全 文 :广 西 植 物 Guihaia Nov.2014,34(6):865-868 http://journal.gxzw.gxib.cn
DOI:10.3969/j.issn.1000G3142.2014.06.023
赵茜,邹素兰.HPLC法测定紫苏不同来源不同部位中迷迭香酸的含量[J].广西植物,2014,34(6):865-868
ZhaoQ,ZouSL.DeterminationofrosmarinicacidindiferentpopulationsandpartsofPerillafrutescensbyHPLC[J].Guihaia,2014,34(6):865-868
HPLC法测定紫苏不同来源不同部位中迷迭香酸的含量
赵 茜1∗,邹素兰2
(1.常州卫生高等职业技术学校,江苏 常州213000;2.常州市第一人民医院药剂科,江苏 常州213003)
摘 要:采用 HPLC法测定14种不同来源紫苏不同部位的迷迭香酸的含量,并进行统计与聚类分析.结果
表明:14种来源紫苏间叶、果穗、茎及根中迷迭香酸含量均有显著差异(P<0.05),同一来源不同部位间迷迭
香酸含量也存在显著差异(P<0.05).各种来源紫苏叶中的迷迭香酸含量均最高;大部分来源紫苏果穗中迷
迭香酸的含量较紫苏茎高.14份材料经聚类分析可分成4个类群.研究结果表明紫苏果穗可能是潜在的新
药源,来源于长江中下游紫苏不同部位的迷迭香酸含量要比西南地区的高.
关键词:紫苏;迷迭香酸;不同来源不同部位;HPLC;聚类分析
中图分类号:Q946;R284.4 文献标识码:A 文章编号:1000G3142(2014)06G0865G04
Determinationofrosmarinicacidindifferent
populationsandpartsofPerilafrutescensbyHPLC
ZHAOQian1∗,ZOUSuGLan2
(1.ChangzhouHealthCollege,Changzhou213000,China;2.TheFirstPeople’s
HospitalofChangzhou,Changzhou213003,China)
Abstract:Rosmarinicacidof14diferentpopulationsandpartsofPerillafrutescenswasdeterminatedbyHPLC
method,andaldatawilbeanalysedanddiscussed,thenclusteranalysiswereperformedtoo.Theresultsshowedthat
thecontentofrosmarinicacidinleaves,ears,stemsandrootsbetween14kindsofP.frutescensweresignificantlydifG
ferenct(P<0.05),therosmarinicacidcontentindifferentpartsamongthesamepopulationalsohadsignificant
diferences(P<0.05).Thecontentsofrosmarinicacidinleavesfromvarioussourceswerethehighest.Thecontent
ofrosmarinicacidinearswerehigherthaninstemsinmostofthecolectedpopiulations.14copiesofP.frutescens
materialscouldbedividedinto4groupsbytheclusteranalysis.ThemanuscriptdisplayedthattheerasofP.frutesG
censwouldbeapotentialnewdrugsource.ThecontentofrosmarinicacidinP.frutescensmaterialsfromthemiddle
andlowerreachesoftheyangtzeriverwerehigherthanthosefromsouthwestregions.
Keywords:Perillafrutescens;rosmarinicacid;differentpopulationsandparts;HPLC;clusteranalysis
紫苏(Perillafrutescens)是一年生草本植物,
为唇形科紫苏属,有1种3变种,分别为原变种(PeG
rillafrutescensvar.frutescens);野生紫苏(Perilla
frutescensvar.acuta);耳齿变种(Perillafrutescens
var.auriculatoGdentata);回回苏(PerillafrutesG
censvar.crispa)(中国植物志编委会,1977;Parket
al.,2010).紫苏适应性很强,对土壤要求不严,全
国均有分布,其叶片、果实、茎秆等均可入药,分别称
紫苏叶(foliumperilae)、紫苏子(fructusperilae)
和紫苏梗(caulisperilae)(国家药典委员会,2010).
收稿日期:2014G01G26 修回日期:2014G03G05
基金项目:校药理学项目(CW201406)
作者简介:赵茜(1962G),女,浙江杭州人,副教授,主要从事天然药物化学和药理学研究,(EGmail)zq123126@sina.com.
