造成的心肌损伤 ,表现在可
对抗 ISO所致的 S-T段抬高 ,减少 S-T段抬高次
数 ,减少心律失常的发生 ;可显著降低血清 CPK活
性 ,减少 FFA的含量 ;提高血清中腺苷的含量。组织
学上 , SQ S明显减轻了心肌细胞水肿、变性、坏死和
炎性细胞浸润 ,这表明 SQS可能有药理性预适应样
作用。 当使用了 NO释放阻断剂 N ET(作用在鸟苷
酸环化酶环节 )可减弱或取消 SQS的药理性预适应
作用 ,表明 SQS产生的药理性预适应作用至少部分
通过激活 NOS,诱导 NO和腺苷的形成而发挥作
用。但 SQS药理性预适应作用的确切机制有待于进
一步研究。
参考文献:
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左旋千金藤啶碱对 β肾上腺素受体的拮抗作用
王 蕾 1 ,汪明华2
⒇
( 1. 青岛大学医学院 药理教研室 ,山东 青岛 266021; 2. 上海医科大学药学院 药理教研室 ,上海 200032)
摘 要: 目的 研究左旋千金藤啶碱 ( l-SPD)对 β肾上腺素受体的作用。 方法 应用放射配体结合实验 ,通过竞争
[3H ]双氢烯丙洛尔 ( [3 H]DHA)特异性结合 ,研究 l -SPD对 β肾上腺素受体的亲和力 ;在离体猪冠状动脉环实验中 ,
观察 l-SPD对 β肾上腺素受体的拮抗作用。 结果 l -SPD能竞争 [3 H] DHA和兔肺细胞膜的结合部位 ,其 Ki值为
( 5. 75± 0. 56) μmol / L; l-SPD使去甲肾上腺素 ( NA )对数累加量效曲线 ( LCCRC)右移又压低 ,其 PA2和 PD′2值分
别为 7. 21± 0. 78, 5. 32± 0. 13,而普萘洛尔 ( Pro )使 N A的 LCCRC平行右移 , PA2值 9. 19± 0. 17。 结论 l -SPD对
β受体有拮抗作用。 此外 ,对其它受体可能也有影响。
关键词: β肾上腺素受体 ;左旋千金藤啶碱 ;结合位点 ;冠状血管
中图分类号: R285; R971. 94 文献标识码: A 文章编号 : 0253 2670( 2001) 01 0046 03
Antagonism of l-stepholidine onβ-adrenoceptors
WAN G Lei1 , W ANG Ming-hua2
( 1. Depar tment of Pharmacolog y , Medical Co lleg e o f Qingdao Univ ersity , Qingdao Shandong 266021, China; 2.
Depar tment of Pha rmaco lo gy , College o f Pharmacy, Shanghai Univ ersity o f Medica l Sciences, Shanghai 200032, China )
Abstract: Object To study the effect of l -stepholidine ( l-SPD) on β-adrenoceptors. Methods The
af fini ty o f l-SPD to β-adrenoceptors was investig ated by radio lig and binding a ssay by means of competitiv e
[
3
H ] labelled Dihydro-Apreno lol ( [
3
H ] DHA ) specific binding. The antagonism of l-SPD on β-
·46· 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 2001年第 32卷第 1期
⒇ 收稿日期: 2000-07-12作者简介:王 蕾 ( 1967-) ,女 ,山东烟台人 ,副教授 ,硕士学位。 1990年毕业于上海医科大学药学系药理专业 ,获学士学位 , 1990年至今于青岛医学院药理教研室任教 , 2000年获硕士学位。 主要研究神经药理。