全 文 ：葛根总黄酮不同提取工艺的探讨
解放军第二军医大学药学院 上海 郭建平 孙其荣 周 全
赵形英 高玉 田
摘要 对葛根总黄酮不同提取工艺进行了探讨 , 并用葛根素作指标测定了葛根总黄酮的含量 。 结
果表明 冷浸法较铅盐沉淀法 、 回流法简便 , 得率高 , 甲醇冷浸提取后再用水饱和的正丁醉萃取
及硅胶柱层析 , 其含量前后无显著性差异 。
关锐词 葛根 黄酮 提取工艺
葛根为豆科植物的块根 , 以野葛 ‘ 。 和粉葛
分布 最广 , 产量最高〔二〕。其根 中含有多种有效成分 , 主要为异黄酮 。 具有降 低心肌
耗氧量 , 增加冠脉脑血管血流 啧 , 缓解心绞痛 , 抗心律失常 , 抗氧化 , 增强机体免疫力 , 生
津止渴〔〕等多种药理 作 月。 本文对葛根黄酮的提取工艺进行 了探讨。
实验材料
野葛根 , 安徽产 , 海虹桥饮片厂 葛根素对照品 , 北京生物制品研究所。 分光光度
计, 一 紫外分光光度计 。 硅 佼, 薄层公析川 。
方法与结果
刘野葛根不 可提取工艺得刘的黄褐色粉末得虽 、 总黄酮 含量 、 收得率进行了比较 。
铅盐沉淀法 称取野葛根 , 加 乙醉加热回流 次 , 每次 乙醇用 量第 次 ,
第 、 次均为 过滤 , 合并滤液 , ℃ 以下减压浓缩 , 浓缩放置过夜 。 滤液 , 加饱和醋
酸铅水洛液去杂质 , 过滤 , 滤液加饱和碱式醋酸铅溶液沉淀总黄酮 , 过滤 , 沉淀 , 干燥 , 悬
浮于 甲醇中 , 通 , 脱 , 过滤 , 滤液加 ‘ 调 , 减压浓缩至干 , 得总黄
酮 , 棕色粉未〔 〕。
回流热提取法 分别称取野葛根 , 分别 乙醇 。 乙醇、 甲醇 , 各 ,
加热回流 次 , 每次 ,趁热过滤 , 合并 次而液 ,减压回收乙醇 , 药液浓缩至干 , 得褐色干膏 。
冷浸法 分别称取野葛根 , 分别加 的乙醇 乙醇 、 甲醇 , 各 , 浸
泡 以上 , 过滤 , 回收乙醇 、 甲醇 , 药液减压浓缩至干 , 得黄褐色粉末 。
水饱和正丁醇萃取法〔们 取冷浸法 甲醇提取的总黄酮 , 加水 饱 和 的正 丁 醇 萃
取 , 丁醇层浓缩 , 减压干燥 , 得黄褐色粉末 。
水饱和 眨丁醉萃取一硅哎柱层析〔‘〕 取冷浸法一水 饱 和 正丁醉萃取法提取的葛根总黄
酮 , 上硅胶柱 , 洗脱液为氯仿一甲醇 , , 收集洗脱液 , 得黄褐色粉末 。
葛根黄酮含承测定〔“〕
标准曲线绘制 精密称取干燥至恒重的葛根 素 ’ 习二 容量瓶中 , 加 乙醇溶
解 , 并稀释至刻度 , 精密吸取 父、 、 、 、 置 容量瓶中 , 以
乙醉精密加水至 , 摇匀 。 同时以上述溶剂做空白对照 , 在 波长处测定吸收度 。 回
归方程 二 ,
葛根提取物 中 它、黄酮的测定 精密称取各法提取物 , 相当 葛根黄酮 , 置 容
, , , ,
现庄天津 习人 民解放军 医院工作
量瓶中 , 加 乙醇溶解 , 加 乙醇至 , 再加水至刻度摇匀 , 同时以 乙酵
精密加水至 的溶液做空白对照 , 在 波长处测定吸收度 。 从标准 曲线上换算出葛
根黄酮的含量 。 结果见表 、 表 。
布根不同提取工艺的薄层层析〔‘ , 〕
样品液及对照品溶 液 的 制备 精密称取葛根素标准品 及供试品约相当于葛根总
黄酮 , 置 容量瓶中 , 加甲醇至刻度, 摇匀 , 分别点样 川于高效硅胶板上 , 以 氯仿
一甲醇一水 , 为展开剂 , 展开 , 在 紫外灯下观察荧光 。 薄层色谱图见图 。
衰 野蕊根不 同提取工艺黄福色粉末褥
、总黄 布含 、 收得率
方法
葛根 均
提 取 物
黄褐色粉末得量 收得率 总黄酮 窝 总黄酮得量
,‘且。舀⋯回 吓乙醉流 写乙醇法 甲 醉
冷 乙醉
浸 乙醉
法 甲 醇
甲醇冷浸水饱
和正丁醉萃取
甲醇 冷浸 一水
饱和正丁醇 萃
一取碳酸 柱 层
析
铝盐沉淀法
。
。
。
。
。
。
。
。
。
。
。
。
。
。
。
。
。 。
图葛根总黄酮层析图
一葛根素对照品 一甲醇冷浸提取物 一 甲醇冷
浸正丁醇萃取物 甲醇 一醇 回流提取物 一甲醇 冷
浸正丁醇萃取硅胶柱层析
· ·
。 。 。
表2 回流法提取野葛和粉蕊中总黄酮含班
野 葛根提取物
得 量
( g )
粉 葛提取物
外 观 总黄酮含量( % ) 外 观 得量又g 总黄酮( % )
,山0
nU,d工b⋯95%乙醇70 % 乙醇, 11 醇 黄棕色粉 末黄棕色粉末黄棕色粉末 10
。
6 9
1 3
。 下8
1 1 。 7 8
4 8
。
2 3
3 0
。
1 2
4 9
。
3 8
黑褐色干膏
黑褐色干膏
黑揭 色千育
29 。 8 5
2 2
。
5 3
4 0
。
0 2
5
· 小结与讨论
5 .1 表 1表明: 冷浸法 、 回流法较铅盐沉淀法收得举高且操作简 便 , 冷 浸 法 又 较 回流法
简便 , 收得率高 。 含量高 , 因此 , 采用冷浸法作为葛根总黄酮的提耳:工艺 。
5
.
