全 文 ：收稿日期:2010-03-05
基金项目:辽宁省教育厅项目(No.2009A685);沈阳市科技局项目(No.1091144-9-00)
作者简介:孙立新(1967-), 女(满族), 辽宁新宾人 , 副教授 , 主要从事药物分析学研究 , Tel.024-23986365, E-mail
slx04@163.com。
文章编号:1006-2858(2010)11-0893-04
HPLC法同时测定了哥王中罗汉松脂酚和
牛蒡子苷元的含量
孙立新1 , 刘丽霞 1 , 杨雯雯1 , 赵　挺 2 , 佟立今1
(1.沈阳药科大学 药学院 , 辽宁 沈阳 110016;2.辽宁省药物研究院 ,辽宁 沈阳 110032)
摘要:目的 建立同时测定了哥王中罗汉松脂酚和牛蒡子苷元含量的方法。 方法 采用 HPLC法。
色谱柱:依利特 C18柱 (200 mm×4.6 mm, 5 μm), 流动相:甲醇-水(体积比为 45∶55), 流速:
1.0mL·min-1 , 检测波长:280nm, 柱温:30 ℃。 结果 罗汉松脂酚和牛蒡子苷元质量浓度分别在
10.0 ～ 200.0(r=0.999 8)、 5.00 ～ 100.0mg·L-1(r=0.999 7)内与峰面积呈良好的线性关系 ,平均
回收率分别为 99.6%(RSD=2.3%)和 100.6%(RSD=2.6%)。 结论 该方法适用于了哥王药材
的质量控制。
关键词:了哥王;高效液相色谱法;罗汉松脂酚;牛蒡子苷元;含量测定
中图分类号:R917　　　文献标志码:A
　　了哥王 [ Wikstroemiaindica(Linn.)C.A.
Mey.]始载于 《岭南采药录 》,为瑞香科荛花属植
物 ,又名南岭荛花 ,分布于广东 、广西 、福建 、贵州
等省区 。了哥王性寒味苦 、微辛 ,有毒 ,具有清热
解毒 、化痰散结 、消肿止痛之功效 ,临床用于呼吸
道 、泌尿道 、皮肤等感染 ,疗效较好 ,近年来药理研
究证实了哥王具有显著抗肿瘤活性[ 1] 。了哥王
主要成分为香豆素类 、木脂素类 、黄酮类 、皂苷类
等 ,罗汉松脂酚 、牛蒡子苷元为木脂素类成分 ,均
有较强的抗肿瘤活性 [ 2 -3] ,有研究表明 ,罗汉松脂
酚的抗氧化活性比维生素 C更强 ,同时还确证罗
汉松脂酚中含甲氧基的芳香环是导致其高活性的
直接原因[ 4] ;牛蒡子苷元具有明显的抗炎及免疫
调节作用[ 5] 。目前关于了哥王中有效成分的定
量分析研究主要集中于西瑞香素 、挥发油类成分
和微量元素 [ 6-9] ,木脂素成分的含量测定未见报
道 。本文作者采用 HPLC法建立同时测定了哥王
中罗汉松脂酚和牛蒡子苷元含量的方法 ,并应用
于不同产地的了哥王药材中这 2种成分的含量测
定 ,为了哥王药材的质量评价提供可靠的依据 。
1　仪器与材料
依利特 HPLC仪(大连依利特分析仪器有限
公司), N3000色谱工作站(浙江大学智能信息研
究所), TG332A分析天平 (湘仪天平仪器厂),
KQ-100型超声仪 (昆山市超声波仪器有限公
司), QE100药材粉碎机(浙江省武义县屹立工具
有限公司)。
罗汉松脂酚和牛蒡子苷元(本实验室自制 ,
经 1H-NMR、13C-NMR谱确证结构 [ 10-11] ,化学结构
式见 图 1, HPLC法测 得质量 分数 均大 于
99.0%),甲醇(色谱纯 , 山东禹王实业有限公司
禹城化工厂),乙腈(色谱纯 ,山东禹王实业有限
公司禹城化工厂),水(纯净水 ,杭州娃哈哈集团
有限公司),其余试剂(分析纯 ,市售)。
了哥王药材 9批 ,均为市售品 ,由沈阳药科大
学孙启时教授鉴定为瑞香科荛花属植物了哥王
(Wikstroemiaindica(Linn.)C.A.Mey.)。
A—Matairesinol;B—Arctigenin
Fig.1　Structuresofmatairesinol(A)andarctigenin(B)
第 27卷 第 11期
2 0 1 0年 1 1月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity
Vol.27 　No.11
Nov.2010 p.893
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2010.11.007
2　方法与结果
2.1　色谱条件及系统适用性试验
色谱柱:依利特 C18柱(200 mm×4.6 mm,
5 μm),流动相:甲醇-水(体积比为 45∶55),流速:
1.0mL·min-1 ,检测波长:280 nm,柱温:30 ℃,进
样量:20μL。
在上述色谱条件下分析 ,理论板数按罗汉松
脂酚和牛蒡子苷元计算均不低于 6 000,罗汉松脂
酚和牛蒡子苷元与相邻组分峰的分离度均大于
