全 文 ：防风多糖的研究
北京联合大学 中医药 学院中药系 (1 0 0 0 1 3)
北京 中医药 大学
李 江 ’
陆蕴如 张桂燕
摘 要 从 防风水提液 中得到 2 种酸性 杂多糖 X C 一 1 , X C 一 2 , 其平均分子量 为 1 3 1 0 0 和 73 5 0 0 。 通
过 T L C 和 G C 确定 了糖 的组成 和摩尔 比 , 应用 IR , ‘H 和 ‘℃N M R 谱对多糖进 行 了初步结构研究 。
初步药理实验证明 , 防风多糖 X C 一 2 具有显著增 强机体免疫 功能的作用 。
关键词 防风 多糖 生理活 性
防风 为伞形科 植物 防风 S aPos h川ko “a Z 多糖的分离纯化
成v a ri ca ta (T ur cz . ) S c hi sc hk. 未抽花茎植 防风 1 k g , 粉碎 , 热水提取 , 水提液减压
株的干燥根 , 因其功善走表祛邪并御风 , 故名 浓缩 , 乙醇沉淀得粗多糖 。 粗多糖经 Sev ag 法
防风川 。它为中医临床常用中药 。现代研究表 除蛋 白 2。 次 , 再醇沉 , 丙酮 、 乙醚依次洗涤 ,
明防风水提液具有一 增强机休免疫功能 、解热 、 干燥得防风总多糖 。 将总多糖溶于水 , 以氯型
镇 痛 、镇 静 、抗 炎等 作用 。 东m iz u 等 人 曾报 D E 一 52 纤维素柱(6 0 c m X 2 . 6 c m )色谱分离 ,
道 , 防风多糖具有 R E S 激活活性 , 3〕。 依次用水 、 。. 05 ~ 0 . 5 m ol / L N a CI 洗脱 , 苯酚
在药理实验 的配合 下 , 我们对防风水提 硫酸法川测定流出液 , 合并糖反应阳性高峰部
液的化学成分进行研究 , 发现多糖部分 为增 分 。 取 0 . 1 m ol / L N a CI 洗脱部分 , 蒸馏水透
强机体免疫功能的活性成分 , 对其进行分离 析 Z d , 减压浓缩 。 浓缩液经 Se p h a d e x G 一75
纯化 , 得到 防风多糖 X C 一 1 , X C 一 2 。 其中 X C 一 2 柱层析 (1 0 0 c m X 2 . 6 c m ) , 蒸馏水洗脱 , 同上
能显著提高小 鼠脾脏 T 淋 巴细胞的增殖 。 2 法检测 , 合并糖反应阳性高峰部分 , 减压浓缩 ,
种防风多糖的糖残基组成 、 分子量均 与文 献 冷冻干燥 , 得防风多糖 X C 一 1 , X C 一 2 。
报道不 同比 3〕。 3 纯度及分子 t 测定
1 材料与仪器 高效液相凝胶色谱明 : 色谱柱为 S ho d ex
防风由唐 山 市药检所姚绍柱代购 , 并鉴 fo n p a k s 一8 03 糖分析柱 。样品浓度 0 . 5 % (w /
定 为 SaP o sh n ik o v ia d iv a r ie a ta ( T u r e z . ) v ) , 进样量 5 1 拜L , 流动相为 O· 2 m o l/ L 硫酸
S c hi sh k
. 的未抽 花茎植株干燥根 , 产于河北 钠溶液 , 流速 0 . 8 m L / m in 。 X C 一1 , X C 一2 均为
唐 山 地 区 (野 生 ) 。 D ext ra n 系 列 标 准 品 、 单一色谱峰 。
S e Ph a d e x G
一
7 5 均 为 P h a r m a e ia 公 司产 品 , 标准分 子 量系 列 D e x t r a n (4 . 0 1 X 1 0 ‘ ,
