全 文 ：· 药剂与工艺 ·
高效薄层色谱法检测黄藤素中掺杂的黄连素
云南师范大学化学系 (昆明 6 5 9 0 02)
云南省药品检验所
郑 萍 专 谢笑天 李国宝
范亚刚
摘 要 采用高效薄层预制板 , 用双向展开薄层色谱法分离检测黄藤素中掺杂的人工合成黄连
素 ,在波长 入一 365 n 。 下荧光定位 ,用薄层扫描法测定其含量 。 此法还可测定黄藤素中巴马汀与药
根碱的含量 ,方法简便 、 快速 、 准确 、 重现性好 。
关键词 H P T L C 黄藤素 黄连素
从防己科植物黄 藤中提取出来的黄 藤 制剂工艺中不能完全溶解 , 给生产中的精制
素 ,具有消炎 、 解热 、 解毒 、 利尿的作用 。 其化 及制剂工艺带来困难和不稳定 ,造成经济损
学成分主要是巴马汀及少量药根碱 ,微量的 失 , 降低药品质量 , 因此检测黄藤素中掺杂的
黄藤 内酷及伪非洲防 己胺碱等 。 一些药厂收 黄连素 ,并测定含量 ,对于保证黄藤素的临床
购黄藤提取粗品 (约 40 % ) ,经精制后作为生 应用疗效及药品质量是必须的 。 由于黄连素
产黄藤素注射液的原料 。在收购过程中 , 发现 的颜色 、化学性质 、 紫外及可见光谱等与巴马
有掺杂人工合成黄连素 ,后者价格较便宜 。黄 汀相似 ,难以用常规化学法检测 。我们采用双
藤素与黄连素均为季按衍生物 , 二者的作用 向薄层色谱展开系统检测黄藤素中掺杂的黄
与用途 〔 ,一 3〕见表 1 。黄藤素与黄连素的临床应 连素 ,用薄层光密度扫描法测定其含量 ,同时
用对症不同 , 如在天然植物提取的黄藤素中 测定 巴马汀与药根碱的含量 , 获得满意结果 ,
掺进大量黄连素 ,会使该药的疗效降低 ,不能 为药厂收购黄藤素粗品及精制工艺有一个正
对症治疗 ,从而延误患者的病情 。 另外 , 由于 确的评价方法 。
盐酸黄连素溶解度甚小 ,在黄藤素注谢液的
表 1 黄慈紊与黄连紊性质用途
药物
主要抗菌作用
l描床应用
黄藤素 (巴马汀 )
对金黄色葡萄球菌 、 大小抱子菌及白色念珠菌的
抑菌作用强 。
清热解毒 , 具有增强白细胞吞噬能力的作用 。 用
于妇科炎症 、 菌痢 、 肠炎 、呼吸道及泌尿道炎 、外
科感染 、 眼结膜炎等疾患 。
黄连素
对溶血性链球菌 、脑膜炎球菌 、 霍乱杆菌 、炭疽杆
菌 、 枯草杆菌等的抑菌作用强 。
用于治疗细菌性痢疾 、 伤寒 、 肺结核 、流行性脑脊
髓膜炎 、 肺脓肿 、 急性遍桃体炎 、 上领窦炎 、 口腔
领面部炎等 。
1 仪器与试药
C S
一
9 0 0。 型双波长薄层扫描仪及紫外灯
检出仪 ( 日本岛津 ) ,定量毛细管 (美国 ) ,高效
硅胶预制板 (青岛海洋化工厂分厂 ) ,所用试
药 、 试剂均为分析纯 ,双底层层析缸 ( 1 0 m m
X l o o m m )
,盐酸巴马汀对照品 、 盐酸药根碱
对照 品福盐酸黄连素对照品由中国药品生物
制品检定所提供 , 黄藤素精品由昆明制药股
份有限公司提供 。
2 实验条件与结果
.2 1 色谱条件
.2 1
·
1 板层条件 : 采用青岛海洋化工厂生产
· A d d r e s s
:
Z h e n g P i n g
,
eD p
a r t m e n o f C h e m is t r y Y u n n a n N o r m a l U n iv e r s it y
,
K u n m in g
《中草药 》 1 9 9 7 年第 2 8 卷第 9 期 · 5 2 7 -
的高效硅胶 G预制板 , 层析效果好 , 斑点圆
整而不扩散 。
2
.
1
.
2 展开系统 : 曾用多种单向展开系统 ,
无法将巴马汀 、 药根碱与黄连素同时完全分
离 。故采用双向展开系统 ,首先用碱性展开剂
( 1 ) 甲醇 一氨水一水 ( 8 : 1 : 1 ) , 展距 s e m , 在 a
方向上点药根碱对照品及样 品 , 药根碱与 巴
马汀及黄连素完全分离 , 见 图 1 , 取 出薄层
板 , 此时可扫描测 定药根碱的含量 , 然后 于
1 0 0 ℃下 干燥此薄层板 2 0 m i n , 转 9 0 0角后 ,
分别在 b 方向点上 巴马汀及黄连素对照品 ,
再用酸性展开剂 ( 2) 醋酸乙醋一 甲酸 ( 9 : 3) 作
二次展开 ,展距 9 c m , 见图 2 , 巴马汀与黄连
素良好分离 , 可分别扫描测定含量 。
对照品盐酸盐适量 ,用无水乙醇配成盐酸巴
马汀 0 . 8 m g /m L ,盐酸药根碱 。 . 5 m g / m L ,
盐酸黄连素 0 . 4 m g /m L 的溶液 。
2
.
