全 文 ：土贝母试甲在动物体内的吸收 、 分布 、 代谢和排泄
陕西省卫生学校 (西安 7 1 0 0 6 8 ) 王永清介 于立 坚“ 马润娣二 姜风 良 陈 萍二
摘要 土贝母贰甲是从土贝母块茎中分离出来的 , 具有强抗癌和抗促癌活性的巨环三菇皂武。 本文研
究其在动物体内吸收、 分布、 代谢和排泄的特点。
关键词 土贝母戒甲 吸收 分布 代谢 排泄
从土贝母块茎中分离出的土贝母贰甲 (下称贰甲 )具有强抗癌和抗 促 癌活 性 , 毒 性低
〔卜 3〕。对慢性宫颈炎疗效理想 , 对宫颈肥大增生效果尤好。 基于前文 已报告的贰甲定量分析
方法〔4 〕, 我们对其在动物体内的吸收 、 分布 、 代谢和排泄规律进行 了研究 。
1 材料
仪器 : 分光光度计 、 日本岛津 U V 一26 5F W 。 微量进样器 , 上海注射器三厂 。
动物 : 陕西省中医药研究院动物室提供 。 N IH 小鼠 , 体重 18 一 2 4 9 ; 封 闭 群 S D 大鼠 ,
体重 15 0 ~ 2 5 0 9 , 雌雄兼有 。
贰甲 : 本室提取分离 , 临用时配成所需浓度的水溶液。 实验中其他化学试剂皆为分析纯 。
2 方法与结果
2
.
1 生物样品贰 甲分离条件的探索 : 先后用不 同浓度的三氯醋酸 , 各种试剂处理组织匀浆 。
实验结果表明 , 各种组织研成 1 : 3匀浆后 , 加匀浆 3倍体积的甲醇 , 振摇 sm in , 4 0 0 o r/ m in 离
心 10 m in , 取上清液蒸干后层析 , 是从生物样品中分离贰甲的较好条件 。
给动物注射不同剂量贰甲 , 在一定的时间取组织匀浆 、 分离 、 层析、 确定 最 佳 用 药剂
量 。 结果表明 , 肌肉注射以60 m g / k g , 静脉注射 30 m g / k g 为宜 。
2
.
2 生物样品中贰甲的分离测定
2
.
2
.
1 提取 、 分离及测定方法 : 将生物样品心 、 肝 、 脾 、 肺 、 ’肾和脑组织 lg 分 别 研 成 l :
3 匀浆 。 另取血浆 lm l, 尿液 l m l。 按前述方法处理样品 , 用微量进样器 加入 5 。件1甲醇 , 振摇 ,
取 1 0时甲醇溶液点于硅胶 G 层析板上 , 以氯仿一甲醇 一水 ( 5 0 : 2 7 : 7 ) (下层 )的混合溶剂为展
开剂 , 常规层析 。 碘蒸气显色后 , 划出贰 甲斑点 。 待退色后 , 刮下试 甲斑 点处硅胶转移到带
塞磨 口试管中。 同时在薄层板上他处刮下贰甲斑点面积相同的硅胶作空 白。给各试管加入 1唱
香草醛冰醋酸溶液o . Zm l, 高氯酸o . 4 m l, 摇匀 , 密塞 , 放恒温水浴 L!“ , g O O C 加 热 zo m in ,
取出后 , 立即置水中冷却。 将试管保持在 15 一 2 0 “C条件下 , 加冰醋酸 4 . o m l, 摇匀 。 同法作
空白 。 经 4 0 0 o r / m i n 离心 l o m in , 取上清液于 4 7 4 n m 处测定吸收率 。
2
.
2
.
2
. 标准曲线及 回收率 : 将不同浓度的贰甲加入对照大鼠血浆和尿液中 , 提取和测定方
法 同前 , 以浓度对吸收度绘制贰甲在血浆和尿中回收的标准曲线 (见图 l ) 。 变 数 经处理 ,
呈直线相关 , 相关系 数r分别为 0 . 9 9 0 3 和 0 . 9 9 7 5 。 贰甲在血浆中及勿川“的平均回收百分率分
别为 8 0 . 7 5 %和 8 5 . 0 6 % 。
2
.
