全 文 ：广 西 植 物 Ｇｕｉｈａｉａ　３２（１）：９０－９３　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ２０１２年１月　
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－３１４２．２０１２．０１．０１８
罗汉松遗传多样性的ＳＣｏＴ分析
韦泳丽１，何新华１，２＊，罗　聪１，陈　虎１
（１．广西大学，南宁５３０００４；２．广西作物遗传改良与生物技术重点实验室，南宁５３０００７）
摘　要：采用ＳＣｏＴ分子标记技术对８份罗汉松种质材料进行遗传多样性研究。结果表明，从８０条引物中筛
选出１０条重复性好、条带清晰的引物进行ＰＣＲ扩增，共产生１３６条带，其中多态性带１２２条（占８８．９７％），８
个罗汉松种质间的遗传相似系数范围在０．３９～０．８０说明罗汉松的遗传多样性丰富。利用ＵＰＧＭＡ进行系统
的聚类分析显示，将８份罗汉松材料分为２大类；主成分分析结果与聚类分析结果相一致。可见，利用ＳＣｏＴ
分子标记可有效的分析罗汉松种质资源的遗传多样性，为罗汉松种质亲缘关系的鉴别和分类提供理论依据。
关键词：罗汉松；ＳＣｏＴ；遗传多样性；聚类分析
中图分类号：Ｑ９４９．６６　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１０００－３１４２（２０１２）０１－００９０－０４
＊ Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ　ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ　ｂｙＳＣｏＴ　ｍａｒｋｅｒｓ
ＷＥＩ　Ｙｏｎｇ－Ｌｉ　１，ＨＥ　Ｘｉｎ－Ｈｕａ１，２＊，
ＬＵＯ　Ｃｏｎｇ１，ＣＨＥＮ　Ｈｕ１
（１．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｃｒｏｐ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　８ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ＳＣｏＴ　ｍａｒｋｅｒｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ
ａ　ｔｏｔａｌ　ｏｆ　１３６ｂａｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　１０ｐｒｉｍｅｒｓ，ｏｆ　ｗｈｉｃｈ　１２２ｂａｎｄｓ（８８．９７％）ｗｅｒｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ
ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　０．３９－０．８０．Ｓｏ　ｔｈｅｒｅ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｌｙ　ｇｒｅａｔ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｐｏｄ－
ｏｃａｒｐｕｓ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ．Ａ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＵＰＧＭＡ　ａｌｓｏ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　８ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ
ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ　ｉｎｔｏ　２ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｐｒｉｎｃｉｐａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ａｎａｌｙｓｉｓ（ＰＣＡ）ｗａｓ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｓ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ
