全 文 ：测 定 (温 度 未 校 正 ) ; 红 外 用 P r eki n 一l E e-
m r e8 9 3型红外光谱仪测定 ( Kr B压片 ) ;氢谱
和碳谱用 r Bu k er A C F 一 3 0型核磁共振仪测
定 ( ` H 3 0 0M H: , ` 3C 7 5 M H : ; 以 D M S O 一d 。 或
C
S
D
S
N 或 C D 3O D 为溶剂 , T M S 作内标 ) ;质
谱用 Z A B 一 H S 型质谱仪 ( F A B 一M S ) 和 R l o -
1 0 型质谱仪 ( D IC 一M S )测定 。
药材采自江西省修水县 , 品种经鉴定为
积棋属植物积棋 H . ac e r ba iL n dl . 的干燥叶 。
2 提取与分离
积棋 叶的提取与分离前文 已报道 〔 , , , 从
5 1 部分得化合物 I , 5 4部分得化合物 XI 。
3 结构鉴定
I
: 白 色 针 晶 ( C H C 13 一C H 3O H ) ,
m p 2 4 3℃一 2 4 4 ℃ , 嗅甲酚绿反应和三氯化铁
反应均呈阳性 。 元素分析 : 实验值 % C 5 . 2 ,
H S
.
4 3 ;计算值 % C 5 5 . 3 2 , H S . 5 2 , 分子式为
C
: `
H
, 。
O
。 · 1 / ZH
:
O
。
I R ,黑 c m一 ` : 3 5 0 0一 2
4 0 0 ( CO O H )
,
1 7 1 5 ( C 一 O ) , 1 6 9 5 ( C ~ O ) , 1
6 4 0 ( C = C )
, 1 6 1 0 , 1 5 2 0 (芳环 ) , 1 1 2 5 C C -
O
一
C
一
)
,
1
一 0 8 0
, 9 8 0
, 9 0 8 , 8 1 3 ; I H
一
N M R
, ` 3
C
-
N M R ( DM SO
一
d
。
)台见表 1 , 2 。
仄 : 微黄色针晶 ( ( C H : ) : C O 一 C H 3O H ) ,
m P 2 2 6℃一 2 2 8 oC , 〔 a 〕智一 9 6 . 5 · ( e , 1 . 0 ,
H
Z
O )
。 苟三酮反应呈紫红色 。 元素分析 : 实验
值% C 4 7 . 6 5 , H 7 . 2 7 , N g . 0 7 ; 计算值% C 4 6 .
1 3 , H 7
.
7 5 , N S
.
9 7
。 分子式为 C 6 H I , N O 3 · i /
ZH
Z
O
。
I R ,恐 e m 一 ’ : 3 4 0 0一 2 2 0 0 ( N + 一 H ) , l
6 2 0 ( CO O 一 ) , 1 4 0 2
,
1 3 0 6
, 1 2 0 5 , 1 0 8 0 , 1
0 3 0
,
9 2 0 ; D IC
一
M S m / 2 1 4 6 ( M + H )
,
1 2 8 (M
+ H 一 H : O ) , 1 0 0 ( M 一 CO O H ) , 8 2 ( M 一H Z O -
C O O H ) ;
’
H
一
N M R ( C D
3
O D比 见 表 3 ; ` 3 C -
N M R ( C D
3
O D ) a 4 4
.
4 ( N
一
C H
3
)
,
7 2
.
2 ( C
Z
)
,
1 7 3
.
0 ( C O O 一 ) , 4 0
.
6 ( C
3
)
, 7 1
,
2 ( C
4
)
, 6 4
.
5
( C
S
)
。
参 考 文 献
l 梁侨丽 ,等 . 中草药 , 1 9 9 6 , 2 7 (一0 ) : 5 8 1
2 oC
r s e
J
, e t a l
.
P h y t o e h e m i s t r y
,
1 99 6
,
5
:
7 6 7
3 M o r i , h i t a H
, e t a l
.
J
o u r n a l o f C h r o m a t o g r a p h y
,
1 98 4
,
3 1 5
:
2 5 3
4 S a d t l e r s t a n d a r d C
a r b o n
一
1 3 N N R S P e e t r a v 7 6
一8 0 :
1 5 6 0 5 C
5 K e lle y C J
, e t a l
.
J O
r g C h e m
,
1 9 7 6
,
4 1
:
4 9
6 cS i
u t o S
, e t a l
.
P h y t o e h e m i s t r y
,
1 9 8 3
,
22 ( 10 ) : 2 3 1 1
7 A b r a h a n m R J
, e t a l
.
J C h
e m so
e , 1 9 6 4 : 3 7 3 9
8 A n d r e a t t a R H
, e t a l
.