1.5,拖尾因子均在 0.95 ～ 1.05之间 。色谱图见
图 2。
1—Matairesinol;2—Arctigenin
Fig.2　HPLCchromatogramsofreferencesubstance(A)andsample(B)
2.2　溶液的制备
2.2.1　混合对照储备液
取罗汉松脂酚对照品约 10.0 mg,精密称定 ,
置 10mL量瓶中 ,用适量体积分数为 70%的甲醇
溶液溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,制成质量浓度为
1 000.0mg·L-1的罗汉松脂酚对照品储备液 Ⅰ 。
取牛蒡子苷元对照品约 5.0 mg, 精密称定 , 置
10 mL量瓶中 ,用适量体积分数为 70%的甲醇溶
液溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 制成质量浓度为
500.0 mg·L-1的牛蒡子苷元对照品储备液 Ⅱ ,
4 ℃备用 。精密量取对照品储备液 5.0(Ⅰ )、
5.0(Ⅱ)mL,置 25 mL量瓶中 , 用体积分数为
70%的甲醇溶液稀释至刻度 ,摇匀 ,制成罗汉松脂
酚和牛蒡 子苷元质 量浓度 分别 为 200.0、
100.0 mg·L-1的混合对照品储备液。
2.2.2　供试溶液
取了哥王干燥药材细粉(过 250 μm筛)约
1 g,精密称定 ,用 30 mL甲醇浸泡过夜 ,超声提取
3次 ,每次 30 min,减压蒸干 ,残渣用体积分数为
70%的甲醇溶液溶解并转移至 5mL量瓶中 ,稀释
至刻度 ,摇匀 ,用 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,取续滤
液即得供试溶液 。
2.3　线性关系考察
精密量取混合对照品储备液 0.5、1.0、2.0、
4.0、6.0、10.0 mL,分别至 10 mL量瓶中 ,用甲醇
定容 ,得系列标准混合对照溶液 。分别精密吸取
系列标准混合对照溶液进样分析 ,记录色谱图。
分别以对照溶液的质量浓度(ρ, mg·L-1)为横坐
标 ,峰面积(A)为纵坐标 ,绘制标准曲线 。罗汉松
脂酚回归曲线方程为 A=4.720×103ρ-2.245 ×
10
3 , r=0.999 8;牛蒡子苷元回归曲线方程为 A=
5.212×103ρ+7.611×103 , r=0.999 7。结果表
明 ,罗汉松脂酚和牛蒡子苷元质量浓度分别在
10.0 ～ 200.0、5.00 ～ 100.0 mg·L-1内与峰面积呈
良好的线性关系 。
2.4　精密度试验
取同一混合对照溶液 ,罗汉松脂酚和牛蒡子
苷元的质量浓度分别为 80.0、 40.0 mg·L-1 ,按
“ 2.1”条色谱条件连续进样 6次 ,记录色谱峰面
积 。计算罗汉松脂酚和牛蒡子苷元峰面积的 RSD
分别为 1.1%、1.7%,表明仪器精密度良好。
2.5　重复性试验
取了哥王干燥药材细粉(No.5)约 1 g,精密
称定 ,按 “2.2.2”条制备供试溶液 ,平行制备 6份 ,
按 “2.1”条色谱条件进样分析 ,记录罗汉松脂酚
和牛蒡子苷元色谱峰面积 。计算罗汉松脂酚和牛
蒡子苷元质量分数的平均值分别为 34.40 ×
10
-3%、 7.411 ×10-3%, RSD分别为 3.4%、
2.5%,表明方法的重复性良好。
2.6　稳定性试验
取供试溶液(No.5),室温放置 ,分别于 0、2、
4、6、8、12、24 h,按 “2.1”条色谱条件进样分析 ,记
录色谱峰面积。计算罗汉松脂酚和牛蒡子苷元峰
面积的 RSD分别为 3.1%、3.2%,结果表明供试
品溶液室温放置 24 h内稳定 。
2.7　回收率试验
称取已知含量的了哥王干燥药材细粉
894 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 27卷　
(No.5)约 0.5 g(罗汉松脂酚和牛蒡子苷元含量
质量分数 分别为 34.40 ×10-3%、 7.411 ×
10
-3%),共 9份 ,精密称定 ,分别加入低 、中 、高 3
个质量浓度的对照品溶液(分别相当于药材原有
含量质量分数的 50%、100%、 150%),每一质量
浓度取 3份 , 按 “ 2.2.2”条制备供试溶液 , 在
“2.1”条色谱条件进行分析 ,记录色谱图 ,计算回
收率 ,结果见表 1。罗汉松脂酚的平均回收率为
99.6%, RSD为 2.3%(n=9);牛蒡子苷元的平均
回收率为 100.6%, RSD为 2.6%(n=9),表明回
收率试验符合要求 ,方法的准确度良好。
Table1　Recoveriesofmatairesinolandarctigenin(n=9)