ＵＰＧＭＡ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ．ＳＣｏＴ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｃａｎ　ｂｅ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ　ｇｅｒｍ－
ｐｌａｓｍｓ，ｔｈｕｓ　ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ　ａ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｄｏｃａｒｐｕｓ；ＳＣｏＴ；ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；ｃｌｕｓｔｅｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ
　　目标起始密码子多态性分子标记（ｓｔａｒｔ　ｃｏｄｏｎ
ｔａｒｇｅｔｅｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＣｏＴ）作为一种有效的目
的基因分子标记技术可用于遗传多样性和亲缘关系
研究，已在水稻（Ｃｏｌａｒｄ等，２００９）、花生（熊发前等，
２０１０）、龙眼（陈虎等，２００９）、芒果（Ｌｕｏ等，２０１０；
２０１１）等植物上得到应用，目前尚未见有ＳＣｏＴ分子
标记在林木上应用的研究报道。罗汉松类植物是裸
子植物中引人注目的类群，有关罗汉松类植物与竹
柏类植物的系统发育分类地位目前仍然存在争论。
为此，本试验以８份罗汉松种质为试材，利用ＳＣｏＴ
分子标记技术探讨了罗汉松种质遗传多样性以及罗
汉松类植物与竹柏类植物的亲缘关系，以期为进一
步探讨罗汉松类与竹柏类植物的分类提供科学
依据。
＊ 收稿日期：２０１１－０７－２８　　修回日期：２０１１－１１－０４
基金项目：国家科技部农业科技成果转化项目 （２０１０ＧＢ２Ｅ１００３６１）；广西科学研究与技术开发项目 （桂科攻０９９２０１１－１２，桂科转０９９８００１－２３）
［Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ａｃｈｉｅｖｅｍｅｎｔｓ　Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｔａｔｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ
（２０１０ＧＢ２Ｅ１００３６１）；Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｇｕａｎｇｘｉ（ＧＫＧ０９９２０１１－１２，ＧＫＺ０９９８００１－２３）］
作者简介：韦泳丽（１９８８－），女，在读硕士生，研究方向为林木遗传育种，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｗｅｉｙｏｎｇｌｉ９２７＠１６３．ｃｏｍ。
＊通讯作者：何新华，男，教授，研究方向为果树（林木）种质资源与种质创新，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｈｏｎｅｓｔ６６２２２＠１６３．ｃｏｍ。
１　材料与方法
１．１材料及其来源
从贵港市科隆农林高新技术开发有限公司罗汉
松资源圃中采集８份罗汉松种质资源的幼叶迅速置
于液氮中带回实验室，放在－８０℃冰箱中保存（表１）。
表１　罗汉松实验材料
Ｔａｂｌｅ　１　Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ＳＣｏＴ　ａｎａｌｙｓｉｓ
实验材料 拉丁名 引种来源
竹柏 Ｐ．ｎａｇｅｉａ 广东
兰屿罗汉松 Ｐ．ｃｏｓｔａｌｉｓ 台湾
台湾罗汉松 Ｐ．ｍａｋａｉｉ 台湾
短叶罗汉松 Ｐ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｓ　ｖａｒ．ｍａｋｉ 云南
罗汉松 Ｐ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｓ 广西北海
狭叶罗汉松 Ｐ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｓ　ｖａｒ．ａｎｇｕｓｔｉｔｏｌｉｕｓ 广东
小叶罗汉松 Ｐ．ｗａｎｇｌｉ 广西贵港
珍珠罗汉松 Ｐ．ｂｒｅｖｉｆｏｌｉｕｓ 广西融水
１．２试剂
实验用的ＳＣｏＴ分子标记１－３６号引物序列参
