全 文 ：Det e rm in a t io n o f Du l eit o l in T ra d it io n a l i h Cn e e sCo mPo un d P ri e s riPt io n
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.
灵芝破壁抱子与不破壁抱子的显微镜
观察与生化测定比较研究△
北京理工大学材料科学研究中心 ( 1 0 0 0 8 1 )
中国无锡三联高科技开发公司
杨新林 米 朱鹤孙 赵 东旭
徐建兰 匡 群
摘 要 首次对灵芝破壁抱子与不破壁饱子进行了初步的比较研究 。 显微镜下观察 ,破壁饱子粉
与不破壁抱子粉的形态明显不同 , 采取水提 、 酸提 、 水煮三种不同的提取方式 , 破壁饱子粉提取液
中还原糖与多肤含量都明显高于不破壁抱子粉 , 结果提示经过破壁处理后 , 灵芝抱子中的化学成
分更容易被提取出来 。
关键词 灵芝饱子 破壁 还原糖 多肤
近年来 , 随着灵芝人工栽培技术的发展 ,
规模收集其生殖细胞一一灵芝抱子的难题得
到解决 ,逐步开展了对灵芝抱子的研究 。有报
道灵芝抱子具有降血糖作用 〔`〕 , 能够调节机
体免疫功 能 〔幻 , 对磷酸肌酸激酶 C( P K ) 含量
在免疫性肌炎大鼠肌肉中的下降及血清中的
上升亦有拮抗作用 〔3, 。 临床试用治疗萎缩性
肌强直等疑难疾病有较满意效果以 〕 。 灵芝抱
子的化学成分也有报道 〔5 一 7〕 。 但以往研究采
用原料均为不破壁抱子粉 , 本文首次对破壁
抱子与不破壁泡子进行初步的 比较研究 。
1 材料与方法
1
.
1 灵芝抱子的显微镜观察 :灵芝抱子用适
量蒸馏水 配 成悬浮液 , 涂片后 直接在 A x -
io v e r t 4 0 5M 型 荧光倒 置 显微镜 (德 国 O P -
T O N 精密仪器有限公司 )上观察 , 进行显微
摄影 。
1
.
2 灵芝破壁抱子粉与不破壁抱子粉提取
液的制备
1
.
2
.
1 酸提和水提 : 称取破壁与不破壁灵芝
抱子粉 ( 由中国无锡三联高科技公司生产并
提供 )各 2 9 , 分别置于 一 20 m L 试管 中 , 加
入 2 0 m L Z %盐酸溶液 (酸提 )或蒸馏水 (水
提 ) , 在沸水浴中加热 Z h , 冷却后离心 2 次 ,
每次 1 5 。。 m L 、 10 m ni , 收 集得 上清 液约 5
m L
, 分装冻干一 20 ℃保存 。
1
.
2
.
2 水煮 : 称取破壁与不破壁灵芝抱子粉
各 29 , 分别置于一 5 0 m L 平底烧杯中 , 加入
生 、州 d毯 5 5 : 卜砂9 X i旦l远, R 瞥 e a r e h C e只t性r o f M at e于ia l s s c i弓n e兮, B e ij i只g 互n ` v e r s i t y o f T e c h n o lo g e , B e i j in g杨新林 , 男 , 30 岁 , 傅士 , 剐研咒员 , 1 9 2一07 毕业十北京帅 范大学生物系 , 获理学博 上学位 。 1 9 9 2一 0 9~ 1 9 9 4一 0 9 在 中国科学院动物研究所从事博士后研究 : 人 早期滋养层组织和绒毛膜上皮癌细胞系中的激活素和抑制素的研究 。 1 9 9 4一 。9 到北京理工大学材料科学研究中心工作 , 受聘为生物技术与生物材料研究室副研究员 , 现担任该室领导工作 , 研究的主要方向 : ( 1) 灵芝袍子抗癌成分的分离鉴定与作用机理研究 , (2 ) C 6。的生物学效应的研究 , ( 3) 复合生物驻极体材料的制备与应用研究 。 正主持国家重点科技项 目 (攻关 )计划 l 项 , 参加的 自然科学基金项 目 2 项 , 自然科学 基金重大项 目 1 项 , 负责校优秀中青年教师基金 l 项 , 共发表各类文章 30 篇 。△ 国家科委主任基金资助项 目
《中草药 》 1 9 9 7 年第 28 卷第 12 期 · 7 2 1 ·
约 10 0mL 蒸馏水煮 0 3mn i, 冷却后离心 , 收
集得上清液 I 。 沉淀再加约 1 0 m l一 蒸馏水 ,
重复上述步聚 2 次 , 得上清液 I 和 巫 , 分装冻
干一 20 ℃保存 。
1
.