3 组织分布 : 20 只小鼠 , 肌注贰甲 ( 60 m g / k g ) 。 lh 后处死 , 取各组织研成匀 浆 ( 10 只
动物的组织匀浆作为一个样品 ) , 提取分离测定贰甲含量 。 4 只大 鼠 , 肌注 60 m g / k g 贰甲 , l h
后死处 , 取各组织研成匀浆 ( 2只动物的组织匀浆作为一个样品 ) , 结果见图2 , 贰甲肌注后
*
A d d r e s s
:
W
a n g Y o n g q i n g
,
S h a n , 1 Pr o v i n e ia l H e a lth s e h o o l
,
x i
一
a n
. * 陕西省 中医 药研究院 生化研究室
2 5 6
在肝和脾内含量较高 , 血 、 沛!中 l心次之 , 肾和脑较低 。
2
.
4 贰 甲与血浆蛋白及组织蛋白 的 结 合率 :
用平衡透析 法 测 定 。 大 鼠 血 浆 与 p H 7 . 2 ,
。. 1 54 m ol / L 缓 冲 液按 1 : 4稀释 , 肝 肾 组 织
八泛即己暇妞琳瀚
喘姗0.15Q。
甘公彭
1 0 2 0 3 0 4 0
成 甲用 量 扣幼
5〕 6 0
图 1 自大鼠血浆和尿液 中回收试贰甲标准曲线
1
一尿 2 一血浆
图 2 试甲肌肉注射1h 后在小鼠 、 大鼠体内的分布
口大鼠肌注后 l h 曰小鼠肌注 后l h
以上述缓冲液制成 1 : 5匀浆 。 缓 冲液中每 12 m l内加入贰 甲2 0 0协g 。 每 种 组 织 及血浆同法作
2份 。 将透析装置放在迥旋式振荡器上振荡透析4 h , 再静置透析 1 2 h 以达到平衡 。 分别测定半
透膜内外贰甲的 含量 , 计算贰甲与蛋白结合的百分数 。 结果表 明 , 贰甲与血浆 、 肝及’肾组织
蛋白结合率分别为 1 7 . 10 % 、 2 8 . 1%和 2 0 . 3 5 % 。
2
.
5 药物从 胃肠道的消失 : 小鼠 14 只 , 分别以贰甲 1 0 m g / k g 灌胃 , 于给药后不同 时 间 各
处死 2只小 鼠 。 取 出全部胃肠道及内容物 , 制成匀浆。 同法作空白对照 , 测定残存 于 消化道
及内容物中的药物含量 。 以给药后即刻处死动物 , 测定胃肠中贰甲的回收 率 为 1 0 % , 给药
后 0 . 5 , l 、 2 、 4 、 8 、 12 h的回收百分率 见图 3 。 贰 甲从胃肠道消失较快 , 在灌胃后 0 . 5 、 1 、 2 、
4
、
8 1 2 h 的回收率分 凡!IJ为 9 1 . 8 0 % 、 5 1 . 9 6 % 、 6 0 . 6 6 9百、 4 0 . 9 8 9石、 1 8 . 0 3 %和 。。
人 为了探讨贰甲在胃场道是否被破坏 , 进
\ 行 了离体 胃肠道孵育买验 。 取小 鼠 6只 , 随
G 9 1 0 12
日于卜月( h )
图3 试甲自胃肠道的消失
机分为 2 组 。 于禁食 12 h 后处死 , 迅速取出胃
及sc m 小肠 。 分 别结扎两端后 , 注入贰 甲0 . 5
m g 的溶液 , 置入装有 5 m l氧 饱 和 K r e bs 氏
液的培养皿中。 3 7 “C振荡孵育Z h 。对照组室温
放置 。 将胃及肠道 同孵育液一起制成匀浆 , 测
定贰 甲的回收率 。 以对照组为 1 0 % 胃平均
回收为6 6 . 9 3 % , 小肠平均 回收8 9 . 0 3 % , 可
产次„并邻宜玲侣
见贰甲在孵育后的胃及小肠中的回收 一百分率较低 , 提示贰甲在胃肠道受到一定程度的破坏 ,
尤其是在孵育后的胃中较明显 。
2
.
6 排泄 : 取 10 只小鼠 , 按 60 m g / k g 肌注贰甲后 , 取胆汁 , 收集尿液 ( 5只小 鼠的标本混匀
作为一个样品 ) , 测定贰甲含量 。 层析结果显示 , 在胆汁和尿液 中无贰 甲 。 推测贰甲可能以
代谢产物的形式从尿液或胆汁中排泄 。
3 讨论
薄层层析光谱法分离及测定生物样品中试甲含 最的方法能 区分其 原形物及代谢产物 , 特
异性较高 。
《中草 药 》 19 9 4年第 25 卷第 5期 · 2 5 7 .