照Ｃｏｌａｒｄ等（２００９）设计的引物合成，３７－８０号引物
参照Ｌｕｏ等（２０１０）设计的引物合成，所有引物由上
海生工合成，琼脂糖和ｄＮＴＰｓ购于上海生物工程，
ｒＴａｑＤＮＡ聚合酶和ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ购于杭州博日
科技有限公司。
１．３实验方法
１．３．１ＤＮＡ提取与检测　采用改良的ＣＴＡＢ法（陈
虎等，２００９）提取罗汉松ＤＮＡ，步骤如下：取０．５ｇ
叶片加少量ＰＶＰ用液氮研磨后，装入加有８００μＬ
２％ＣＴＡＢ提取液（６５℃预热）的２ｍＬ离心管，６５
℃水浴１ｈ，加入等体积的氯仿∶异戊醇（２４∶１）混
匀，１２　０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ；取上清液，加入等体
积氯仿∶异戊醇混匀，１２　０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ；收
集上清液，加入等体积的异丙醇，放入－３０℃沉淀２０
ｍｉｎ，１２　０００ｒ／ｍｉｎ　４℃离心１０ｍｉｎ；弃上清，用７５％
乙醇冲洗２～３次，自然晾干，加ＴＥ溶解ＤＮＡ，琼
脂糖凝胶电泳检查ＤＮＡ完整性，同时用紫外分光
光度计检测ＤＮＡ质量和浓度，稀释至５０ｎｇ／μＬ。
１．３．２ＰＣＲ扩增　ＳＣｏＴ 扩增反应体系为：模板
ＤＮＡ（５０ｎｇ／μＬ）１．０μＬ、１０×Ｂｕｆｆｅｒ（含 Ｍｇ
２＋）
２．５μＬ、１０μｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰ　０．５μＬ、ｒＴａｑＤＮＡ聚合
酶（５Ｕ／μＬ）０．４μＬ、１０μｍｏｌ／Ｌ引物１μＬ，加水至
２５μＬ。ＰＣＲ 扩增反应在 Ｂｉｏｍｅｔｒａ　Ｔｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ
ＰＣＲ仪上进行，扩增程序为９４℃预变性４ｍｉｎ；９５
℃变性５０ｓ，５０℃退火１ｍｉｎ，７２℃延伸２ｍｉｎ，共
３６个循环；最后７２℃延伸１０ｍｉｎ。扩增反应结束
后，取６μＬ扩增产物在１．８％琼脂糖凝胶中电泳，
电泳缓冲液为１×ＴＡＥ，ＥＢ染色后，利用凝胶成像
系统拍照。
１．３．３数据统计及分析　应用ＧＩｓ－２０１０凝胶成像
系统进行电泳谱带检测，手工检带除去因胶板上亮
点及点样孔所引起的计算机误检。清晰可辨的电泳
条带全部用于统计分析，按扩增条带的有无记数，当
某一扩增带出现时，赋值为“１”，不存在时赋值为
“０”。根据Ｎｅｉ－Ｌｉ（Ｎｅｉ等，１９７９）相似系数法分别计
算各种质资源的遗传相似系数和遗传距离，聚类用
不加权组平均法（ＵＰＧＭＡ）（Ｓｎｅａｔｈ等，１９７３）进行。
用ＮＴＳＹＳ－ｐｃ（Ｒｏｈｌｆ，１９９８）软件将遗传相似系数进
行Ｄｃｅｎｔｅｒ数据转化，求其特征量和特征向量，生成
主坐标三维图，进行主坐标分析。
图１　ＳＣｏＴ　７３号引物扩增结果
Ｆｉｇ．１　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｐａｔｔｅｒｎ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ｗｉｔｈ　ｐｒｉｍｅｒ　ＳＣｏＴ　７３
Ｍ：ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ；泳道１－８：竹柏，兰屿罗汉松，台湾罗汉松，
短叶罗汉松，罗汉松，狭叶罗汉松，小叶罗汉松，珍珠罗汉松。
Ｍ：ＤＬ２０００ Ｍａｒｋｅｒ；１－８：Ｐ．ｎａｇｅｉａ，Ｐ．ｃｏｓｔａｌｉｓ，Ｐ．ｍａｋａｉｉ，Ｐ．
ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｓ　ｖａｒ．ｍａｋｉ，Ｐ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｓ，Ｐ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｓ　ｖａｒ．
ａｎｇｕｓｔｉｔｏｌｉｕｓ，Ｐ．ｗａｎｇｌｉ，Ｐ．ｂｒｅｖｉｆｏｌｉｕｓ．
２　结果与分析
２．１ＳＣｏＴ多态性分析
从８０条ＳＣｏＴ分子标记引物中筛选出１０条用
于罗汉松的多态性分析，结果见图１和表２。１０条
引物共扩增出１３６条ＤＮＡ带；每条引物扩增的条
带数在１０～１８条之间，平均每条引物扩增出１３．６
条带，条带大小为３５０～３　０００ｂｐ；１０条引物扩增产