各种单糖 、糖醛酸标准品及所有其它试剂均 1 . 05 x l少 , 4 0 x 1 0 3 )绘 制 标准 曲线 , 求得
为分析纯 。 H P 5 8 9 0 S e r ie x 皿型毛细管气相 X C 一 1 、 X C 一 2 的 平 均 分 子 量 为 1 3 1 0 0 和
色谱仪 , W a t e r s 2 4 4 型高效液相色谱仪 , E C P 7 3 5 0 0 。
3 0 0 。型 电泳仪 , 日本 岛津 U 一2 0 0 0 型 紫外分 醋酸纤维素薄膜 电泳圈 : 薄膜 (2 c m 次 8
光光度计 , N ie o le t Z OX B S 型红外光谱仪 , JE 一 em ) , 缓 冲液 0 . 1 2 5 m o l/ L 硼 酸 : 0 . 1 m o l/ L
O L G X 4 0 0 型核磁共振仪 。 N a O H ( 8 : 1 ) pH O . 3 , 电压 2 5 0 V , 电泳 3 0
·
A d d r e s s
:
L i Jia n g
,
C o lle g e o f T
r a d itio n a l Chin e s e M e d ie in e a n d M a t e r ia M e d ie a
,
Be iji
n g U n io n U n iv e r sit y
,
Be iji
n g
李 江 1 9 8 9 年 毕业 于沈 阳药科大 学中药系 , 获理学学士学位 . 19 9 2 年考 人北京 中医药大学 中药系 , 攻读 中药化学专
业硕 士学位 , 1 9 9 5 年获医 学硕士学位 。 现为北京联 合大学中医 药学院中药 系讲 师 , 主要从事 中药化学教学 、中药活性成分研
究及 中药复 方新药的开发研制工作 。
·
6 5 2
.
m in
。
1 %阿利新蓝染色 , 95 % 乙醇漂洗 , 结果
均为一向阳性移动的 区带 。
4 含 , 测定
防风多糖 X C 一 1 , X C 一 2 以半乳糖 为标准
品 , 苯 酚 一硫酸 法测定总糖 的含量 为 93 . 8 %
和 9 6 . 0 % 。 以半乳糖醛酸为标准品 , 硫 酸咔
哩法川测定糖醛酸含量为 8 . 3 %和 1 9 . 3 % 。
5 糖残基的组成及摩尔比测定
5
·
1 薄层层析 : 取 X C 一 l , X C 一 2 各 s m g , 加 1
m o l/ L H
Z
S O
4 1 m L 置安瓶 中 , 封管 。 1 0 0 ‘C水
解 4 h 时 , 碳酸钡 中和 , 离心 . 上清液浓缩后 ,
点 样 。 层 析 板 为 自制 含 。. 3 % N a H ZPO 4 、
0
.
5 % C MC 的硅胶 G 板 。 展开剂为丙酮 一水
(9 6
, 4 )
。苯胺邻苯二 甲酸显色 。层析结果为 :
X C
一
l 示有 7 个斑点 , 与标准单糖对照 , 含有
半乳 糖醛酸 、 半乳糖 、 葡萄糖 、甘露糖 、岩 藻
糖 、 阿拉伯糖 、 鼠李 糖 , 其 R f 值 的相对 比 为
(甘露糖 R f= 1 ) 0 . 1 3 : 0 . 3 6 : 0 . 6 3 : 1 . 0 0 :
l
·
6 7 ’ 2
·
0 7 , 3
·
6 0
。
X C
一
2 示有 6 个斑点 , 与
标准 品对照 , 含有半乳糖醛 酸 、半乳糖 、 葡萄
搪 、 甘露糖 、阿拉伯搪 、 鼠李糖 , 其 R f 值的相
对比为 (甘露糖 R f= 1 ) 0 . 1 3 : 0 . 3 6 : 0 . 6 3 :
1
.
0 0 : 2
.
0 7 : 3
.
6 0
。
5. 2 气相层析
5
.
2
.