∗通讯作者
迷迭香酸是广泛存在于唇形科植物中的一种酚
酸类化合物(Suetal.,2008),具有抗病毒(Kimet
al.,1999;Wiliametal.,2001)、抗炎症(Takooet
al.,2003)、抗菌(Sunetal.,2005)、抗氧化(Erkan
etal.,2008)、抗血栓和血小板凝集(Zouetal.,
1993)等活性.中国药典规定的紫苏子与紫苏梗的
指标成分是迷迭香酸,Huangetal.(2010)的研究表
明不同炮制方法下紫苏子中迷迭香酸的含量差异较
大;Aritomietal.(1985)研究表明紫苏叶中含有迷
迭香酸,Huangetal.(2012)研究表明不同品种、不
同采收期对紫苏叶中迷迭香酸的含量影响较大.此
外借助电子鼻和电子舌的分析认为,不同栽培类型
紫苏间的感官指标也存在较大差异(Laureatiet
al.,2010).然而针对不同来源紫苏不同部位中迷
迭香酸含量的比较研究尚未见有报道.本文对14
种来源不同的紫苏中迷迭香酸含量进行研究,以期
为紫苏药材质量标准的制定和非传统入药部位的利
用提供依据.
1 材料与方法
1.1材料
紫苏种质资源14份(除白苏的叶片两面全绿
外,其余13份材料的叶片均为面青背紫或两面皆
紫,但在叶片颜色深浅和形状上有较大异),搜集于
2010年秋冬季节,经鉴定均为唇形科(Lamiaceae)
紫苏属(Perilla)植物紫苏的原变种(P.frutescens
var.frutescens).2011年春季将收集的种子统一
播种,夏季采收紫苏的嫩枝叶阴干即为紫苏叶,秋季
果实成熟时拔取全株植物,阴干后脱去种子,于暗处
干燥保存,临用前粉碎过100目筛.
1.2迷迭香酸的提取与含量测定
参照Huangetal.(2012)的提取方法进行:样
品粉末0.5g,置具塞锥形瓶中,精密加入80%甲醇
50mL,密塞,称重,超声(100W,40kHz,25℃)45
min,放冷,再称重,用80%甲醇补足减少的重量,摇
匀,0.2μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得.
测定条件按照 Huangetal.(2010,2012)的方
法,稍有改动,即Agilent1100series高效液相色谱
仪,采用 ZOBAXSBGC18(4.6 mm×250 mm,5
μm),流动相为甲醇G1%磷酸(39∶61),流速1.0
mL/min,柱温25℃,检测波长330nm.以迷迭香
酸(批号111871G201203)标准品来计算各样品中迷
迭香酸含量.
1.3数据处理
应用STAT软件进行方差分析,聚类分析采用
软件SPSS17.0进行.
2 结果与分析
2.1不同来源紫苏迷迭香酸含量比较
14种不同来源不同部位紫苏中迷迭香酸含量
测定结果见表1.其中,叶中迷迭香酸含量最高的
来源于浙江临安,为(4.22±0.06)mg/g,最低的来源
于云南楚雄,为(1.25±0.04)mg/g;果穗中含量最高
的来源于福建武夷,为(2.77±0.08)mg/g,最低的来
源于贵州贵阳,为(0.13±0.06)mg/g;梗中最高的来
源于江苏姜堰,为(1.37±0.05)mg/g,最低的来源于
云南楚雄,为(0.12±0.04)mg/g;根中最高的来源于
浙江临安,为(1.49±0.06)mg/g,最低的来源于广西
南宁,为(0.02±0.01)mg/g.
由表1还可知,不同来源紫苏材料的不同部位
迷迭香酸含量均为叶中最高(P<0.05),事实上,除
迷迭香酸外紫苏叶中还含有一定量的咖啡酸(Park
etal.,2010).譬如常用中药材夏枯草(Prunella
vulgaris)的入药部位就是其果穗(国家药典委员
会,2010),而规定该药材的指标测定成分也是迷迭
香酸.本研究中除江西赣州、浙江临安、贵州贵阳三
种来源外,其余包括白苏在内的各紫苏材料果穗中
的迷迭香酸含量均比茎要高,说明如果从提高药用
植物使用效率的角度考虑,果穗也是提取迷迭香酸
很好的材料,有较高的潜在应用价值.中国药典(国
家药典委员会,2010)对紫苏梗中迷迭香酸的最低含
量要求为0.1%,即应大于1mg/g,本研究中有6种
紫苏茎中迷迭香酸含量达到此要求,可以作为紫苏
梗药材使用.另来源于浙江临安和江苏泰兴的两种
材料,其根中的迷迭香酸含量也比茎中要高,具体原
因还有待深入研究.本研究中大部分来源紫苏根中
没有检得较高含量的迷迭香酸,但这并不代表紫苏
根没有利用价值,或许根中会含有其它一些活性成
分,例如有研究者就在同科植物东紫苏根中就分离
得到了其它5种酚性成分(Huetal.,2007),至于紫
苏根中是否也含有较高含量的其他活性成分还有待
进一步研究.