生的多态性条带为１２２条，这１０条引物平均多态性
为８８．９７％，引物９、４７、７３、７５号的ＰＣＲ扩增产物
１９１期　　　　　　　　　　　　韦泳丽等：罗汉松遗传多样性的ＳＣｏＴ分析
多态性达１００％，能将所有供试样品分开，这４条引
物可作为鉴定这些罗汉松资源的特异标记引物，引
物７４号的多态性最低，也达到了７５％，说明罗汉松
种质之间多态性非常高。
２．２罗汉松种质间遗传相似性分析
用ＮＴＳＹＳ软件计算罗汉松种质间的Ｊａｃｃａｒｄ
遗传相似系数（表３）。表３结果表明：８个罗汉松种
质间的遗传相似系数范围在０．３９～０．８０，平均遗传
相似性系数为０．６０。其中兰屿罗汉松与台湾罗汉
松的遗传相似性系数为０．８０，狭叶罗汉松与罗汉
松、小叶罗汉松与狭叶罗汉松的相似性系数分别为
０．７３、０．７２，说明它们之间的亲缘关系很近。而竹柏
与其他种质间的遗传相似性系数小，在０．３９～０．４８
之间，说明竹柏与其他罗汉松种质的亲缘关系较远，
表２　ＳＣｏＴ分析所用引物序列及扩增结果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｐｒｉｍｅｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ＳｃｏＴ　ａｎａｌｙｓｉｓ
引物编号
ＳＣｏＴ
Ｐｒｉｍｅｒ　ＩＤ
引物序列
Ｐｒｉｍｅｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ
（５′－３′）
总条带数
Ｔｏｔａｌ　Ｎｏ．ｏｆ
ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｂａｎｄｓ
多态性带数
Ｎｏ．ｏｆ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ
ｂａｎｄｓ
条带大小
（ｂｐ）
多态带百分率（％）
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ｂａｎｄｓ
９ ＣＡＡＣＡＡＴＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＡ　 １４　 １４　 ６００－２４００　 １００
４７ ＡＣＡＡＴＧＧＣＴＡＣＣＡＣＴＧＣＣ　 １６　 １６　 ５００－３０００　 １００
４８ ＡＣＡＡＴＧＧＣＴＡＣＣＡＣＴＧＧＣ　 １２　 １０　 ４００－２３００　 ８３．３
７０ ＡＣＣＡＴＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＧＣＧ　 １２　 １０　 ４００－２４００　 ８３．３
７１ ＣＣＡＴＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＧＣＣＧ　 １７　 １４　 ３５０－３０００　 ８２．３
７２ ＣＣＡＴＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＧＣＣＣ　 １４　 １２　 ４００－２３００　 ８５．７
７３ ＣＣＡＴＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＧＧＣＴ　 １８　 １８　 ４００－２３００　 １００
７４ ＣＣＡＴＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＧＧＣＡ　 １２　 ９　 ５００－２４００　 ７５
７５ ＣＣＡＴＧＧＣＴＡＣＣＡＣＣＧＧＡＧ　 １１　 １１　 １０００－２４００　 １００
７７ ＣＣＡＴＧＧＣＴＡＣＣＡＣＴＡＣＣＣ　 １０　 ８　 ８００－２７００　 ８０
平均 Ｍｅａｎ　 １３．６　 １２．２　 ８８．９７
合计Ｔｏｔａｌ　 １３６　 １２２　 ３５０－３０００
表３　罗汉松种质间的Ｊａｃｃａｒｄ遗传相似系数
Ｔａｂｌｅ　３　Ｊａｃｃａｒｄ’ｓ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　８　Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍ
竹柏
Ｐ．ｎａｇｅｉａ
兰屿罗汉松
Ｐ．ｃｏｓｔａｌｉｓ
台湾罗汉松
Ｐ．ｍａｋａｉｉ
短叶罗汉松
Ｐ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｓ
ｖａｒ．ｍａｋｉ
罗汉松
Ｐ．ｍａｃｒｏ－
ｐｈｙｌｌｕｓ