1 单糖组成分析 : 称取 X C 一 1 , X C 一2 各
10 m g
, 同上法水解 , 按文献闭方法制备糖腊
乙酸醋衍生物 , 配成氯仿溶液 。
层析 柱为弹性石 英毛细管柱 O V 一1 (12
m X O
·
2 m m X O
.
3 m m )
, 柱温 , 程序升温 1 6 5
C 至 21 O C . 每分钟上升 7 ℃ 。 气化 2 50 ℃ ,
检测 2 8 0 cC 。
气相层 析结果 X C 一2 与薄层层析一致 。
X C
一
1 较薄层层析多出一个木糖 的峰 。
5
.
2
.
2 组成单糖摩尔比测定 : 以肌醇六乙酞
醋为内标 , 测定 了上述各标准单糖 的定量校
正因子 。 配比各单糖与 内标 的重量比在 0 . 5
一 2 . 6 范围 内的 5 个不 同浓度 , 依上法制备
糖猜乙酸醋衍生物 , 进行气相层析 , 求 出各单
糖 的斜 率 b , 即定 量较 正 因子 (f 一 W i/ W s /
A i/ A s )
。
X C
一
1
,
X C
一
2 的摩尔 比测定条件与测
《中草药 》1 9 9 9 年第 3 0 卷第 9 期
定定量校正因子条件相同 。 根据各单峰的峰
面积和内标 的峰面积 比乘以 f/ M (定量校正
因子 /分 子 量 )所得 值 比 之 比 即 为摩 尔 比 。
X C
一
1
,
X C
一
2 的半 乳 糖 醛 酸 的含 量 分 别 为
8
.
3 %和 1 9 . 3 % , 按其含量 比换算成摩尔 比 。
测定结果 为 X C一 1 , 鼠李 糖 一阿 拉伯糖一木糖 -
岩藻糖 一甘露糖 一葡 萄糖 一半乳糖 一半乳糖醛酸
= 10
.
0 : 7
.
2 6 : 0
.
2 5
: 2
.
1 3 : 0
.
5 2 : 3
.
2 3 :
7. 2。 ’ 2 · 9 7 ; X C 一2 , 鼠李糖 一阿拉伯糖 一甘露糖
一葡萄糖 一半乳糖 一半乳糖醛 酸 ~ 1 . 05 : 7 . 01
: 0
·
1 6 , 0
.
7 9 , 1 0
.
0 , 4
.
6 9
。
6 波谱分析
X C
一
1
,
X C
一
2 的紫外光谱在 2 8 0 n m 处均
无吸收峰 , 且苟三酮反应为阴性 , 说明 2 种多
糖不含氨基 酸或蛋白质 。 红外光谱 中 (K B r
压 片 ) , X C 一 2 在 8 97 c m 一’的吸收峰 , 示 分子
中 有 件型 糖 昔 键 [ 9 ] 。 X C 一2 的 ‘H N M R 临 ,
p p m )谱中 , 在 5 左右有多重峰 。 1 . 1 2 和 l, 0 6
为鼠李糖上的甲基质子信号 。 X C 一 2 的’3C N -
M R 临 , p p m )谱中 , 在高场区有 2 个鼠李糖的
C
6 共振信号 1 8 . 4 和 1 8 . 1 。 在端 基碳 9 9一
1 1 2 范围 内 , 呈现 1 0 个共振信号 , 可推测分
子的重复片断至少由 10 个糖残基组成 。
7 讨论
从防风中分离得到 2 个多糖 X C 一 1 , X C -
2 均为白色粉末状固体 , 可溶于水 。 分子中含
有半乳糖醛酸 , 属于酸性杂多糖 。通过其组成
分析和摩尔比测定 , 结果表明两者有很大的
差异 。
S hi m iz u 等人从防风中分离得到 3 种多
糖 s a p o n ik o v a n A , B , C , 糖残基组成分别为
A
: 半 乳糖 、 阿拉伯糖 、半乳糖醛 酸 ; B : 半乳
糖 、阿拉伯糖 、半乳糖醛酸 、 乙酞基和甲氧基 ;
C
: 半乳糖 、阿拉伯糖 、 鼠李糖 、半 乳糖 醛酸 。
因而作者所得多糖 X C 一1 , X C 一2 均不同于 已
报道的多糖 。
多糖 X C 一 1 的气相分析结果较薄层层析
多 出一个木糖 , 这可能是由于木糖含量少而
薄层层析灵敏度低的缘故 。
(下转第附 7 页 )
.