Component morigin/μg madded/μg mfound/μg Recovery/% x/% RSD/%
Matairesinol 172.3 86.0 261.1 103.2 99.6 2.3
172.4 86.0 261.2 103.2
171.8 86.0 258.5 100.8
171.8 172.0 340.0 97.8
171.4 172.0 340.0 98.0
171.4 172.0 339.4 97.7
171.8 258.0 426.7 98.8
171.9 258.0 428.5 99.5
172.4 258.0 423.3 97.2
Arctigenin 37.12 19.0 55.92 98.9 100.6 2.6
37.14 19.0 56.60 102.4
37.00 19.0 56.78 104.1
37.00 37.0 73.29 98.1
36.93 37.0 74.65 101.9
36.94 37.0 73.52 98.9
37.00 56.0 95.53 104.5
37.03 56.0 92.32 98.7
37.15 56.0 92.19 98.9
2.8　供试品含量测定
取 7个产地的了哥王干燥药材细粉 1.0 g,精
密称定 ,按 “ 2.2.2”条制备供试溶液 ,按 “2.1”条
色谱条件进样分析 ,按标准曲线法计算罗汉松脂
酚和牛蒡子苷元的含量 ,结果见表 2。
Table2　Contents(c)ofmatairesinolandarctigeninindiferentregions.(n=3)
No. Region Aapigeninw/%(×10-3) RSD/%
Kaempferol
w/%(×10-3) RSD/%
1 Guizhou 28.76 1.10 5.852 1.70
2 GuangxiWuzhou 60.71 0.62 33.070 0.85
3 Guangzhou 30.17 1.30 4.108 2.70
4 Guangxi 41.37 0.81 24.410 0.77
5 Guangdong1 34.40 0.95 7.411 1.30
6 Guangdong2 34.19 1.10 7.661 1.20
7 BoughtinShenyang 27.76 2.40 - -
　　 -—Meansnotdetected
3　讨论
a.罗汉松脂酚和牛蒡子苷元是木脂素类化
合物 ,均在 235、280 nm波长处有最大紫外吸收。
比较 235和 280 nm波长对样品含量测定的影响 ,
罗汉松脂酚和牛蒡子苷元对 280 nm波长较灵敏 ,
895第 11期 孙立新等:HPLC法同时测定了哥王中罗汉松脂酚和牛蒡子苷元的含量
且干扰较少 ,故确定检测波长为 280nm。
b.试用甲醇 -水 、乙腈 -水 、甲醇-磷酸 、甲醇 -
水 -四氢呋喃流动相系统 ,罗汉松脂酚和牛蒡子苷
元在甲醇 -水系统中色谱峰已达到良好分离 ,磷
酸 、四氢呋喃改性剂对色谱峰的分离无明显改善 ,
故选择甲醇 -水系统 。再调整流动相比例 ,选用甲
醇 -水(体积比 45∶55)时 ,样品中待测成分分离效
果较好 。
c.分别考察了乙醇 、体积分数为 95%的乙
醇 、70%的乙醇 、95%的甲醇溶液 、甲醇作为提取
溶剂 ,采用加热回流提取法提取了哥王中的罗汉
松脂酚和牛蒡子苷元 ,结果表明乙醇 、体积分数为
95%的乙醇溶液 、甲醇 、体积分数为 95%的甲醇
提取待测成分含量均较高且相近。以乙醇作为提
取溶剂比较加热回流提取法和超声提取法 ,结果
加热回流提取法的提取率较高 ,但其样品色谱峰
干扰较严重 ,本底较高 ,故不予采用。以甲醇作为
提取溶剂比较加热回流提取法和超声提取法 ,结
果两种提取方法待测成分的含量接近 ,但回流提
取的样品色谱峰干扰较严重 ,本底较高 ,因此采用
甲醇超声提取的方法。以甲醇为提取溶剂 ,超声
处理 15、30、45 min,结果表明超声处理 30 min样
品中的待测成分已基本提取完全 ,综合考虑提取
量和色谱峰的干扰情况 ,采用甲醇浸泡过夜 ,超声
处理 30 min提取方法 。
d.实验结果 ,了哥王中罗汉松脂酚含量明显
高于牛蒡子苷元 。不同产地了哥王中罗汉松脂酚
含量差异较小 ,而牛蒡子苷元含量差异较大 ,其中
广西梧州产地的了哥王中罗汉松脂酚和牛蒡子苷
元含量均较高 ,贵州 、广州产地的了哥王中二者含
量偏低 。
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(下转至第 909页)
896 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 27卷　
Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofsalBonangiogenesisofthechickembryochorioalantoic
membrane(CAM).MethodsForty-eight7-day-oldfertilizedeggswererandomlydividedinto6groups, PBS
(phosphatebufersolution)group, differentconcentrationsofsalB(150.00, 50.00, 16.67 and
5.56mg·L-1)groupsandVEGF(vascularendothelialgrowthfactor)group, thechorioalantoicmembrane
(CAM)modelsweremade, andthecarierswithsubjectswereputontheCAM.Afterincubationforanother
3 daysat37.8 ℃ atconstanthumidity, theireffectswereevaluated.ResultsTheangiogenesisareainsalB
150, 50 mg·L-1 groupswasobviouslyincreasedcomparedwithPBSgroup(P<0.01, P<0.05).Conclu-
sionsTheresultshowsthatsalBcanobviouslystimulateangiogenesisofthechickembryoCAM.
Keywords:salvianolicacidB;angiogenesis;chickembryochorioalantoicmembrane(CAM)
(上接第 896页)
Simultaneousdeterminationofmatairesinolandarc-
tigeninintheWikstroemiaindica(Linn.)C.A.
Mey.byHPLC
SUNLi-xin1 , LIULi-xia1 , YANGWen-wen1 , ZHAOTing2 , TONGLi-jin1
(1.SchoolofPharmacy, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China;2.LiaoningAcade-
myofPharmaceuticalIndustry, Shenyang110032, China)
Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodforsimultaneousdeterminationofmatairesinolandarcti-
genininWikstroemiaindica(Linn.)C.A.Mey..MethodsThechromatographicmethodwascarriedouton
anEliteC18 column(200 mm×4.6mm, 5μm)withthemobilephaseconsistingofamixtureofmethanol-
water(V∶V=45∶55).TheUVdetectionwavelengthwassetat280 nm.Theflowratewas1.0 mL·min-1
andthecolumntemperaturewassetat30℃.ResultsThelinearrangeswere10.0-200.0mg·L-1(r=0.999
8)formatairesinoland5.00-100.0 mg·L-1 (r=0.999 7)forarctigenin.Theaveragerecoveriesforma-
tairesinolandarctigeninwere99.6%and100.6%withRSD2.3%and2.6%, respectively.ConclusionsThe
methodisaccurate, sensitivewithgoodreproducibilityandcanbeusedforthedeterminationofthecontents
ofmatairesinolandarctigenininWikstroemiaindica(Linn.)C.A.Mey..
Keywords:Wikstroemiaindica(Linn.)C.A.Mey.;HPLC;matairesinol;arctigenin;contentdetermination
909第 11期 李玉娟等:丹酚酸 B对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生作用的影响