全 文 ： 。在同一块薄层板上 , 对同一个对照品 讨论与小结
溶液相同点样量的 只斑点进行扫描测定 , 近几年来研究认为 , 齐墩果酸是本方主
为 。 药女贞子的有效成分之一 , 并证明它可治疗
回收率试验 精密称取 已知含量的本品 肝炎 , 有抗癌活性 , 升白细胞 , 促免疫作用 ‘〕。
内容物 , 准确加入齐墩果酸对照品适 有文献报道 , 齐墩果酸能减少糖尿病大鼠的
量 , 按供试品溶液的制备方法操作 , 依法测 尿量及饮水量 , 有明显的降血糖作用 〔〕。 我们
定 , 计算 回收 率 。 经计算 , 平 均 回收 率为 的药理实验也证明了本品对大鼠和小鼠实验
· , 为 · 。 性高血糖模型有明显的降血糖作用 。
样品测定 采用 硫酸 乙醇为显色剂 , 喷雾显
精密吸取供试品溶液 拼 , 对照品溶液 色剂时必须均匀 , 否则对结果影响较大 。
拌 和 拼 , 分别交叉点于 同一薄层板上 , 只要严格按拟订方法操作 , 就能得到满
依法测定 , 结果见表 。 意结果 。 实验表明 , 本法的 回收率高 , 重现性
表 批样品含量测定结果 好 , 方法稳定 , 对产品的质量控制是可行的 。
批号 含量
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参 考 文 献
钟静芬 , 等 中草药 , ,
郝志奇 , 等 中国中药杂志 , ,
一 一 收稿
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苦豆子中生物碱含量测定方法新探
内蒙古农牧学院生物工程系 (呼和浩特 010018) 张建华 带 乌 云
摘 要 苦豆子中生物碱具有一定水溶性 ,用氯仿难以提取完全 。 笔者采用水或 pH 一 5 .6 的醋酸
缓冲液作提取液 , 即将其中的生物碱转化成生物碱盐的方法 ,提取苦豆子中的生物碱 。 经 D U 一 7 紫
外分光光度计测试 , 最大吸收波长为 41 7 nm , 线性范围 o一13 拌g / m L , 变异系数 。. 65 % , 回收率 :
水提取为 98 .23 % ;醋酸缓冲液提取为 98 .72 % , 结果表明:测试数据准确 , 方法可行
关键词 苦豆子 总生物碱 提取法
苦豆草主要产于西北各省区及 内蒙古 。 据文献t1j 报道 , 它的药用部分为根或全草 。其
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H u sb an d ry , H u h e h a o t e
张建华 女 , 1 9 8 3 年毕业十内蒙古广播电视大学机械专业 , 同年任职于 内蒙古农牧学 院 , 从 事仪器分析上作 。 1 9 9 4 年 皆升为实验师 , 1 9 9 5年合作完成了“倍 作完成的内年合柞硫磷在
自治区 自然科学 基金项 目“饲用 玉米抗旱鉴定方法和指标的研究”已通过鉴定 。牛体内的 力学 ” 。 现正 在进行的有“果树内源激素与花芽分化关系 ”等科研课题 。 先后在全国各类刊物上发表学术论文 12 篇 。
《中草药 》1 9 9 7 年第 28 卷第 8 期 · 4 6 5 ·
主要的药用成分为苦参碱类 。 苦豆子 SoP ho -
ra al oP ec uro id e: Li n 是苦豆草的果实 。 其中
也含有一定量的生物碱 (主要为苦参碱类) ,
提取其制成制剂有很大的药用价值 。
总生物碱含量的测定方法主要有重量
法 〔2 , 、 酸碱滴定 法 〔幻 及 酸性染 料分光 光度
法 〔3 , 。 上述方法的提取过程 , 先将生药中加碱
水湿润 , 使其中含有的生物碱转化成游离生
物碱 , 然后用氯仿提取 。由于苦豆子中生物碱
属奎诺里西咤类 , 碱性比较强 , 极性较大 , 具
有一定水溶性 , 用氯仿难以提取完全 , 使测定
数据低于实际含量 。 为了准确测定苦豆子以
及具有相似生物碱组成物中总生物碱含量 。
根据生物碱盐易溶于水的性质和苦参碱类与
嗅赓香草酚蓝形成离子对后 , 空白值与净吸
收度值随 pH 值不 同而变 , 笔者经过多次试
验 , 建立了两种提取法 :醋酸缓冲液法和水提
取法 。 提取后再用酸性染料光度法测定其总
生物碱含量 , 其结果令人满意 。
1 实验部分
1.1 仪器 、药品 :B ec k m an D U 一 7 紫外分光
光度计 , E A 9 40 型 离子 酸度计 , 7 8 H W 一 1 型
恒温磁力搅拌器 。供试样品 :内蒙古西部地区
生产的苦豆子 。 对照品 :苦参总碱(宁夏盐池
制药厂 ) 。 试剂均为分析纯 。
1
.