6 5 3
.
· 信息与文摘 ·
山地香茶菜中的一个新
迷迭香酸衍生物
唇形科的香茶菜盛 产于我国西南各省 。 作者等
前对 云南丽 江 自治县 产的 山 地 香茶 菜 Iso d o n 口re s -
友 u s (W . W . S m ith ) K u d o 进 行植化研究中曾分 得
一些类黄酮和酚类化合物 。 在进 一步寻找新药 的企
图下 , 又对从该省 迪庆 自治州 收集到的 山地香茶菜
重新进行 了植化研究 。除分出已知的紫云英昔 (山奈
酚一 3 一O 一葡搪昔 ) 、榭皮素一 3 一O 一葡糖昔 、 齐墩果 酸 、 熊
果酸和 。o d o p o n in 、 o r e s biu sin A 、迷迭香酸和迷迭香
酸 甲醋外 , 还获得 一个新的迷迭香酸衍生物 。
该化合 物经 ID 和 ZD 核磁共振谱分析 , 表 明其
为迷迭香 酸的正丁 醋 , 为黄色 不定形粉状物 , 〔a 〕D +
5 6
。
(e
,
0
.
8 5 7
,
C H C 13 )
。
另外 还 有 一个前曾分 得 的化合 物 n eo a n g us ti -
fo lin ( I )
, 当时 系和另一成分 e p in o d o s in o l经分子间
的氢键相连 接 , 形成 了 1 : 1 的复合物 ; 在本试验中
却获得了它的单体 。 从光谱数据观 察其 C : 的化学位
移 临 3 0 . 7 )和原来的 (6 2 4 . 3 3 )相差很大 , 而和 e p in -
o d o s in o l 的 临 3 0 . 1 8 )却 很接近 , 故认 为这 一点应 和
前报道的 e p in o d o s in o lC : 互换加 以更 正 。
N e o a n g u s t ifo lin 为 无 色 结 晶 , m p 1 9 5 ℃ ~
19 7 ℃ , 对 白色 念珠菌 的 最低 抑 制 浓度 (M IC )为 50
拜g /m L
。
(史玉俊 摘译 )
〔H u a n g H , e t a l. P la n ta M e d , 1 9 9 9 , 6 5 (1 ) ; 9 2〕
欧亚旋复花中具细胞毒的倍半菇内醋
在东亚 , 菊科植物 欧亚旋复花 In “la br ita n ica
L
. 作为传统药物用于 治疗消化道 疾病和 支气管炎 。
欧亚旋复花 的抓仿抽提 物在 H L 一 60( 人类 白血病 )细
胞中显示 出很高的细胞毒性 (E D S。 1 . 9 拌m /m L ) 。 作
者从这一部分抽提物中分离出 4 个倍半掂内醋 : 4a ,
6 a
一二 经 按 烷一 8月, 1 2 一交 醋 以 a , 6 a 一d ih yd r o x ye u d e s -
m a n
一
sp
,
12
一 o lid e ( I )〕, e r g o lid e ( l ) , 8 一表一堆心菊内
醋〔8 一e p i一 he le n a lin ( 扭 )〕, 和 b ig e lo v in (w ) 。 其中化
合物 I 是首次从天然资源 中分到 。
化合物 I 为 无 色针 晶 , m p l8 7 . 8 ℃ , 〔a 】D 25 +
1 3 5
.