狭叶罗汉松
Ｐ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｓ
ｖａｒ．ａｎｇｕｓｔｉｔｏｌｉｕｓ
小叶罗汉松
Ｐ．ｗａｎｇｌｉ
珍珠罗汉松
Ｐ．ｂｒｅｖｉｆｏｌｉｕｓ
竹柏Ｐ．ｎａｇｅｉａ　 １．００
兰屿罗汉松
Ｐ．ｃｏｓｔａｌｉｓ
０．４８　 １．００
台湾罗汉松
Ｐ．ｍａｋａｉｉ
０．４４　 ０．８０　 １．００
短叶罗汉松
Ｐ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｓ
ｖａｒ．ｍａｋｉ
０．４３　 ０．５５　 ０．５５　 １．００
罗汉松
Ｐ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｓ
０．４１　 ０．５５　 ０．５３　 ０．５１　 １．００
狭叶罗汉松
Ｐ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｓ
ｖａｒ．ａｎｇｕｓｔｉｔｏｌｉｕｓ
０．４６　 ０．６５　 ０．６２　 ０．６２　 ０．７３　 １．００
小叶罗汉松Ｐ．ｗａｎｇｌｉ　０．３９　 ０．６４　 ０．５８　 ０．６５　 ０．６９　 ０．７２　 １．００
珍珠罗汉松
Ｐ．ｂｒｅｖｉｆｏｌｉｕｓ
０．４０　 ０．５６　 ０．４５　 ０．５７　 ０．６１　 ０．６４　 ０．６８　 １．００
　
遗传差异较大。
２．３亲缘关系分析
根据遗传相似系数，采用ＵＰＧＭＡ法构建了罗
汉松种质间的遗传关系聚类图（图２）。从图２可以
看出，以相似系数０．４３来划分，可将８个罗汉松种
质分为Ａ、Ｂ两类，竹柏单独归为Ａ组，其它７个罗
汉松类种质归为Ｂ组。在Ｂ组中，若以相似系数
０．６４划分，又可以将Ｂ组进一步分为３个亚组，兰
屿罗汉松和台湾罗汉松归为Ｂ１组，短叶罗汉松为
Ｂ２组，罗汉松、狭叶罗汉松、小叶罗汉松和珍珠罗汉
２９ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３２卷
松归为Ｂ３组。
２．４主坐标分析
利用８份罗汉松种质的遗传相似性系数进行主
坐标分析，绘制三维散点图（图３）。从主坐标图可
看出，８份种质被分为４组，第１组为竹柏，位于主
坐标图的右方，第２组为兰屿罗汉松和台湾罗汉松，
第３组为短叶罗汉松，第４组为罗汉松、狭叶罗汉
松、小叶罗汉松和珍珠罗汉松，其中第２、３、４组距离
相对较近，它们与第１组距离较远，主坐标分析结果
显示，竹柏与罗汉松在分子水平上表现出了较大的
遗传差异。
图２　罗汉松种质资源ＳＣｏＴ分子聚类分析
Ｆｉｇ．２　ＵＰＧＭＡ　Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　８　Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ
ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＳＣｏＴ　Ｍａｒｋｅｒｓ
　　比较主坐标分析结果与系统聚类分析结果可以
看出，２种方法反映出的遗传关系基本一致。但是，
主坐标分析可以从不同方向、不同层面更加直观地
显示各品系间的关系。
３　结论与讨论
ＳＣｏＴ分子标记作为一种基于ＰＣＲ 技术的新
型分子标记，具有操作简单、引物具有通用性、成本
低廉、多态性高、可获得丰富的遗传信息等诸多优点，
能更好地反映物种的遗传多样性和亲缘关系（Ｃｏｌ－
ｌａｒｄ，２００９）。同时，ＳＣｏＴ分析标记是的ＩＳＳＲ、ＲＡＰＤ
技术的有效补充，而作为目的基因标记，ＳＣｏＴ分子标
记为研究人员提供了除ＳＲＡＰ、ＴＲＡＰ等标记外一种
能跟踪性状的新分子标记技术（熊发前，２０１０）。所以
其在罗汉松分类上具有一定的可靠性。
有关竹柏类分类地位存在不同的意见。Ｓｔｉｌｅｒ
（１９１２）把竹柏类植物作为裸子植物中的新属
图３　罗汉松种质资源主坐标分析三维散点图
Ｆｉｇ．３　Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎｓ　ｐｌｏｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｉｎｃｉｐａｌ　ｃｏｏｒｄｉａｔｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ
Ｎａｇｅｉａ；Ｄｅ　Ｌａｕｂｅｎｆｅｌｓ（１９６９）修订罗汉松科时，把
竹柏类列为独立的一个属，但将属名改为Ｄｅｃｕｓｓｏ－