2 试剂的配制
1. 2. 1 pH ~ 5.6 醋酸缓冲液 〔4〕。
1
.
2
.
2 p l 一 7.6 缓 冲液 :取 0.1 m ol/L 磷
酸二氢钾溶液 10 m L , 加 0. 1 m ol /L 氢氧化
钠溶液 84 .4 m L , 蒸馏水 15.2 m L , 混匀用离
子酸度计校正 pH 为 7. 6 。
1
.
2
.
3 2 x 4 一 4 m o l / L 滨察香草酚蓝 pH 7.6
缓冲液 :称取澳察香草酚蓝 0. 0 25 9 溶于上
表 1
述 200 m L pH 7.6 缓冲液中 。
1
.
3 生药样品提取
1. 3.1 醋 酸缓 冲液法 :称取苦豆 子粉末
0.10 9 左右 , 置 25 m L 容量瓶中 , 加 pH ~ 5. 6
醋酸缓冲液适量 , 充分振摇后定容 。放置过夜
(16 h 以上) , 过滤 , 滤液作提取液 。
1
.
3
.
2 水提取法 :称取苦豆子的粉末 0.10 9
左右 , 放入 25 m 1)容量瓶中 , 加 pH ~ 5. 6 的
醋酸缓冲液 湿润样末 , 充分振摇 , 放置 Z h ,
用蒸馏水定容 , 放置过夜 (16 h 以上 ) , 过滤 ,
滤液作提取液 。
1
.
4 测定方法 :用移液管吸取一定量提取液
(相 当总生物减 48 拼g ) , 采用酸性染料分光
光度法测定其总生物碱含量 。
2 结果
2.1 苦参总碱标准曲线绘制 :用微量天平称
取苦参总碱 10 .0 m g , 用乙醇定容在 10 m L
容量瓶中 , 即配成 1 m g/m L 的溶液 。 用微量
进样器取 5 、 1 0 、 2 0 、 3 0 、 4 0 、 5 0 、 6 0 、 8 0 、 1 0 0 拌L
溶液 , 分别置 20 m IJ具塞试管中 , 加澳鹿香
草酚 蓝 pH 一 7. 6 的缓冲液 6.0 m L , 氯 仿
6.00 m L , 密塞剧烈振动 2 m in , 静止 Z h , 用
吸管吸取氯仿层 (黄色 ) , 以未加苦参总碱试
管为空白 , 进行扫描 , 在 41 7 nm 处有最大吸
收 , 于 417 nm 处 , 测吸收度值得 标准曲线 ,
可得苦参总碱线性范围为 O一13 产g /m L , 回
归方程 Y ~ 0.0097X + 0. 00 334 , r 一 0. 99 78
(n = 8 ) 。
2
.
2 稳定性试验 :分别取水和 pH 一 5. 6 醋
酸缓冲液提取 的样品各一份 , 按生药生物碱
含量测定每隔 l h 测其吸收度值 , 见表 1 。 s h
内吸收度值稳定 。
稳定性试验
提取法
水提取法
缓冲液体提取法
1 h 2 h 3 h 4 h 5 h 6 h 7 h s h
0.2469
0 。 4 3 9 9
0
.
2 4 7 2
0
。
4 4 0 2
0
。
2 4 7 4
0
.
4 4 0 5
0
.
2 4 7 5
0
.
4 4 0 8
0
.
2 4 7 8
0
.
4 4 0 9
0
。
2 4 8 1
0
.
4 5 1 3
0
.
