全 文 ：圆盘凝胶电泳法鉴别熊胆皮的研究
黑龙江省药品检验所 ( 哈尔滨 1 5 0 0 0 1 ) 仲昭庆 . 钱忠直
摘要 以聚丙烯酸胺凝胶圆盘电泳法 , 对熊 、 猪 、 牛 、 羊胆皮的水溶性蛋白进行凝胶电泳 , 采用
凝胶电泳扫描对其电泳谱带进行分析 , 结果各胆皮均显示不同的谱带 , 可鉴别熊胆皮的真伪 。
关键 词 聚丙烯酞胺凝胶 圆盘电泳 凝胶电泳扫描 鉴别熊胆皮
熊胆系熊科动物黑熊 S e l e n o r e t o s t 八`b o t a n “ : G u ` i e r . 或棕祺叮 r s o s a r e t o s L . 的千燥
胆囊 。 近年来随着活熊取胆技术的开发 , 市场上出现了大量的以其它动物胆皮 , 灌装引流熊
胆汁的伪 品熊胆 , 以现行熊胆检验标准检验 , 很难识别其真伪 。 本文采用聚丙烯酞胺凝胶圆
盘电泳法对熊 、 猪 、 牛 、 羊胆皮的水溶性蛋白进行 电泳 , 并结合凝胶电泳扫描对其电泳谱带
进行分析比较 , 识别熊胆皮 , 以鉴别熊胆真伪 。
1 仪器 、 供试品和试药
1
.
1 仪器 : 电泳仪: 国产 , J M D Y - W l型精密稳流稳压电泳仪 。 附圆盘 电泳槽 , 玻璃管为
1 1 0 又 s m m
。 高速离心机 : 日本产日立 20 P R 一 5型 。 薄层扫描仪 : 日本 产岛津 C S一 9 10 型 , 附
岛津 E I A型数据处理机 。
1
.
2 供试 品 : 熊胆皮 1: 经鉴定为正品东北吊胆胆皮 。 熊胆皮 2 : 经鉴 定为 正品四川扁胆胆
皮 。 猪胆皮 : 哈尔滨肉类联合加工厂提供 。 牛胆皮: 哈尔滨牛羊肉加工厂提供 。 羊胆皮 : 哈
尔滨牛羊肉加工厂提供 。
1
.
3 试药 : 丙烯酞胺 : 临海化学厂 ( 化学纯 ) , 含量不少于 9 8 . 5 % 。 亚 甲 基双丙烯酞胺 :
德国莫克公司 , 纯度为98 % 。 三经甲基胺基甲烷 : 美国产 。 四甲基 乙 二 胺 : 上 海前进试剂
厂 , 纯度不少于 98 . 0 % 。 过硫酸按 : 北京化学试剂三厂 , 分析纯 。 甘氨酸 : 天津市东方卫生
材料厂 。 考马斯亮蓝 R 250 : 北京 比工厂 , B D H进口分装 , 电泳 分析 用 。 试钊均 为分析纯 。
2 实验方法
2
.
1 供试 品液的制备 : 取熊 、 猪 、 牛 、 羊胆皮碎段各 0 . 29 , 分别 置 乳 钵 中 加 乙 醚 研磨
2次 , 每次 s m l , 弃去 乙醚液 , 残渣挥尽 乙醚 , 再分别加 生 理 盐 水 2m l , 研磨成糊状 , 离心
( I D0 0 o
r
/ m i
n , 1 0℃ ) , 1s m i n , 取上清液 , 以 0 . 4 5卜m 的微孔滤膜滤过 , 滤液备用 。
2
.
2 聚丙烯酞胺凝胶管制备 : 按文献〔 ’ 〕 一右法 p H S . g系统制 备 , 凝 胶浓度为 7 . 5 %的聚丙烯
酞胺凝胶液 , 分别在底端加橡皮塞的玻璃管中灌分离胶 2m l , 覆盖 sm m 厚的 水 层 , 室温放
置 3h , 待胶液与水层界面消失后再现时 , 凝 胶 聚合完成 , 用滤纸吸千水层 , 再分别 灌浓缩
胶 0 . 5m l , 同样加水 sm m 厚 , 室温放置 , 聚合完成后 , 用 滤纸吸千水层 , 备用 。
2
.
3 加样: 将供试品液制成含 10 %甘油的 溶 液 后 , 分别 加 样 0 . 2m l , 置凝胶玻璃 管胶面
上 , 加少量电极缓冲液覆盖 。
.2 4 电泳 : 将 已加样的 冬凝胶管 , 紧密 插 入电泳槽上槽底部的各个 圆孔内 , 上 、 下槽分别
加甘氨酸一三经 甲基 胺 基甲烷缓冲液 40 om l , 上槽接负极 , 下槽接正极 , 通电 后 , 前 30 m in
控制电压生60 V , 然后加至 1 60 V , 电泳约 3 . 5一 4 h后 , 停止电泳按文献 〔` 〕方法取出胶 。
2
.
5 染色 : 按文献 〔 2 〕方法配制 。 . 02 5 %考马斯亮蓝 R : 5 。染色液及脱色液 。 将胶条浸置染色
液中s h 以上 , 取出 , 以水迅速漂洗后 , 置脱色液中脱色 , 多次更换脱色液 , 至背景清晰后 ,
.
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嗒中草药 》 1 9 9 4年第 25 卷第 7 期 , 3 7 7 ·
“ùbǔ。一甚通用口甚督口一一取出
,置 1吠醋酸中保存 , 电泳后区带见 图 1。
2
.