3 样品还原糖含量的测定 ( S o m og y i铜试
剂比色法 ) : 精密配制梯度的葡萄糖标准溶液
(0 一 3 0 0 拜g /m L ) , 取标准溶液和 样品 溶液
( 必要 时进行稀 释 ) 各 0 . 5 m l一 , 用 S o m o g y i
铜试剂比色法在 5 80 n m 处测 O D 值 , 重复 3
次取平均值 , 绘制标准 曲线并求得样 品的还
原糖含量 。
1
.
4 样品多肤含量的测定 ( F ol ni 酚法 ) : 精
密配制梯度 的牛血清 白蛋 白标准溶液 (0 一
1 0 0 0 拌g /m l一 ) , 取标准溶液和样品溶液 (必要
时进行稀释 )各 0 . 1 m l 矛 , 用 F o l i n 酚法在 5 5 0
n m 处 测 O D 值 , 重复 3 次取平均值 , 绘制标
准曲线并求得样品的多肤含量 。
2 结果
2
`
1 显微镜观察 : 图 1 显示 , 不破壁泡子完
整 、 丰满 , 双壁结构清 晰 , 个体形 态一致 ( 图
I A )
: 破壁抱子则双壁结构破坏 , 根据程度不
同大致可分为轻度破壁 (壁穿孔 ) 、 中度破壁
(截头 )和重度破壁三种不同的形态 ( 图 I B ) 。
原性糖和多肤的测定实验结果表明 , 无论采
用酸提 、 水提还是水煮的提取方式 , 破壁抱子
粉提取液中还原性糖和多肤含量均明显高于
等量的不破壁抱子粉 , 且破壁抱子粉中还原
糖和多肤显然 比不破壁抱子粉更易提取 。
表 1 灵芝破壁抱子粉与不破壁抱子粉
提取液中还原糖含量的比较
提取方式 破壁抱子粉 不破壁抱子粉 ( B一N) N/
( B ) % ( N )% 欠 1 0 0%
水提 0 . 0 7 0 . 0 4 5 6
酸提 0 . 0 8 0 . 0 5 65
水煮 0 . 3 7 0 . 2 0 8 5
表 2 连续 3 次水煮灵芝破壁抱子粉与
不破壁抱子粉 , 各次提取液中还
原糖含量的比较 (% )
第 1 次 第 2 次 第 3 次 总 计
破壁抱子粉 7 1 . 6 2 3 . 9 4 . 5 1 0 0
不破壁抱子粉 6 4 . 9 18 . 5 1 6 . 6 1 0 ( )
表 3 灵芝破壁抱子粉与不破壁抱子粉
提取液中多肚含量的比较
提取方式 破壁袍子粉 不破壁抱 子粉 ( B 一N洲
( B ) % ( N ) % 又 1 00 %
水提 0 . 67 0 . 5 7 18
酸提 2 08 1 . 5 3 3 6
水煮 2 . 35 1 . 76 34
表 4 连续 3 次水煮灵芝破壁抱子粉与
不破壁抱子粉各次提取液中多肤
含量的比较 ( % )
图 1 不破壁抱子粉 ( A )与破壁抱子粉 ( B ) 的显微照片
经粗略计算 , 抱子的破壁率约为 60 一 80 % 。
2
.
2 还原糖含量 测定 : 见表 1 。 连续 3
次水煮灵芝破壁抱子粉与不破壁抱子粉各提
取液中还原糖含量比较见表 2 。
2
.
3 多肤含量测定 : 见表 3 , 连续 3 次水煮
灵芝破壁抱子粉与不破壁抱子粉 , 各次提取
液 中多肤含量的比较见表 4 。
3 讨论
3
.
1 显微镜观察表明 , 破壁抱子粉显示出不
同的形态 , 与不破壁抱子粉形成明显对照 。还
.
7 2 2
.
第 l 次 第 2 次 第 3 次 总 计
破壁抱子粉 56 . 8 3 8 . 8 4 . 4 10 0
不破壁抱子粉 54 . 5 3 5 . 5 10 . 0 10
3
.