2 4 8 2
0
,
4
5 1 8
0
.
2 4
8
5
0
,
4 5 2 0
2
.
3 准确度试验 :水提取测定总生物碱平均
含量为 5.915% , R S D % = 0 . 1 一6 ( , = 6 ) 。 醋
酸缓 冲液提取测定总 生 物碱平均 含 量 为
6.102% , R S D % ~ 0 . 0 5 6 ( n = 6 ) 。
2
.
4
0
·
1 0 9
回收率试验 :称取 4 份苦豆 子粉末
左右 , 分别放入 25 m L 容量瓶中 , 其
. 466 ·
中两份各加适量的苦参总碱(1 一1 · 5 m g ) 摇
匀 , 分成两组 , 一组用水提取 , 另一组用醋酸
缓冲液提取 , 提取后按酸性染料光度法测生
物碱含量 。 水提取法回收率为 98 .23 % , 醋酸
缓冲液提取法回收率为 98 .72 % 。 结果令人
满意 。
2
.
5 水 、醋酸缓冲液 、氯仿 3种提取法 , 测定
苦豆子中总生物碱数据见表 2 。
提取法
水
醋酸缓冲液
氯仿
小结
5 22756778
4.077
表 2 3 种提取方法的数据比较
苦豆子总生物碱含量 (% ) 平均值(% ) 回归方程
6.78 0 5.4 20 6.636 5 , 3 2 6 6 . 1 1 6 6 . 9 1 8 Y = 0 . 0 0 3 1 2
+
0
.
0
4
1 3 X
6
.
0 0 1 6
.
5 5 2 6 2 8 0 6
‘
8 2 3 6
.
6 7 7 6
.
1 0 2 y = 0
.
0 3 5 5
+
0 0 3 5 6 X
4 5 0 2 3
.
8 8 5 3
.
7 0 5 4
.
2 4 6 4
.
4 4 7 4
.
1 4 4
0
.
9 8 8 5
0
.
9 7 6 8
3
.
1 由表 2结果看出 , 用水和醋酸缓冲液提
取苦豆子中总生物碱含量比用氯仿提取的值
高 。对这 3 组数据进行显著性检验 , 水提法与
氯仿提取法所测总生物碱含量数据之间进行
分析 p < 0.005 , 有显著性差异 ;醋酸缓 冲液
提取法同氯仿提取法所测数据进行分析 尸<
0 . 0 5 , 有显著性差异 ;而水提取法和醋酸缓
冲液提取法所测 数据之 间进行分析 尸 >
0 . 01 , 无显著性差异 。说明氯仿作奎诺里西陡
类生物碱提取液难以提取完全 。 水和醋酸缓
冲液两者都可作提取液 , 所测结果准确 , 可
靠 。
3
.
2 水和醋酸缓冲液的 pH 值对嗅察香草
酚蓝缓冲液的 pH 值影响不大 。 p H 值在 6.0
一 6.5 之间 , 空 白吸收值为 0.057 2 。
3
.
3 经扫描测定苦参总碱最大吸收波长为
417 nm , 两种不同提取方式所测总生物碱最
大吸收波长也为 417 nm 。
3
.
4 在线性范围内 , 用酸性染料光度单点法
测苦豆子中总生物碱含量 , 简便 , 数据准确 。
3
.
5 本法采用水或醋酸缓冲液作提取液比
用氯仿要经济 、实用 , 且可减轻对人体的伤
害 。
参 考 文 献
1 胡正海 , 等.中国药用植物种子的形态鉴别 ‘ 上册.西安 :
西北大学出版社 , 2 9 5 5 · 1 4 2
2 青海省生物研究所.1977 年版中国药典 “苦豆子质量标
准及起草说明书 ” . 19 75 . n
3 宋学华 , 等.中草药 , 一9 9 1 , 2 2 ( 1 0 ) : 4 4 4
4 上海植物生理学会.植物生理学实验手册.上海 :上海科
学技术出版社 , 1 9 8 5 · 6 0 2
( 1 9 9 6
一 1 1 一 1 4 收稿 )
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安徽省高校科技函授部总部中医函授面向全国招生
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《中草药 》1 9 9 7 年第 28 卷第 8 期 一 4 6 7 .