A u s t J C h e m
,
1 9 6 7
,
2 0
:
2 7 0 1
9 eB
e e o n s a ll J K
, e t a l
.
J C h e m so
e , 19 65
:
1 7 2 6
10 F ig l iu o lo R
, e t a l
.
P h v t o e h e m i s t r y
,
1 9 8 7
,
2 6 ( 1 2 )
:
3 2 5 5
( 1 9 9 6
一
0 3
一 0 7 收稿 )
银杏叶多糖的化学研究
广西医科大学 (南宁 5 3 0 0 21) 黄桂宽 今 曾麒燕
摘 要 从银杏叶水提液中 ,得到两种多糖 ,经凝胶过滤 、 高效液相色谱 、 过碘酸钠氧化 、 S m iht 降
解 、 红外光谱等方法 ,证实一种银杏叶多糖的分子量为 1 . 7 x 10 5 ,含葡萄糖 、 鼠李糖 、 木精 ,其摩尔
比为 4 9 · 8 2 , 2 8· 4 0 , 2 1· 7 5 ,糖基以 卜 ( 1` 6 ) ( l ” 3 ) ( z` 4 )连接 ; 另一种多糖是葡聚糖 ,分子量为
.1 4 x 10
` ,糖基以 。 一 (1 ~ 4 ) (1 ~ 3 ) (1 ~ 6 )连接 。 抗氧化效果试验表明银杏叶多糖对 O 子有一定清除
作用 ,
关祖词 银杏叶 多糖 抗氧化
延缓衰老 , 健康长寿 ,为人们日益期盼 。
现存的古老中生代子遗植物之一的银杏树 ,
素有裸子植物活化石之称 , 因而近年来银杏
叶药品及保健品已遍及国内外 。 天然多糖具
,
_ _人dd r e s s : uH a明 G u i k u a n , G u a n g x i M e d ie a l U n i v e r s it y , N a n n in g黄桂冤 大学本科毕业 , 副教授 ,从 事化学教学工作 , 还进行微量元素 、 植物多糖等方面研究 , 曾获 1 9 9 0 年卫生邵科技进步奖三等奖 。
《中草药 》 1 9 9 7 年第 2 8 卷第 8 期 . 4 5 9 .
有非特异性免疫功能与抗衰老等诸多药理作
用 ,我们从银杏叶提取纯化多糖 ,研究其理化
性质 、 结构分析及其抗氧化效果 , 为探讨银杏
叶抗衰老作用的构效关系提供依据 。
1 材料 、仪器和试剂
1
.
1 材料 :银杏叶产于广西省临桂县 。
1
.
2 仪器 : P EU Z一紫外光谱仪 、 岛津 47 0 红
外光谱仪 、 eB ck m en 一 3 2 高效液相色谱仪 、 岛
津 12 0一 02 紫外分光光度计工K二 3 0 3 0 发光光
度计 、 W X G 一 4 旋光仪 、 Z F Q 8 5A 旋转蒸发仪 。
1
.
3 试剂 : 聚丙烯酞胺凝胶 、 赤辞醇 、 鲁米诺
为 M e r e k 产品 ;各种 D e x t r a n 、 S e p h a d e x 为
P h a r a m a e i a 产品 ; 甲苯胺蓝为 C h r o m a 进 口
分装 ;各种单糖为生化试剂 ,其它均为国产 。
2 方法
2
.
1 多糖的提取纯化 : 银杏叶粉经脱脂 、 水
溶 、 醇沉 、去蛋白 、 透析 、 再反复醇沉后 , 真空
干燥得银杏叶粗多糖 L G B P ( P o l y s a e e h a r id e
f r o m L e a v e o f &
n乏即 6“砧 d ) 。 粗 多糖上
S e p h a d e x G
一 1 0 0 层析柱 ( 3 x 4 5 e m ) , 用 0 . 1
m ol / L N a CI 洗脱 , 得到 2 种多糖 。 分别再上
一次 eS p h a d e x G 一 1 0 0 柱 ( 2 X 1 0 0 e m ) , 两部
分收集液经醇沉 、洗涤 、 真空干燥得到两种纯
银杏叶多糖 L G B P 一 1 和 L G B P 一 2 , 产率分别
为 1 . 5%与 1 . 9% 。
2
.
2 纯度检测
2
.
2
.
1 聚丙烯酸胺凝胶 电泳 : 缓冲液为
p H g
.
5 的硼砂液 , 染色剂是高碘酸一希夫试
剂 。
2
.
2
.
2 醋酸纤维薄膜电泳 : p H 12 . 。 的硼砂
缓冲液 , 甲苯胺蓝染色 。
2
.
2
.
