全 文 ：土海免疫学杂志 19 8 1年第 1卷第6 期
琼脂糖浓度及基质内离子强度对长叶车前
花叶病毒及其抗体免疫扩散试验的影响
复旦大学生物系
免疫沉淀试验多以琼脂糖为基质 。 国外
有许多学者在应用琼脂凝胶 、 明胶作为基质
时 ,对一些影响形成抗原抗体沉淀线的因素 ,
从不同角度进行研究 ,取得一定的进展 1[ , , 〕。
本实验主要探讨不同琼脂糖浓度和缓冲
液的离子强度对形成免疫沉淀线的影响 。 结
果发现在同样的条件下 , 上两因素均可影响
抗原的检测灵敏度 。 因此 , 掌握合适的琼脂
糖浓度和缓冲液的离子强度 , 可提高检测抗
原的灵敏性 , 从而使实验经济有效 。
材 料 和 方 法
一 、 长叶车前花叶病毒的纯化及其抗血
清的制备 〔 , 〕。
二 、 不同浓度抗原的制备 : 将长叶车前
花叶病毒 (1 毫克 /毫升 )分两 组用 p H 7 · 5 .
0
.
2万 硼酸缓冲液递倍稀释成 1 :2 ~ 1 : 64 和
1 : 1 0 0wt l : 6 4 0 0
。
三 、 不同浓度和不同离子强度琼脂糖板
的制备 :
(一 ) 在载玻片上 ( 7 . 5 x 2 . 5 厘米 ) 分别
用 p H S · 6 , 。 · IM 的巴比妥钠盐酸 缓 冲液
( 18毫升 I N H C I 和 1 8 克巴 比妥钠 ,加蒸馏
水至 1 0 0 0 毫升 )制备成 0 . 6% 、 0 . 8% 、 1 . 0拓 、
1
.
2另四种不 同浓度的琼脂糖板 。
(二 ) 浇制 1拓琼脂糖浓度 , 但缓冲液离
子强度分别为 0 · 1 、 0 . 0 5 、 0 . 0 1 、 0 . 0 0 5 、 0 . 0 0 1 、
0
·
0 0 0 5万。
4
. 按常规方法进行双向免疫扩散 和对
流免疫电泳试验 。
朱培冲 陆妙康
条件下进行双向免疫扩散 , 由于琼脂糖浓度
不同 ,所得结果就不同 (表 1 ) 。
表 1 不同琼脂糖浓度对双向免疫
扩散检测抗原的影响
2 4 8 1 6 3 2
0
.
6 啼· + + 一 { { -0 . 8 + + + + 十
j
-
1
。
0 十 + + 一 {
-
1
。
2 + +
实验表明 , 用 0 . 6% ~ 0 . 8拓琼脂糖检测
抗原敏感度较 1 . 2%高 。
二 、 用 1% 琼脂糖浓度 , 但由于配胶 缓
冲液离子强度不同 , 双向免疫扩散的结果亦
不同 (表 2 ) 。
表 2 配胶缓冲液的不同离子强度对双
向免疫扩散检测抗原的影响
卜籍、 2 4 8…1 6 3 2 64{
0
。
1 十 十 十 +
}0
.
05 十 + 十 +
0
。
0 1 十 + 十 十
0
.
0 5
+ + 十
O
。
0 1
十 十 +
结果 和 讨 论
一 、 用同一病毒抗原及抗血清 , 在同样
实验表明 , 最适的缓冲液离 子 强 度 为
0
.
01 M
, 过高过低均可使敏感度减低 。
三 、 用同一缓冲液配胶 ( 巴 比妥钠盐酸
缓冲液 , p H S . 6 ,离子强度为 .0 1万 ) , 在同样
条件下进行电泳 (巧 OV , 1 小时 ,下同 ) , 由于
配胶浓度不 同 , 以致检测结果不 同 (表 3 ) 。
实验表明 , 用 。 , 6拓琼脂糖检测抗原 敏
表 3不同琼脂搪浓度对对流免
痰卑泳检洲杭娜的影响
表 4配胶级冲液的不同离子弧度对对
甲 ` , 率牟稗电泳梦洲林原的形响
磕嵘髦气 1 o 2o 遵0 0 以幻 13 2阅16( X)
O
。
6 + + + 十 …l `0 . 8 + + 十 +1 . 0 + + +1 一 2 + + +
2 0 0 14印 旧口】〕 旅翻640
感度较高 。
四 、 对流免疫电泳条件和配胶浓度均相
同 , 但配胶缓冲掖离子强度不同 ,检测结果亦
不同 (表 4 ) 。
实验表明 , 最适的缓冲液离 子弧度 为
0
.
01 万 ,过高过低均可使敏感度减低。
上述结果 , 可以看到凉脂糖浓度和配胶
缓冲液的离子强度 , 对抗原抗体沉淀线的形
成有明显影响 。 在一定范围内 , 琼脂糖浓度
越低越有利于免疫沉淀线的形成 ,同样 ,配胶
缓冲液的离子强度也存在着合适的数值。
参 考 文 献
[ 1 ]
[ 2
、
]
[ 3 ]
W e t t
e r G : V i r o l o g y
,
3 1 : 4湘 ~ 动 7 , 1翻打
V妞 R e g e n m o r t e l M H V e七 肠 l : V i r o l o g y ,
43
: 310
,
1即 1
朱培坤等: 复旦学报 (自然科学版 ) ,20 : 1 92 , 198 1
第五届国际免疫会议 (第一次公告 )
(摘 要 )
第五届国际免疫会议将于 19 83 年 8 月 21 ~ 27 日在日本京都的京都国际会议厅
召开 。 此次会课是在免疫学会国际联合会赞助下由日本免疫学会负责主办的 。
会议的科学内容包括讨论会 、现场会和海报展出 。
总计有 , 3干讨论会 ,每个讨论会均有特邀发言人 。 至目前为止所确定的题目有 :
1
. 免疫球蛋白 , 生物学特性的相关结构 , 2 .免疫球蛋白基因 : 组配和表达 , 3 ,免疫调
节作用 : 啤络和线路 , ` T 和丑淋巴细胞的个体发生和分化 ; .5 B 细胞杂交瘤和克
隆 ; 6 . T细胞克隆和杂交细饱的功能 、 产物和应用 , .7 淋巴细地功能的遗传控制 ; 8二 T
淋巴细胞的识别结构归 .主要组织相容性复合体的遗传 、 生化和功能 ; 10 . 琳巴因子的
生物学和生物化学 ; 1 . 淋巴细胞活化和细胞内介质 ; 12 .补体索统的生物学 ; 13 . 健康
和疾病情况下人的淋巴细胞亚群 , 14 .速发型超敏感性 ; 15 .实验和临床免疫病理 ; 16 .
免疫监视包括天然免疫 , 17 . 肿瘤免疫 ; 18 .对细胞内寄生虫 (包括病毒 ) 的免疫应答 ,
19
.免疫失常的操纵 ; 2 0 .单克隆抗体的应用 , 21 . 巨噬细胞的反应和效应功能 .
其他题目待选 .
、在讨论会进行的同时召升现场会和展出海报 . 希望现场会能使从事具体工作的
研究者们就该领域的特殊间题进行讨论 , 并交换新的情报 。 其内容将包括免痊学的
许多领域 。 “ 免疫学进展 V ”将在会议后尽快出版。 会议使用英语 , 无同声翻氏 . 有
关现场会的标题将在第二次公告中告知 。 , ( 吴安然 )