小 鼠口服贰甲后 , 药物从 胃肠道消失较快 。 离体胃及小肠孵育实验结果提示 , 贰甲在胃
肠道受到一定程度的破坏 , 尤其是在胃中。 这与贰甲灌胃所显示的抗瘤效果较低的实验结果
相一致。
药物与血浆蛋白的结合程度 , 对其在体内分布 、 代谢等影响颇大 。 贰甲与血浆蛋 白结合
率较低 , 易从血液 内消失 , 因而不易产生蓄积毒性作用。 贰甲在体 内的分布广 , 但在肝 、脾 、
血和肺等组织或器官内含量高 , 这样分布的相对特异性为我们使用贰 甲来治疗肿瘤提供 了条
件 。 贰 甲在心 、 ’肾和脑 内的含量低 , 这一特点有利于减少它对这些器官的副作用 。
参 考 文 献
Y u L J
, e t a l
。
T h e s is S e le c ti o n
,
I n te r
-
n a t io n a l S e i e n tific C o n fe r e n e e o n T r a
-
d i tio n a l C h in e s e M e d i e in e
,
S h e n y a n g
,
C h in a
:
1 9 9 1
。
7 40
马润娣 , 等 。 科学通报 , 1 9 9 1 , 3 6 : 1 4 2 1
Y u L J
, e t a l
。
I n t J C a n e e r
,
19 9 2
,
5 0
: 6 3
王永清 , 等 . 中国中药杂志 , 1 3 9 3 , 1 8 ( 6 ) : 3 5 5
( x 9 9 2
一 0 2 一 1 0 收稿 ,
1 9 9 3 一 0 8 一 0 7修 回 )
(上接第2 5 0 页 )
3
.
2 化学成分研究结果表明 , ,户华枷蔽和棚威根茎所含的黄酮类 成分 不 同 , 总 黄 酮 含量
也有显著差异 。 对于其化学成分与疗效间的关系 , 有待进一步研究 。
3
.
3 本实验采用大鼠后腿股骨下端制作骨损模型 , 并利用四环素与新生骨结合产生 荧光 的
特性辅助进行效果判别 , 实验证明本模型具有制作简便 、 实验周期短 、 结果可 靠 等 优 点 。
参 考 文 献
江苏新 医学院 . 中药大辞典 . 上海 :
版社 , 19 7 9 。 1 6 5 8
广西 医学院耳鼻喉科 . 新医学 , 1 9 7 7
1 6 8
卜海人民出
,
8 ( 4
一
5 )
:
王维信, 等 。 中国药学会庆祝建会80 周年学术会
议 。 1 9 8 7 。 0 6 一k 一 2
赵湘洪 , 等 . 中药通报 , 19 87 , 12 ( 10 ) : 41
( 一9 9 3 一 0 4 一0 2收稿 )
山番荔枝中的细胞毒生物碱
W u Y a n g
e h a n g
, e t a l
.
Ph y t o e h e m
,
1 9 9 3
,
3 3 (2 )
: 4 9 7
山番荔枝A 朋on a o on t a o a为一种常绿小树 , 原产印度和巴西 , 后移植到我
国台湾 。 其中有多种生物碱 , 其甲醇提取物在体外筛选中对 人 K B 细 胞 、 A 一5 49
肺癌 、 H T 一29 结肠癌细胞及鼠类P一38 8 及L 一1 2 1。白血病有细胞毒作 用 。 今报道
从该提取物中分得i个新菲类生物碱 , 定名a n n o r e t in e , C : 。H : 。N O : , 油状物
经光谱及化学分析证明其为 3一径基一4一甲 氧基一N 一 甲基一四氢 毗 咤 ( 4 , 3一a )菲
( I )
, 见图 。
本品对K B 细胞 、 P一3 5 8 、 A 一5 理9及 H T 一2 9等细胞 的 E D 。 。 分 别 为 1 4 . 4 7 、
3
.
3 3
、
4
.
4 6及 2 . 5 1 1‘g / m l。 (史玉俊摘译 )
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2 5 8
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