3 凝胶过滤法 : S e p h a d e x G 一 1 5 0 层析
柱 ( Z x l o o e m ) , o . l m o l / L N a C I洗脱 , 葱酮
一硫酸法检测 。
2
.
2
.
4 紫外光谱分析 : 在 20 一 4 0 n m 区
间进行紫外扫描 。
2
.
2
.
5 用硫酸一葱酮法测定两种多糖的含
量 ,用硫酸一咔哇法测定糖醛酸的含量 。
2
.
3 分子量测定 : 采用 S e p h a d e x G 一 1 5 0 柱
层析法 。 取标准分子量系列的 eD x t ar n , 测其
.
4 6 0
·
洗脱体积 V e , 用分子量 2 又 1 0 , 的 B l u e d e x -
tr a n 测外水体积 V 。 , 将 V e/ V 。 与分子量对
数作图得标准曲线 ,多糖按同样条件上柱求
得分子量 。
2
.
4 多糖的化学结构分析
2
.
4
.
1 单糖的组分分析 : 多糖用 2 m ol / L 三
氟 乙 酸 1 0 ℃密封水解 s h , 水解液用 7 32
( O H 一 ) 阴离子交换树脂除酸 , 旋转蒸发浓
缩 ,作纸层析检测 : 展开剂为正丁醇 一冰乙酸 -
水 , 碱性硝酸银染色 。 再作高效液相色谱分
析 : 水解液上氨基键合色谱柱 , 用示差法检
测 。
2
.
4
.
2 糖基键合分析 : a) 红外光谱分析 : 在
4 0 0 0一 4 0 0 。 m 一 `区间进行红外扫描 。 b )过碘
酸盐氧化反应 〔” : 分别取 20 m g 多糖溶解在
2 5 m L o
.
0 1 m o l / L N a IO
` 中 , 于 4 DC 避光氧
化 , 每天依时取样 , 用紫外分光光度计 , 在
2 2 3 n m 处测定 N aI O ; 的消耗量 ,至不再氧化
为止 。 同时用 0 . 01 m o l/ L N a O H 中和法测定
甲酸的释放量 。 c )S m it h 降解反应 : 将氧化完
全的反应 液 , 加 乙 二醇 以 分解未反 应 的
N a I O
4 ,透析 2 4 h , 浓缩后用 K BH ; 还原 ,放
置 12 h , 用 1%醋酸调至 p H 一 5 , 透析 24 h ,
浓干 。 用 2 m ol / L 兰氟乙酸 10 ℃水解 12 h ,
中和后浓液作纸层析检测 : 展开剂为正丁醇 -
乙醉 一水 , 澳甲酚紫显色 。
2
.
5 多糖抗氧化效果试验 : 用化学发光法测
定银杏叶多糖对氧自由基的清除作用 。 连苯
三酚在碱性条件下能迅速 自氧化释放 出
0 子 , 生成的 O 孑与鲁米诺反应而发光 〔 3 , 。 加
入 25 一 10 拜L 的银杏叶多糖样品 ,测定其发
光强度 , 并与维生素 ( V c) 作比较 , 每个样品
测 3 次取平均值 ,按清除率 一 (空白值一测定
值 /空白值 ) X 10 o %的分式算出清除率 。
3 结果与讨论
3
.
1 多糖的理化性质 : 水溶性银杏叶多糖由
2 个单一多糖组成 ,均为白色粉状物 , 不溶于
高浓度的乙醇及丙酮 、 正丁醇等有机溶剂中 ,
M iol hs 反应呈阳性 , 苟三酮反应呈阴性 ,碘
反应 L G B P 一 1 为阴性 , L G B P 一 2 呈蓝色 。
两种多糖经聚丙烯酞胺凝胶电泳和醋酸
纤维薄膜电泳 , 均为单一色带 ,经 se p h ad ex
G
一
15 0 柱层析 ,流出液均为一单峰 ,可以证明
它们均为单一组分 。 经紫外光谱检测 ,在 26 0
一 28 0 n m 处未见到核酸和蛋白质的吸收峰 。
两种多糖的分子量 、 多糖与糖醛酸含量及比
旋光度如表 1 所示 。
表 1 L G B p 一 i 和 I J G B P一 2 的性质
组份 分子量 多糖含量 糖醛酸含量 闭砂
( % )
L G B P
一
1 1
.
7 X I 气) 5 9 9 . 1 0 一 + 3 7 . 2 0
I G B P
一
2 1
.
4 X 1 0 4 9 8 4 2 一 + 12 1
.
0 。
3
.