2 提取溶剂对葛根 总黄酮!竹影响: 从丧2中可 以看出甲醇与9 5 % 乙 醉 提 取总黄酮无显著
性差异 ( 尸> 。. 05 ) 。 采用 70 % 乙醇提取收得率 高些 , 但葛根黄酮的含虽低 。 干燥后 , 吸湿性
大 , 疏松 度低 , 不利于制剂生产 。 因此 , 采用95 % 乙醇或甲醇作为葛根 泳黄酮的提取溶媒 。
5
.
3 葛恨品种的影响: 从表2可以看出 , 野葛叮总黄酮的含量妥高于粉葛 , 且粉葛提取后呈
膏状 , 不利于 $lI 剂的生产 , 因此 , 以野葛作为葛浪总黄酮 为提取i获料 。
(下转第539页)
《中草药》1 9 9 5年弟26 卷第10 期 5 2 3
可能与供试的植物种类和诱导材料有关 。 细胞分裂素对体细胞的诱导有较为显著的 促进 作
用 , l m g
/
L B A 与 lm g /L Z T 配合 , 诱导率为5% ~ 6% 这与 红豆草〔的体细胞胚的诱导结果
相一致 。 l m g / L N A A + 会m g / L B A + 3 m g / L Z T + 3 m 盯LG A 3配合使用 , 可将诱导率
提高到12 % ~ 20 % , 达到最佳诱导效果 。在体细胞胚的发生中激素起着非常重要的作用 , 这一
点已由大量的报道所证实 。 但对于不同的植物种类及不同的诱导材料来说 , 诱导体细胞胚所
要求的激素种类 、 组合和用量都不相同。
2
.
3
.
2 蔗糖、 水解乳蛋白 ( L H ) 、 M s 有机物和维生素及F eso ‘ ( N a Z 一E D T A ) 对体细胞
胚发生的影响: 以下胚轴来源的愈伤组织为材料 , 选用诱导效果最好的激素组合 , 然后分别
加入蔗糖等4类物质 , 结果见表3。 蔗搪浓度从 3% 提高到6% , 可使休细胞胚诱导率从20 % 提
高到42 % 。 效果汲为显著 。 已有报道阐明高浓度蔗搪对体细胞胚的发生有显著的 促 进 作 用
〔9〕。 5 0 0 琪 g/ L L H , 3 倍M S有机物和维生素和3倍F eSO ‘ ( N a : 一 E D T A ) 的加入刘体细胞
胚的发生有明显的促进作用 。 4 种物质配合使用 , 可使诱导率提高到5 , % 。 复合添加物 质 对
体细胞胚发生的促进作用 已在许多实验中得到证实〔的 。 培养基中常常加入各种 生 长辅助物
质如肌醇 、 烟酸、 V B : 、 V B 。等 , 对培养未分化的幼胚是必须的〔7〕。
2
.
3
.
3
、体细胞胚植株的形成: 将形成体细胞胚的愈伤组织转入无激素的M s培养基中 , 2 周后
成形Ic m 左右的具根小苗 ( 图 , 5 ) 。 外源激素的加入对体细胞胚的进一步发 育 不 利。 A l -
A b ta 等〔功〕认为从细胞决定到球形胚阶段依赖于外源激素的存在 , 但球形胚以后的发育受到
外源激素的抑制 。 粗茎秦大的体细胞胚的发育符合上述规律 , 形成的体 细胞 胚 在无激素的
M S培养基上分化成苗率可达90% 以上 。
致谢; 扭茎秦尤种于由西 书高原生物研究所刘建 全同志咭送 , 在此深表谢意 。
, 考 文 献
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:
2 9
4667
(
2 9 9 4
一 0 5 一 1 6 ‘}觉稿 )
(上接 第523页 )
5 .谁 紫外吸收光谱图一致 , 层析图谱 , 除了冷浸 正丁醇萃取 、 硅胶柱层 析 外 , 其余层析图
谱一致 。 因此 , 用甲醇冷浸法一步提取趁可作为葛根 总黄酮的提取工艺 。
5
.
5 通过对葛根总黄酮薄异层析巾 , 5 神展开溶媒的比较说明 , 以氯仿一甲醇一水 ( 7 · 2 ‘5 :
0 . 2 5 ) 为最佳呢开挤媒 。 因此 , 可作为葛根总黄酮分离时的 哎开溶媒 。
参 考 文 献
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6 野原捻弘 , 他. 现代东洋 医学 , l , 9 2 , 1 8 ( 3 ) : 7 9
7 中国药典 . 1 , , 0 . 2 9 。
( 1 9 9 5
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《中草药》1 9 9 5年第26 卷第10 期 5 3 9