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车前的组织培养
江西省科学院生物资源所 (南昌 3 3 0 0 2 9) 涂艺声 带
摘 要 报道了车前外植体的愈伤组织诱导及其植株再生的研究结果 。 单独的外源生长素 2 , 4 一D
适宜诱导外植体脱分化产生愈伤组织 , 只有单独添加 6一 BA 时 , 才适宜再生芽的分化 , 当 N A A 与
6
一
BA 配合添加培养基中 , 则有利 于再生根的繁茂生长 , 从而形成完整的再生植株 。
关镇词 车前 外植体 离体培养 再生植株
车前 p la nt a g o as iat ica L . 是车前科植 1 . 1 供试种 : “卢陵 ”车前 (本省吉安县栽培
物 , 种子和 全草入 药 。 车前籽粒 富 含亚油 种 ) 。
酸川 、大量蛋白质 、维生素 A 和维生素 C 。 近 1 . 2 实验方法 : 取成株幼花梗 , 幼花穗或当
年来研究还发现车前子能提取一种高级宇航 年成熟种子 , 用 。. 1 %汞液 表面消毒 10 m in
润滑油和植物胶 , 车前子的浸提液可制作夏 左右 , 倾去药液 , 再用无菌水漂洗 6 遍后 , 以
季降暑的上品饮料 。 国外把它作为容积性泻 灭菌的滤纸吸干材料上的水滴 。 在无菌条件
药 , 避孕药载体及工业原料 , 对车前子的需要 下 , 将幼 花梗 、 花穗对 半纵 开 , 再 切断 成
量越来越大明 。 0 . 6c m 长作外植体备用 ;消过毒的种子在无
车前在江西吉安老区是一种传统的经济 菌条件下接种在 M S 基本培养基 上发芽 , 待
作物 , 栽培历史达 3 0 年之久 , 随着近年来车 无菌苗长出 1 0d 后 , 取其分割成下胚轴 , 茎
前子出 口 日本 、新加坡 、中南亚各国 , 其经济 尖 、子叶 、子叶柄 、胚根作外植体 。将上述各类
价值大增 , 当地农民 自发 由零星栽培发展到 外植体接种到配制好的培养基上 。
近 6 67 万平方米面积 , 但因扩种车前发生了 1 . 3 培养基及其培养条件 :诱导脱分化和再
严重的车前真菌性病害 , 以致连续几年使用 分化植株的基本培养基为 M S 添加不同的植
各类药剂 防治未能控制病情 , 至 1 9 9 3 年 , 物激素 K T 、 6 一BA 、 2 , 4 一D 、N A A 等进行对 比
8 7
.
5 %的田块颗粒无收 。这种毁灭性病害 , 使 试 验 , 培 养基 p H S . 8 左右 , 培养 温度 2 一
得该作物在传统种植区无法继续栽种 。 根据 巧 C , 光强 1 5 0 L x , 每日照光 1 0h 左右 。
目前病况和类似 的历史教训 , 只有培育车前 2 结果
抗病品种 , 才能根本解决生产问题 。为了探索 2 . 1 植物激素对外植体脱分化及再分化的
车前抗病育种 的快速途径 (与常规 育种比 调控 : 在基本培养基 MS 中添加不 同的植物
较 ) , 采用生物技术创造车前抗病株是本研究 激素用于诱导外植体脱分化和再分化芽 。 实
的 目的所在 , 而车前离体培养技术的建立是 验 结果 (表 1) 表 明 , 最适诱导车前外植体脱
利用生物技术筛选抗病种源的必备手段 。 目 分化产生愈伤组织的培养基是单独添加生长
前关于车前离体培养技术的理论和应用研究 素 2 . 4 一 D 的“ 6 ” 、 “ 7 ” , 其诱导率最高 (90 %以
国内外尚未见报道 , 笔者近年来对车前的离 上 ) 。 但生长素类激素抑制再分化芽的发生 ,
体培养技术进行了探索 , 为深入诱变筛选抗 芽的再生只有在无外源生长素存在的培养基
病突变体打下了良好的基础 。 “ l ” 、 “ 2 ” 、 “ 3 ”上才发生 , 并且车前外植体芽器
1 材料与方法
,
Ad d
r e ss : T u Y is h e n g
,
Jia n g x i Pr o v in e ia l A e a d e m y o f Sc i
e n e e s , N a n e h a n g
一
2 9 6