2 多糖化学结构的分析 : L G B P 一 1 酸水解
产物经纸层析和高效液相层析 , 检出组成的
单糖及其百分含量 比为 D 一葡萄糖 : L 一 鼠李
糖 : D 一木糖 一 4 9 . 5 5 : 2 5 . 4 0 : 2 1 . 7 5 , 说明
L G B P
一
1 是以 D 一葡萄糖为主的中性杂多糖 。
红外光谱测定在 89 0 c m 一 ’ 附近有吸收峰 , 为
卜毗喃糖昔键特征峰 。 经 N al O 今氧化 , 平均每
摩尔糖基 消耗 1 . 08 m o L N al O 4 , 同时产 生
0
.
4 5 m ol 甲酸 , 可推测肯定有 1 , 6 、 1~ 3键
合的糖基〔 3〕 。 Sm it h 降解的产物水解后经纸
层析检 出甘油 、 葡萄糖 、 鼠李糖 、 木糖和少量
赤鲜醇 ,进 一步说明 L G B P 一 1 的糖基是以 件
l( ~ 6 ) ( 1~ 3) 连接为主 , 尚有少量的 1~ 4 连
接键 〔` 〕 。
L G B P
一 2 酸水解产物经纸层析和高效液
相色谱分析 , 只检出 D 一葡萄糖 , 说明 L G B P 一 2
是葡聚糖 。 红外光谱测定在 8 40 c m 一 `附近有
特征吸收峰 ,在 1 2 5 0一 9 50 c m 一 ’ 之间有一组
强峰 ,说明该多糖糖链是 a 一毗喃糖昔键 〔4〕 。经
N a IO
4 氧化 ,平均每摩尔糖基消耗 0 . 6 9 m o l
N a IO
4 ,同时产生 0 . 0 8 m o l 甲酸 。 Sm i t h 降解
有赤鲜醇 、 葡萄糖和少量甘油 , 表明 L G B P 一 2
的糖基是以 a 一 ( i ~ 4 ) ( i ~ 3 ) 和少量 ( i ~ 6 )
连接 ,其中以 a 一 (1 一4) 连接为主 。 又因该多
糖能与碘生成蓝色配合物 , 这一性质及其结
构都与直键淀粉有一定相似性 。
生物体内自由基反应与衰老关系密切 已
为人们所共识 , 而 0 牙是生物体内产生的一
种主要自由基 。 我们通过在体外产生 0 牙 ,用
银杏叶多糖作清除剂 , 并与抗氧化能力强且
常用 的自由基清除剂 V 。 作比较 , 结果见表
2
。 可 以 算 出 , 0 . 0 5 m g 的 V e 与 1 m g 的
L G B P 清除率相 当 , 说明 L G B P 对 0 子有一
定清除作用 , 初步证实 了银杏叶多糖对银杏
叶抗衰老功能会起一定作用 , 其药理活性还
需进一步的实验确证 。
表 2 L G B P 和 V c 的 0 子清除作用
薰云烹瑟淤霖燕训
参 考 文 献
I k e n a k a T
, e t a l
.
J B i o e h e m
,
1 9 6 3
,
5 4
:
3 2 8
李润 秋 . 东北师大学报 , 1 9 8 2 , ( 3 ) : 4 3
S a s a k i T
, e t a l
.
C a r b o h y d r R e s
,
1 9 7 6
, 4 7
: 9 9
张惟杰 . 复合多糖生化研究技术 . 上海 : _上海科技出版
社 , 1 9 8 7 . 1 6 3
( 1 9 9 7
一 0 2一 0 4 收稿 )
新 书 介 绍
近期由辽宁科技出版社出版的《中草药及其制剂质量分析方法 》新书 ,系统介绍了中草药及其制剂分析中
的常用方法 ,包括高效液相色谱法 ,气相色谱法 ,薄层扫描法等 ,并对这些方法的基本原理 、 操作条件 、 定性和
定量分析的程度进行了详细的论述 。 各论介绍了 20 种单味药及其制剂的含量测定方法 , 是从事中医中药科
研 、 生产 、 临床特别是开发的工作人员较好的一本工具参考书 。
本书作者赵余庆 ,男 , 40 岁 。 现任辽宁中医学院教授 。 《中草药 》杂志副主任编委 。 从事天然药物研究近二
十年 ,在国内外刊物发表学术论文 50 余篇 , 出版专著三部 。 该书是作者结合本人多年研究经验编写而成 。
本书分精装与简装两种 。 精装定价 26 . 0 元 ,简装定价 1 9 . 80 元 ,另加邮费 5 元 ,欲购者请将书款寄至 :
1 1。。 0 3 沈阳市和平区文化路 41 号沈阳飞龙保健品有限公司科技发展中心 王月敏收 ,款到即寄书 。
联系电话 : ( 0 2 4 ) 3 9 0 5 5 6 4 , 39 0 6 93 4
《中草药 》 1 9 9 7 年第 2 8 卷第 8 期 . 4 6 1 .