1 1
“
(e
,
0
.
3 1 5
,
C H C 13 ) ; IR 光谱 上 有 经 基 (3 24
e m 一 ‘ )和 a , 件不饱 和 不内醋 基团 (1 7 6 0 。m 一 ’)的吸
收 峰 ; E IM S 和 D E P T 分析得 出化合 物 I 的分子 式
为 C 1 5 H Z : O ; ; ’H N M R 和 ’3C N M R 数 据 以 及 N O E D S
实验确定 了化合物 I 的立体结构 。
化合物 I ~ W 对 6 种人类瘤细胞株的细胞毒性
测定显示 出这些化合物都有细胞毒活性 (表 1) 。
衰 1 化合物 I 一 W 对人类摘细胞株的细胞毒
性洲定 (E D , 。 pm ol / L 平均值 士标准差 )
细血系 1 1 . 柑
HL
一
60怕血病) 14 . 7士3 . 0 2 . 7士1 . 9 12 . 2士5 . 3 5 . 6士2 . 6
A 549(肺瘤) ) 75 . 2 ) 65 . 3 53 . 8士12 . 4 17 . 4士3 . 2
MCF7(脚旅姗) 39 . 4士8 . 9 21 . 0士0 . 6 9 . 1土3 . 9 39 . 4士9 . 8
HCT
一
15(结肠旅斑) 15. 2士1. 1 37 . 4士1. 3 8 . 7士1 . 9 15 . 2士5 . 4
SK
一
OV
一
3(卯集且姗) ) ?5 . 2 ) 65 . 3 18. 7士3 . 0 ) 75 . 8
Malme
一
3M (恶性黑众启) 17. 3士2 . 3 15 . 0士1. 2 8 . 3士0 . 9 17 . 3士2 . 5
(汤佳音 摘译 杨 丽教校 )
[E u n Ju n g Pa r k
.
et a l
.
Pla n t a M e d
,
1 9 9 8
,
6 4
: 7 5 2〕
Sh im iz u N
, e t a l
.
Che m Pha r m B u ll
, 1 9 8 9
,
3 7
:
3 0 5 4
D u b o is M
,
et a l
.
A n a ly t ie a l Che m is tr y
,
1 9 5 6
,
2 8
:
3 5 0
方积年 , 等 . 化学学报 , 19 8 8 , 4 6 : 1 1 0 1
黄乔 书 , 等 . 药学学报 , 1 98 2 , 1 7 (3 ) : 2 00
李 向高 , 等 . 中药通报 , 1 98 7 , 1 2 (6 ) : 4 0
李铁林 , 等 . 分析化学 , 1 98 2 , 1 0 (2 ) : 2 72
方积年 . 药物研究 , 19 79 , 2 9 : 3 6
(1 9 9 8
一
0 5
一
2 2 收稿 )
八J月怡哎一匕
一了只”O†
(上接第 6 5 3 页 )
致谢 : 军事 医学科学院王友茄 、王作华 、
黄荣清等同志协作完成高效液相及气相 色语
分析 。
参 考 文 献
l 冉先德 主编 . 中华药海 . 上册 . 哈尔 滨 : 哈尔 滨出版
社 , 1 9 9 3 : 3 5
2 Sh im iz u N
, e t a l
.
Ch e m Pha r m B u ll
,
1 98 9
.
3 7
,
1 3 2 9
‘户‘产‘户‘产‘产 ‘产 、奋盏‘产 ‘产‘产丫奋) ‘产 、, 户、护户 、苦户、‘户‘产、, 户‘产‘产、夕声 、‘户‘产、, 户 、夕户 ‘产、‘户 、夕户‘户洛户卜、‘户‘产 ‘产、, 户‘声 . 父奋户‘产 、, 户 , 奋 户、, 户、习户 、习户贷户、
《中 草 药 》杂 志 欢 迎 刊 登 广 告
《中草药 》1 9 9 9 年第 3 0 卷第 9 期 附 7