6 谱带区域划分 : 4种胆皮在距前沿近端
均有一颜色较深的主 谱 带 X , 但 泳 距不完
全一致 , 将这一段谱带定为 C 区 , 近原点处
均有 1一 3条狭细的谱带 , 将此 段 定为 a区 ,
a区与 c 区之间之为 b区 。
2
.
7 凝胶电泳扫描 ; 将脱色后的凝胶条置
比色管中 , 加 10 %的醋酸液 , 密塞 , 做凝胶
电泳扫描用 。
2
.
7
.
1 吸收光谱 : 采用单波长法 扫描 , 吸
收光谱见 图 2 。 测得 最 大 吸收 波 长 几 : 二 =
5 6 0 n m
, 最小吸收波长几二 i二 二 46 0 n m , 故确定
几s为 5 6o n m , 几R为4 6 o m m 。
2
.
7
.
2 扫描 : 双波长透射法 , 直线 扫描 ,
久s 5 6 o n m , 几R 4 6 o t m , 狭缝 一o x o . 3 ,灵敏度
X l
。 扫描速度 Z om m /m i n , 纸 速 Z o m m /
m in
, 各胆皮凝胶电泳谱带扫描谱见 图 3 , 经
岛津 E IA 型数据处理机对各峰面积按归一
化法计算 ,结果见表 。
表 各胆皮电泳谱带相对百分含最
由原点 至前 沿依次排列 ( % )序号
a 区 b区 c 区
I
a
1 4
.
6 4 1 0
.
2 1 7
.
5 1 2 2
.
6 3 4 3
。
4 0 3
.
2 7 1
.
3 5
*
15 8
。
8 1 1 4
。
9 9 6
。
5 2 2 2
,
5 5 4 0
。
0 3 3
。
3 2 0
。
7 7
率
2 3 4
.
2 8 4 1
.
5 9 2 1
.
0 1 3
.
12 .
3 6 9
.
5 8 3
.
1 1 0 5 0 2 3
.
3 7 3
.
4 5 章
4 魂魂 . 7 1 1 3 . 6 9 2 5 . 2 7 吐 . 0 6 1 2 。 2 7 今
. 为电泳前沿 的吸收峰百分含量
_ _ l汾扭
圈 1
I
: 一东北吊胆胆皮
3
一牛胆胆皮
日 深蓝色
通
圈
电泳谱带
h
一四川扁胆胆皮 2 一猪胆胆皮
一 羊胆胆皮
一乳白色半透明 圈 一背景较深
圈2 吸收光谱图
上人尸尸二
I n l b 2 3 心
圈 3 胆皮凝胶电泳扫描圈谱
I一东北吊胆胆皮 I b一四川扁胆胆皮 -2 猪胆胆皮
3
一牛胆胆皮 4 一羊胆胆皮
从 4种胆皮的凝胶电泳谱带看 , 熊胆皮 8条 , 猪胆皮 4条 , 牛胆皮 4条 , 羊胆皮 7 条 、 熊 、
猪 、 牛 、 羊胆皮的谱带分布为 , a 区各有 谱 带 2 、 1 、 1 、 3条 , b区各有谱带 4 、 2 、 2 、 2条 ,
c区各有谱带 2 、 l 、 1 、 2条 。 猪和牛胆皮的谱带数与熊胆皮有显著性差异 。 熊和羊胆皮的谱带
数随相近 , 但分布有异 , 在 b区熊胆皮 4条谱 带 有 2条分子量较大 , 泳距较短 , 另两条分子量
较小 , 泳距较长 ; 而羊胆皮在 b区的 2条谱带分子量比较小 , 泳距较长 。 若将凝胶对光观察 ,
羊胆皮凝胶主谱带X 一上 、 下 1一 cZ m 内均有乳白色半 透明 谱带 ; 其它胆皮均无此谱带 。 东北
吊胆皮及四川扁胆皮 实验结果谱带一致 。 猪 、 牛 、 羊 、 在 a区和 b区均有较 深 的背景 , 使得
凝胶电泳扫描基线抬高 。 而熊胆皮则背景较浅 , 扫描基线亦不高 。
参 考 文 献
中国科学院上海药物研究所编著 . 中草药有效成分提取与分离 . 第二版 . 上海 : 上海科学出版社 ,
1 9 8 3
。
1 8 5
童明庆 ,
出版社 ,
主译 . 实用免疫化学 ( 英 ) 。 南京 : 南京
飞9 9 0 。 3 4
1 9 9 3一 0 8一 3 0收稿
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3 7 8
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《药代动力学数据库一临床部分 》征订启事
临床药学的最新工具 书和参考书 《 药 代 动力学数据库一临床部分 》 一书 由 刘 昌 孝 主
编 , 中国医药科技出版社出版 , 书号 : I S B N 7一 5 0 6 7一 1 1 4 1一 9 / R · 1 0 2 3 。_ 编辑者从大量国内外药代动力学文献中选择了临床上使用的 4的多种药物 , 将其药 代 动力学参数以表的形式印刷成书 , 一种药物制剂列一个表 , 总计 4 80 个表 , 每个表包括药名 (中文名 、 外文名 ) 、 试验对象 ( 健康人 、 病人 ) 、 药物剂型 、 剂量 、 给药途径 、 测定方法 、 药代参数和资料来源 ( 作者 、 书刊名 、 年 、 卷 、 页 ) 八 个栏 目。 目录按通用分类法分类列出中
文 、 外文药名 。 书末 附有外文索引 , 均便于读者查阅 。 本 书另备软盘 , 可供读者在计算机上查找 、 演示和打 印 ( 软盘另行订购 ) 。 书前论述了药代动力学参数的基本知识和基本计算方
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, 定价每木 4 2 . o J元 , 邮购不
) 欲购从速 。草药 》 杂志编辑部黄永谦收
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