2.2紫苏迷迭香酸含量的方差分析
方差分析如表2所示,结果表明不同来源紫苏
668 广 西 植 物 34卷
表1 不同来源紫苏不同部位中迷迭香酸含量
Table1 ContentsofrosmarinicacidindifferentpopulationsandpartsofPerillafrutescens
编号
No.
来源Population
部位Part(mg/g)
叶Leaf 果穗Ear 茎Stem 根Root
1 江苏姜堰Jiangyan,Jiangsu 4.19±0.04Ab 1.81±0.06Bb 1.37±0.05Ca 0.77±0.04Dc
2 四川自贡Zigong,Sichuan 1.91±0.03Ai 0.43±0.01Cg 0.52±0.04Bd 0.24±0.03Dd
3 湖南常德Changde,Hunan 3.61±0.03Ad 1.14±0.05Bd 1.04±0.04Cc 0.75±0.04Dc
4 江西赣州 Ganzhou,Jiangxi 3.74±0.05Ac 1.03±0.04Be 1.08±0.06Bc 0.15±0.07Cef
5 浙江临安Linan,Zhejiang 4.22±0.06Ab 0.70±0.06Df 1.18±0.06Cb 1.49±0.06Bb
6 广西桂林 Guilin,Guangxi 1.69±0.06Aj 0.30±0.06Bh 0.22±0.05Bfg 0.10±0.05Cf
7 江苏泰兴 Taixing,Jiangsu 3.46±0.04Ae 1.32±0.04Cc 1.17±0.05Db 1.75±0.04Ba
8 广西南宁 Nanning,Guangxi 1.02±0.06Al 0.43±0.06Bg 0.37±0.04Be 0.02±0.01Cg
9 安徽霍山 Huoshan,Anhui 3.29±0.07Af 1.20±0.04Bd 0.40±0.05Ce 0.15±0.05Def
10 云南楚雄Chuxiong,Yunnan 1.25±0.04Ak 0.26±0.05Bh 0.12±0.04Ch 0.12±0.03Cef
11 白苏Baisu 2.32±0.04Ah 0.25±0.05Bh 0.22±0.05Bfg 0.19±0.05Bde
12 贵州贵阳 Guiyang,Guizhou 2.52±0.07Ag 0.13±0.06Ci 0.25±0.05Bf 0.24±0.05Bd
13 福建武夷 Wuyi,Fujian 4.68±0.06Aa 2.77±0.08Ba 1.31±0.05Ca 0.15±0.04Def
14 广西南宁 Nanning,Guangxi 1.66±0.07Aj 0.32±0.06Bh 0.15±0.05Cgh 0.12±0.05Cef
注:大写字母代表同一行中同一来源不同部位间迷迭香酸含量差异显著(P<0.05),小写字母代表同一列中不同来源群同一部位间迷迭香酸含量差异显著(P
<0.05).
Note:Capitallettersmeansignificantdifferences(P<0.05)ofcontentofrosmarinicacidinthesamepopulationanddifferentpartsofthesamerow.Smalletters
meansignificantdifferences(P<0.05)ofcontentofrosmarinicacidinthedifferentpopulationandsamepartsofthesamecolumn.
表2 不同来源紫苏不同部位中迷迭香酸含量的方差分析
Table2 Analysisofvarianceofthecontentsofrosmarinic
acidofdifferentpopulationsandpartsofPerillafrutescens
部位
Part
F 值
Fvalue
平均值
Mean
变异系数
Coefficientsof
variation(%)
变幅
Range
叶Leaf 1643.63∗∗ 2.81±0.02a 0.71 1.02~4.68
果穗Ear 625.91∗∗ 0.86±0.05b 5.71 0.13~2.77
茎Stem 350.40∗∗ 0.67±0.04c 5.52 0.12~1.37
根Root 490.80∗∗ 0.45±0.04d 8.27 0.02~1.75
注:∗∗表示在P<0.01水平上的显著性;不同字母表示在P<0.05水平
上的显著性.