.3 2 供试品溶液制备 : 精密称取黄藤素粗
品 .0 0 6 n g , 置 25 m L 量瓶中 , 用无水乙醇
溶解 、 定容 、过滤 ,取滤液点样测定 。
2
.
4 线性关系考察 : 分别吸取 3 种物质的对
照品溶液 0 . 5 、 I 、 2 、 3 、 4 拜L ,各点于 3 块高效
薄层板上 , 药根碱用展开剂 ( 1 ) , 巴 马汀与黄
连素用展开剂 ( 2) 分别展开 , 入~ 36 5 n m 紫外
灯下定位 ,扫描测定 , 以各斑点峰面积测定值
对点样浓度 (拜g )作直线回归 ,结果见表 2 。
表 2 药根破 、巴马汀 、黄连紊的线性方程
2
.
1
.
3 显色 定位方法 :
在碱性条件下 ,药根碱为
棕色 ,黄连素共国 月汀为
黄色 ,而在酸性条件下 ,
三者均为黄色 。 同时 ,在
沃一 3 6 5 n m 的紫外灯下
药根碱发弱的暗黄色荧
光 , 巴马汀与黄连素发黄
绿色荧光 , 故薄层 展 开
后 , 在紫外灯下定性定
1 。
2 d
对照 品 回归方程 线性范围印 g )
巴马汀 Y ~ 8 4 0 9 2 9 3 . 6X + 0 . 00 58 0 . 4 ~ 3 . 2 0 . 9 99 7
黄连素 Y 一 8 7 6 1 0 7 7 . 7X 一 0 . 0 1 3 8 0 . 1 3~ 1 . 0 4 0 . 9 99 5
药根碱 Y 一 7 7 5 3 0 7 7 . 4X + 0 . 0 14 8 u . 1 3~ 1 . 0 0 0 . 9 9 9 3
样品 . 药棍孩对服品
a 方向一
图 1 第一次展
开图谱
1一药根碱 ,棕色斑点
2
一黄连素与巴马
汀 ,黄色斑点
0 2 ( )
0 1 0 2 0
1
矛
O
黄连素对服品 巴马汀对服品
b方向一图 2 第二次展开图谱
1
.
1
`一药根碱对照品与样品斑点 2`一样品中的巴马
汀 2一样品中的黄连素
位 ,再进行定量扫描测定 。
2
.
2 扫描条件 : 扫描方式 , 单波长反射法锯
齿扫描 ,检测波长 入s 一 3 40 n m ,光束狭缝 0 . 4
m m X 0
.
4 m m
, 振幅 1 0 m m , 线性化器 : S x =
3 ,背景较正 O N ,检测信号峰面积 。
2
.
3 溶液的制备
2
.
3
.
1 对照品溶液的制备 ,精密称取 3 种
.2 5 回收率试验
么 .5 1 加料回收率 : 取己测定含量的黄藤素
粗品 , 分别精密加入一定量的黄连素 、 药根
碱 、 巴马汀对照品 , 依法测定 , 黄连素回收率
为 10 2 . 3 5% ( n 一 3 ) , R S D 一 2 . 1写 , 巴马汀的
回收率为 9 5 . 7 4 % ( n ~ 3 ) , R S D = 2 . 0% , 药
根碱的回收率为 9 6 . 5 2 % ( n ~ 3 ) , R S D =
2
.
8 %
。
.2 .5 2 黄连素空白回收率试验 : 取未掺杂黄
连素的黄藤素粗品 , 再精密加入一定量的黄
连素对照品 ,依法测定 ,结果黄连素的平均回
收率为 1 0 1 . 9 0% , R S D 为 1 . 8% ( n = 4 ) 。
2
.
6 样品测定 : 取黄藤素粗品 5 批 ,每一批
样品在平行的两块薄层板上依法测定 , 取测
定平均值为结果 ,见表 3 。 化学法 亡。测定上述
表 3 样品测定结果 (n 一 2)
批号 药根碱 RDS 巴马汀 sR D 黄连素 RsD
( m g八 o腼g ) (% ) ( m g / 1 00吨 ) (% ) ( m g / l o om g ) (% )
1 2
,
8 3 2
,
8 4 0
.
2 3 1
,
7 未检出 一
2 1 5 8 3 1 1 9
.
7 2 2
.
5 1 6
.
0 1 1
.
6
3 1
,
8 4 3
.
7 2 ]
.
0 5 1
.
6 22
.
5 7 1
.
9
4 2
·
7 6 2
·
7 4 0
.
5 7 2
.
1 未检出 一
5 1
.
9 0 3
.
0 18
.
4 2 2
.
