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五味子科木脂素类化合物抗氧化活性研究



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下稀薄不化,日 2 ~ 3 次,纳乳不香,舌苔薄白。拟
芳香化湿运脾和胃,药用陈皮 3g,茯苓 10g,姜半夏
6g,生甘草 3g,木香 3g,炒麦芽 10g,炒山药 10g,
炒银花 6g,焦白术 10g,炒山楂 10g,车前子 10g。7
剂。8 月 24 日复诊,咳嗽尚作,痰阻不化,纳乳一
般,便下欠化,日 1 ~ 2 次,舌苔薄白,拟原法。陈
皮 3g,茯苓 10g,姜半夏 6g,生甘草 3g,浙贝母
10g,前胡 6g,苏子 5g,地龙 6g,炒麦芽 10g,木香
3g,金银花 6g。7 剂。8 月 30 日三诊,痰鸣已愈,
二便调,腹软溲通,舌苔薄净,嘱患者母亲停药。
按:7 月婴儿,感邪即作喘咳,反复不已,针药
杂投,脾胃受损,痰湿内恋,已留夙根。初诊时哮
喘急性症状已控制,咳痰吐恶,便下稀薄不化,纳
乳不香,舌苔薄白,脾运失健显而易见,故先拟化
湿运脾和胃、祛痰化湿,三诊时泄止纳开,咳和痰
少。继用星附六君汤为主,健运脾胃而兼祛痰,以
杜痰再生,后因就诊不便,亦因孩子安好而停药。7
月婴儿,脏气清灵,病起 3 月,夙根未深,故调理
虽只 14 剂,疗效显著。
例 2:史某,女,45 岁。2011 年 3 月就诊,患
咳喘 3 月余,3 月前因生气后受凉发生咳喘,咳喘时
轻时重,严重时连续咳嗽,喘而喉中有哮鸣声,昼
轻夜重,痰多鼻塞,近十余日来大便秘结,胁腹胀
满,舌苔薄白,脉弦紧。诊断为哮喘,证属肝木失
达,风邪外束。予小柴胡汤加减,处方:柴胡 10g,
半夏 10g,黄芩 10g,干姜 3g,郁金 6g,枳壳 12g,
五味子 10g,丝瓜络 10g,紫菀 10,款冬花 10g,苏
叶 10g,薄荷 10g,蝉蜕 10g。7 剂,水煎服,日 1
剂。复诊:咳喘已好转,胁胀满已除,大便通畅,
不予药物,嘱患者畅情志,避风寒。
按:患者年至围绝经期,喘咳,胁腹胀满,大
便不通,脉弦紧,咳喘当属上焦肺,余症状均属肝,
依据张仲景 《伤寒论》云: “若咳者,去人参、大
枣、生姜,加五味子半升,干姜二两。”本案又加紫
菀、款冬花、丝瓜络等药,意在于其病因与发病年
龄,作为痰饮蕴郁而少阳中焦枢机不利之久咳法当
用疏肝化饮,理法方药得当,故病情好转迅速。
哮喘是作为一个缠绵难愈的疾病,古今各大论
著及医家对哮喘的认识不断更新和深入探讨和研究,
然中焦之肝与脾对哮喘发病及预后起着重要作用。
从中焦论治哮喘不失为治疗和预防哮喘的发病与恶
化一个重要手段,中焦位居表里之间可袪邪外出,
缓解哮喘,更重要的是可预防哮喘发生传变,进而
演变成喘脱危侯。以上论述了从中焦肝脾论治哮喘
机理,说明了从中焦肝脾治哮喘是符合中医传统理
论,调理中焦气机,肺脾同治,肝肺共调,为哮喘
治疗提供了又一思路,必将丰富和提高中医对哮喘
的治疗。
参考文献
[1] 张效霞. 脏腑真原 [M]. 北京:华夏出版社,2010:203
~ 206
[2] 王赛风. 董幼琪教授以脾胃为中心调制小儿反复发作疾病
经验 [J]. 中华中医药学刊,2011,29 (1) :34 ~ 35
(收稿日期 2012-01-06)
● 药 苑 ●
五味子科木脂素类化合物抗氧化活性研究*
徐 冰 杨盼盼 王佩龙 令狐浪 陈 敏△
西南大学药学院,发光与实时分析教育部重点实验室 (重庆 400715)
摘要:目的:考察从五味子科分离到的 30 种木脂素的体外抗氧化活性,筛选出具有较强抗氧化活性的化合物。
方法:通过总抗氧化能力和 DPPH自由基清除能力,对 30 种木脂素进行抗氧化活性测试。结果: (+)-安五脂素、内
消旋二氢愈创木脂酸和五味子酯甲表现出较强抗氧化活性。结论:本文研究了五味子中木脂素类的抗氧化活性,为五
味子科植物的研究开发提供参考。
关键词:五味子科 木脂素 抗氧化活性
中图分类号:R 285. 5 文献标识码:A 文章编号:1000-3649 (2012)05-0052-03