Note:∗ ∗Doubleasterisksmeanextremlysignificantdifferences(P<
0.01);Differentlettersmeansignificantdifferences(P<0.05).
的叶、果穗、茎和根中的迷迭香酸含量在0.01的水
平上差异均极显著.其中在叶中迷迭香酸含量最
高,平均为 (2.81±0.02)mg/g,变幅为1.02~4.68
mg/g,最高值与最低值相差4.59倍,变异系数为
0.71;根中含量最低,平均为(0.45±0.04)mg/g,变
幅为0.02~1.75mg/g,最高值与最低值相差87.50
倍,变异系数为8.27;果穗和茎中含量居中,最高值
与最低值相差分别为21.31和11.42倍,变异系数分
别为5.72和5.52.
2.3聚类分析
本研究利用系统聚类法进行了分析(图1),从
图1看出,14个不同来源的紫苏可以分为4个类
群,类群1与其他三个类群相距较远,类群4又和类
群2与类群3之间相距较远.从聚类分析结果可
图1 不同来源紫苏迷迭香酸的聚类分析树状图
Fig.1 Treediagramofclusteranalysisofdiferent
populationsandpartsofPerillafrutescens
知,紫苏不同来源不同部位迷迭香酸含量有较明显
的地理分布倾向,大致来源于西南区域(广西、四川、
云南、贵州)的被聚为一类,长江中游的(湖南、江西、
安徽)聚为一类,长江下游的(江苏和浙江)聚为一
类,而福建单独聚为一类.在聚类结果中,来源于江
苏姜堰的白苏与西南区域的被聚为一类,分析可能
是由实验误差造成的,具体原因有待进一步研究.
聚类后不同类群迷迭香酸的平均值如表3,各
类群在叶、果穗、茎及根中迷迭香酸含量均存在显著
差异(P<0.05).对各类群不同来源紫苏不同部位
的迷迭香酸含量进行最终聚类中心分析表明,类群
1中,除根外,在其余3个各部位中的迷迭香酸含量
最低;类群2中根中迷迭香酸含量最高,其余较低;
7686期 赵茜等:HPLC法测定紫苏不同来源不同部位中迷迭香酸的含量
类群3中,叶、果穗、茎及根中迷迭香酸含量均较低;
类群4中,除根外,在其余3个各部位中的迷迭香酸
含量最高.
表3 聚类分析后不同来源紫苏不同部位中的迷迭香酸含量
Table3 Resultsofdifferentclustersofrosmarinicacidof
differentpopulationsandpartsinPerillafrutescens
项目Item
类群1
Cluster1
类群2
Cluster2
类群3
Cluster3
类群4
Cluster4
来源数 No.of
opulations
7 2 4 1
叶
Leaf(mg/g)
1.77±
0.02D
3.84±
0.05B
3.71±
0.05C
4.68±
0.06A
果穗
Ear(mg/g)
0.30±
0.05D
1.01±
0.05C
1.29±
0.05B
2.77±
0.08A
茎
Stem(mg/g)
0.27±
0.04D
1.17±
0.05B
0.97±
0.05C
1.31±
0.05A
根
Root(mg/g)
0.15±
0.03C
1.62±
0.05A
0.72±
0.08B
0.15±
0.04C
注:大写字母表示不同类群同一部位在P<0.05水平上的显著性差异.
Note:Capitallettersmeansignificantdifferences(P<0.05)ofthesame
partinthedifferentclusters.
3 结论
本研究14份材料在叶、果穗、茎和根四个部位
中均检测到迷迭香酸的存在,而且都是在叶中迷迭
香酸的含量最高,叶、果穗、茎和根中的迷迭香酸含
量都存在极显著差异(P<0.01).而果穗和根是非
传统入药部位,而且大部分果穗中的迷迭香酸含量
高于茎,这一结果为紫苏果穗资源的利用提供了一
定的理论依据.
本研究采用系统聚类法将14种材料进行聚类
分析,结果表明可以分成4个类群,分别是来源于西
南区域(广西、四川、云南、贵州)的被聚为一类,长江
中游的(湖南、江西、安徽)聚为一类,长江下游的(江
苏和浙江)聚为一类,而福建单独聚为一类,而且不
同地域紫苏各部位的迷迭香酸含量均存在显著差异
(P<0.05).这一结论可为今后紫苏药材质量标准
的制定和非传统入药部位的选择利用奠定基础.
致谢 本研究得到常州华生制药有限公司在试
剂与仪器上的支持,在此表示衷心感谢.
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