2 灵芝抱子外包有双层厚壁 , 其破壁问题
一直没有解决 。我们经过多年探索 , 初步解决
了这一难题 。 本文结果表明 , 经过破壁处理
后 , 灵芝抱子中的化学成分更容易被提取 出
来 。 破壁抱子粉的醇提取液 比不破壁抱子粉
具有更强的体外抗肿瘤活性 。 灵芝抱子具有
重要的潜在药用价值〔`一 ` 〕 , 我们的研究说明 ,
破壁处理技术将为开发利用灵芝袍子提供有
力的手段 。
参 考 文 献
1章灵华 , 等 . 中草药 , 1 9 9 3 , 2礴( 5 ) : 2 4 6
2 章灵华 , 等 . 中国免疫学杂志 , 1 9 94 , 1 0 ( 3 ) : 1 6 9
3 刘耕陶 . 中国药理通讯 , 1 9 9 3 , 9 ( 3 ) : 4
侯翠英 , 等 . 植物学报 , 1 9 5 8 , 3 0 ( 1 ) : 66
富慧谛 , 等 . 中医杂 志 , 1 9 8 1 , 2 6 ( 2 ) : 2 2
李虹奇 , 等 . 咋l草药 , 1 9 9 3 , 24 ( 10 ) : 5 16
陈若芸 , 等 . 药学学报 , 1 9 9 1 , 2 6 : 4 30
( 1 9 9 7
一
0 3
一
2 8 收稿 )
S t u d ie s o n t h e D i f f e r e n e e s B e t w e e n S p o r o d e r m
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B r o k e n a n d N p n b r o k e n S p o r e s o f
L i n g z h i (Ga
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a l u e i d u m ) b y M ie r o s c o P i c E x a m i n a t i o n a n d B io e h e m i e a l E s t im a t i o n
Y a n g X i n li
n , X t , J ia n la n
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u e in g s u g a r s a n d p o ly p e p t id e s f r o m S B s p o r e w a s m u e h h ig h e r t h a n th a t f r o m S N s p o r e e x
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e n t r e a tm e n t o f s p o r e
.
薄层扫描法测定血脂平胶囊中洛伐他汀的含量
沈阳军区总 医院药剂科 (1 1 0 0 5) 宋洪涛 寮 郭 涛 实鹤鸣 ” 赵文军 “ ` 涛惠鸥 ” “
摘 要 采用双波长薄层扫描法对血脂平胶囊中的主要有效成分洛伐他汀进行了含量测定 。 结果
洛伐他汀在检测范围内线性关系良好 , 相关系数为 。 . 9 97 , 加样回收率为 98 . 1% , R S D 为 2 . 25 %
n( 一 5 ) 。 本法可用于血脂平胶囊中洛伐他汀的含量测定 。
关键词 皿脂平胶囊 洛伐他汀 薄层扫描法 含量测定
血脂平胶囊的主要成分为 自制红 曲 。 其
中含有 3一经基一 3一 甲基戊二酞辅酶 A ( H M G -
C o A )
、 还原酶抑制剂洛伐他汀 ( lo v a s t a t i n )
及 其它相关成分 。 红 曲始载于 《饮膳正要 》 ,
《本草纲 目》也有详细记述 , 《 中国药典 》 ( 19 95
年版 )一部收于 附录中 , 具有活血化疲 、 健脾
消食之功效 。 我们利用现代生物技术制备的
血脂平胶囊有 明显降低血脂作用 。 为控制血
脂平的质量 , 我们利用双波长薄层扫描法对
其中主要有效成分洛伐 他汀进行了含量测
定 。
1 仪器与试药
C S
一
9 30 双波长薄层扫描仪 ( 日本岛津 ) ;
P B Q
一
1 型薄层板自动涂布器 (重庆南岸新力
实验电器厂 ) ; 层析用硅胶 H F 2 5 4 (青岛海洋化
工厂 ) ; CM C 一N a( 上海化学试剂采购供应站
分装厂 ) ; 化学试剂均为分析纯 ;洛伐他汀 (美
国默莎东大药厂 ) ;血脂平胶囊 (本院自制 ) 。
2 方法与结果
2
.
1 薄层层析及扫描条件 : 。 . 5% CM C 一 N a
,
A d d
r e s s : S o n g H
o n g t a o
,
S h
e n y a n g G e n e r a l H o s p i t a l o f S h e n y a n g M ili t
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宋洪涛 , 男 , 主管药师 , 药学硕士 。 1 9 8 9 年毕业于第二军医大学 , 现干沈阳药科大学攻读
R e g i o n
,
S h
e n y a n g
药学博士学位 。 致力于中药复方缓释制剂的研究 , 已发表论 文 10 余篇 , 1 9 93 年出版 r 《流动注射分析的理论与医疗实践 》 (第 三作者 ) , 参加研究的 “ 疹痒宁口服液的研 究 ”获 1 9 9 2 年度军队科技进步 四等奖 , “ 回春至宝 日服液的研究,’( 第三作者 )获 1 9 9 6年美 国世界 传统医学 突出贡献金奖 , “ 心舒 口服液的研究 ” (第四作者 )获 1 9 9 6 中国张家界 国际 中西 医药学会二等奖 。
* * 一上海第二军 医大学药学院 二 , , 一沈 阳军 区 几O 二 医院 * * 关 二 一天津空军医院
《中草药 》 1 9 9 7年第 28 卷第 12 期 . 7 2 3 .