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官的分化更依赖 6 一BA 的调 节 , 而 K T 的效
果不甚明显 , 6一B A 对车前再生芽诱导作用的
时问进程见图 1 。 当生长素与细胞分裂素配
合使用时 , 车前愈伤组织再生根的分化活跃 ,
几乎试验使用的若干种两类激素不同浓度组
合的培养基 , 均能刺激发生繁茂的再生根 , 但
无再生芽发生 。 这说明车前离体培养脱分化
和再分化不同器官时 , 所要求的植物激素各
类及其水平有很大差别的 , 激素的调节对车
前组织培养极关重要 。
表 1 不同激紊处理车前外植体
脱分化及器官形成的影晌
伤组织开始转绿 , 并逐渐发生芽形成芽丛 , 每
个外植体分化芽多达几十个 , 少则 5 个 ,它们
分化芽的能力强弱顺序为 : 下胚轴 > 茎尖 >
子叶柄 > 子叶 , 由此可知 ,进行车前离体培养
注重选择外植体材料 , 对其所建成的培养系
统规模才可能庞大 , 它将对筛选车前离体培
养变异株是有利的 。
衰 2 车前外植体诱导的 t 伤组织
和再生芽能力的比较△
外植体 盒伤组织 再生芽诱导率 (写 ) 分化率 (% ) 芽的生长情况
培养基
代号 激素(m g / L ) 材料 鼎骤舞。魏 魏
料十粉+3159.6一 B A 0 . 下胚轴子叶柄
6
一
B A
下胚轴
子叶柄
6 一BA
下胚轴
子叶柄
7 斗 十
1 +
N A A
下胚轴
子叶柄
28
2 8
7 0
6 1
0582302169.52110加7N A A 下胚轴子叶柄
2 , 4 一D l
下胚轴子叶柄
2 , 4一D 3
下胚轴
子叶柄
++十++8 6 一B A I , N A A 下胚轴子叶柄
O宁泊任b
.⋯0户卜JL311一了丹产‘伪,翻9 6 一B A I , 2 , 4 一D l 下胚轴子 叶柄
1 0 K T
下胚轴
子叶柄
1 1 K T I
,
2
, 4一D l
下胚轴子叶柄 ;;: ;
下胚轴 10 0 10 生长正常的芽丛
茎尖 98 93 . 8 生长正常的芽丛
子 叶柄 10 8 2 . 5 生长正常的寡芽
子叶 98 57 . 2 生长正常的寡芽
胚根 94 0 有根分化 , 无芽发生
幼 花梗 10 。 。 有根分化 , 无芽发生
幼 花招 10 0 0 有根分化 , 无芽发生
△诱导愈伤组织培养基为 M S十 2 , 4 一D 3 m g / L , 芽分化培养
基为 M S + B ^ l m g / x
2
.
3 试管苗的生根和移栽 : 自再生芽从分化
培养基上长出后 , 再培养半个月 , 无根苗具有
两 叶一心 , 便可将苗基部从组织块上切下分
割 成单芽 , 接种 到 M S + 6 一B A o . 5 m g / L +
N A A 0
.
lm g / L 培养基上生根 , 经一周左右
试管苗基部长出 3一 5 条粗壮的根 , 再培养一
周后 , 完整的再生植株可移出试管 , 种植在细
沙盆中 , 每 日定期浇水 2 次 , 玻璃罩保温 , 培
养温度 15 ℃左右 , 车前移栽苗 98 %能成活 。
半个月后 , 成活的移栽苗有新叶长出 , 这时可
以截去玻璃罩 , 酌情浇水 。车前植株再生及其
移栽苗见图 2 。
12 不加激素 下胚轴子叶柄
衫馒泌洲欺阵, 基本培养基 : M S “ + ”表示有芽 ( 根 )分化
“ + + ”表示分化率高 “一 ”表示无分化能力
2
.
2 车前不同器官的外植体筛选 : 试验接种
了 7 种不同器官的外植体 (表 2 ) , 在 MS 十 2 ,
4一D 3m g / L 培养基上 , 愈伤组织诱导率在各
材料之间差别不明显 。 但外植体在分化培养
基 M s 十 6 一B A l m g / L 上再分化芽的能力存
在明显的差别 , 在分化培养基上 10d , 切 口愈
《中草药 》1 9 9 6 年第 27 卷第 气期
堵界时 间 ( d )
图 1 6 一B A 对车前下胚轴芽
器官形成的诱导作用
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