ｃａｒｐｕｓ，１９８７修订时恢复使用Ｎａｇｅｉａ属名而把Ｄｅ－
ｃｕｓｓｏｃａｒｐｕｓ作为该属的新异名；Ｐａｇｅ（１９８８）确认
Ｎａｇｅｉａ属名的合法性，认为该属的主要特征为具独
特的宽大多脉叶和分枝的生殖器官构造，并指出该
属为极自然的类群。吴征镒等（２００４）根据叶无中脉
而具多数近平行细脉和雌性生殖器官接近原始的枝
条状结构，把竹柏属从罗汉松科中独立出来建立单
属新科竹柏科（Ｎａｇｅｉａｃｅａｅ）。郑万钧等（１９７８）在
《中国植物志》中将竹柏类植物置于罗汉松科
（Ｐｏｄｏｃａｒｐａｃｅａｅ）罗汉松属（Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ）的竹柏组
（ｓｅｃｔ．Ｎａｇｅｉａ）内；苏应娟等（１９８８）的 ＲＡＰＤ研究
结果认为竹柏类植物应保留在罗汉松属植物中。
本研究利用ＳＣｏＴ分子标记对８种罗汉松的遗
传多样性进行了研究分析，总结为以下两点：（１）１０
条ＳＣｏＴ 分子标记引物对全部罗汉松品种模板
ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，共扩增出１３６条稳定的ＤＮＡ
条带，其大小为３５０～３　０００ｂｐ，７３号引物扩增出的
清晰条带最多，为１８条；引物７７扩增出的条带最
少，仅有１０条。１０个引物的多态性在７５％以上，平
均多态性带数百分率为８８．９７％，说明各材料具有
丰富的遗传多样性。（２）ＳＣｏＴ分析在罗汉松资源
中的遗传关系研究方面是可行的，在遗传距离０．４３
为阀值时可以分为Ａ、Ｂ两大组，Ａ组为竹柏属的竹
柏，其余罗汉松属品种为Ｂ组。若以遗传距离０．６４
为阀值时可以将Ｂ组分为３个亚组，Ｂ１组为兰屿罗
（下转第６２页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｏｎ　ｐａｇｅ　６２）
３９１期　　　　　　　　　　　　韦泳丽等：罗汉松遗传多样性的ＳＣｏＴ分析
敏感，在不同群落中的重要值存在着较大的差异。
参考文献：
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被［Ｍ］．昆明：云南科学技术出版社
吴征镒．１９８０．中国植被［Ｍ］．北京：科学出版社
云南省气象局．１９８４．云南农业气候资料集［Ｍ］．昆明：云南人
民出版社
Ｂｒｕｎａ　ＥＭ．２００３．Ａｒｅ　ｐｌａｎｔ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｆｒａｇｍｅｎｔｅｄ　ｈａｂｉｔａｔｓ　ｒｅ－
ｃｒｕｉｔｍｅｎｔ　ｌｉｍｉｔｅｄ？Ｔｅｓｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｎ　Ａｍａｚｏｎｉａｎ　ｈｅｒｂ［Ｊ］．Ｅｃｏｌｏｇｙ，
８４：９３２－９４７
Ｃｈｅｎ　ＬＤ（陈利顶），Ｆｕ　ＢＪ（傅伯杰）．２０００．Ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ，
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｔｙｐｅｓ　ｏｆ　ｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅ（干扰的类型、特征及其生
态学意义）［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｅｃｏｌ　Ｓｉｎ（生态学报），２０（４）：５８１－５８６
Ｃｏｎｎｅｌ，ＪＨ．１９７８．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎ　ｔｒｏｐｉｃａｌ　ｒａｉｎ　ｆｏｒｅｓｔｓ　ａｎｄ　ｃｏｒａｌ　ｒｅｅｆｓ
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１６－２２
（上接第９３页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｆｒｏｍ　ｐａｇｅ　９３）
汉松和金砖罗汉松；Ｂ２组为米叶罗汉松；Ｂ３组为贵
妃罗汉松、中叶罗汉松、小叶罗汉松和珍珠罗汉松。
本研究结果显示竹柏与罗汉松属的其他种质在
分子水平上表现出较大的遗传差异，它们可能属于不
同的属，因此建议将竹柏类植物单独作为一个属从罗
汉松属中独立出来。
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