7 20 11 1
.
8
.
5 2 8
.
5批样品 ,结果以巴马汀盐酸盐计算 ,与薄层
法测定结果比较 , 见表 4 ,化学测定法专属性
差 ,不能鉴别并测出掺杂的黄连素 。
表 4 二种测定巴马汀方法结果
批号 化学法含量 ( % ) 薄层法含量 (% )
1 4 2
.
7 9 4 0
。
2 3
2 3 8
,
4 2 1 9
.
2 2
3 4 1
.
50 2 1
.
0 5
4 4 3
.
6 7 4 0
.
5 7
5 3 9
.
22 2 0
。
4 2
.2 7 精密度试验 :分别精密吸取相同量的黄
连素 、 巴马汀 、药根碱的对照品溶液 ,各点于
3 块薄层板上 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,
再精密吸取 3 种相同量的对照品溶液分别点
于不同的薄层板上 ,按上述色谱条件测定峰
面积 ,结果见表 5 。
表 5 黄连素等的同板与异板精密度 (n ~ 5)
样品 同板峰面积 sR D 异板峰面积 sR D
A x l o心 % A 火 1 0性 (% )
黄连素 6 . 0 1 2 . 6 5 . 76 3 . 2
巴马汀 10 . 2 8 2 . 1 10 . 5 4 2 . 8
药根碱 8 . 94 1 . 9 9 . 0 1 2 . 4
2
.
8 稳定性考察 ; 对展开后的黄连素等的斑
点每隔 。 . s h 扫描测定一次 , 结果在 0 . 5一 8
h 内结果稳定 ,其相对标准偏差 R S D 分别为
0
.
9写 、 0 . 7 1% 、 0 . 9 4 % , ( , = 3 ) 。
3 讨论
3
.
1 由于黄连素与巴马汀及药根碱的化学
性质相似 , 很难用一次展开 系统将三者同时
分离 , 在酸性展开剂中 ,药根碱与黄连素无法
完全分开 ,在碱性展开剂中 , 巴马汀与黄连素
不能完全分离 , 最后采用双向展开法 , 在高效
薄层板上 , 不经显色 ,即可定性 、定量测定 ,取
得了满意的结果 。
3
.
2 由于层析后的薄层板不需要显色 ,板子
背景干净 ,薄层扫描背景噪音平滑 ,经比较 ,
采用双波长扫描方式与单波长扫描方式 ,基
线平滑度一致 ,故采用单波长扫描方式即可
满足分析要求 。
3
.
3 黄连素 、 巴马汀与药根碱在各 自测定的
线性范围内 ,直线方程基本过原点 ,并由于双
向展开点样方式的限制 , 用外标一点法定量 ,
取两块薄层板平行测定的平均值 。 从精密度
测定结果看 ,此分析方法异板精密度与同板
精密度相差不大 。
3
.
4 黄藤素粗品中有不溶物 ,样品用乙醇充
分溶解后 ,过滤 ,取滤液才能薄层测定 。
3
.
5 该分析方法中的碱展开系统 ( 1 ) , 可作
为没有掺杂黄连素的黄藤素粗品的含量测定
方法 ,分别测定巴马汀与药根碱的含量准确 、
简便 、快速 。
3
.
6 该方法所用色谱条件经反复实验证明
重现性好 ,检出斑点清晰圆整 、直观 、 专属性
强 , 为药厂及药检部门收购 、鉴定黄藤素粗品
提供了可靠的质量检验方法 。
参 考 文 献
1 北京医学院 . 中草药成分化学 . 1 980 , 12 4
2 中国药典 一部 . 1 9虾 . 1 2 0 、 8 0 0
3 云南省药品标准编审领导小组办公室编印 . 大黄藤素及
其制剂 . 1 9 7 5
4 万绍晖 , 等 . 中草药 , 1 9 9 6 , 2 7 ( 8 ) : 4 6 3
( 1 9 9 7
一 0 1
一
0 3 2 收稿 )
H P T L C D e t e r m i n a t i o n o f S y n t lt e t i c B e r b e r i n e M i x e d i n F ib r a u r e t i n u m a s A d u l t e r a n t
Z h e n g P i n g
,
X ie X i a o t ia n
,
F
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Y
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A t w o d im e n s io n a l t h in l a y e r e h r o m a t o g r n p h i e m e t h o d w a s e s t a b l is h e d t o d e t e r m in e t h e a m o u n t o f s y n
-
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e t ie b e r b e r i n e m ix e d i n f i b r a u r e t i n u m a 昌 a d u l t e r a n t by H P T L C p l a t e
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F l u r e e e n e e lo e a li z a t io n w a s a t 入= 3 6 5
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e m e t h o d h a s b e e n a p p li e d fo r t h e q u a n t i t a t iv e d e t e r m in a t io n o f p a lm a t in e a n d j
a t r o r r h i z in e in f i b r a u
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u m a n d p r o v e d t o b e s im p l e
, a e e u r a t e a n d
r e p r o d u e ib l e
.
《中草药》1 9 9 7 年第 28 卷第 9 期 . 5 2 9 .