Research onAntioxidant Activity of Lignans Compound from Schisandraceae /XU Bing YANG Panpan WANG Peilong,
et al. ∥ School of Pharmaceutical Sciences,Southwest University,Key Laboratory on Luminescence and Real - Time Analysis
(Chongqing 400715,China)
Abstract:Objective:To investigate antioxidant activity of the 30lignans from schisandraceae in vitro. Methods:Detecting
the total antioxidant capacity and scavenging DPPH activity of 30lignans. RESULTS: (+)-Anwulignan,Meso-dihydroguaiaret-
ic acid and Schisantherin showed potent antioxidant ability. Conclusion:This article has studied the antioxidant activity of lignans
from schisandraceae,in order to provide a reference for the research of schisandraceae.
Keywords:Schisandraceae Lignans Antioxidant activity
* 基金项目:“国家重大科技专项重庆创新药物孵化基地”子课题“创新药物质量控制研究平台”(编号:2010ZX09401-306-1-4)资助。
△ 通讯作者:陈敏,Tel:023-68251225,E-mail:mminchen@ swu. edu. cn.
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四 川 中 医
Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine
2012 年第 30 卷第 5 期
Vol. 30,No. 5,2012
自由基含有的未成对电子,会攻击细胞膜及基
因,使细胞增殖、分化、凋亡,能诱发肿瘤、基因
突变等[1 ~ 2]。由此引起与氧化损伤相关的各种病变,
包括人体免疫功能降低、癌症、衰老、心脑血管疾
病、风湿性关节炎及白内障等[3]。而抗氧化剂是自由
基的杀手,大致可通过切断自由基链反应抑制机体
的自由基损伤,与自由基相关的酶作用或与诱导氧
化的过渡金属离子络合而发挥抗氧化作用[3 ~ 5]。合成
抗氧化剂由于其潜在的毒性和致癌作用等逐渐受到
人们的排斥。因而从天然产物中寻找高效、低毒、
价廉的天然抗氧化剂越来越受到关注。五味子科中
的木脂素抗氧化活性前人已有较多报道,对从五味
子中提得的 9 种木脂素类化合物的抗氧化作用进行
了研究,五味子酚、五味子乙素、五味子丙素等 7
种对大鼠肝微粒体诱发的脂质过氧化损伤有明显的
抑制作用。其中五味子酚抗氧化活性尤为显著[6]。五
味子乙素可提高线粒体在啮齿动物肝脏、心脏等处
的抗氧化水平。且长期使用五味子乙素能提高脑线
粒体抗氧化剂的现状以及改善线粒体结构的完整性,
从而预防缺血 /再灌注损伤[7]。刘耕陶等进行的脑缺
血及再灌注损伤的线粒体和膜体外测试显示,五味
子酚可以显著阻碍产生丙二醛以及抑制缺氧—复氧
时自由基引发的脂质过氧化损伤[8]。黄怡森等从华中
五味子中分离得到的五味子酮和从五味子中分离得
到的五味子乙素、五味子二醇对由维生素 C-NADPH
或由 Fe2+ -半胱氨酸诱发的大鼠脑、肝、肾微粒体的
脂质过氧化有显著的抑制作用,其作用强度为五味
子酮>五味子乙素>五味子二醇,比维生素 E 的作用
强[9]。谢宇等用邻苯三酚自氧化,Fenton体系的方法
考察五味子甲素、乙素、醇甲、酯甲的抗氧化活性。
结果表明,四种五味子木脂素对 O2-均有较好的抑制
作用,其中以乙素最佳,对-OH 具有同样的抑制作
用且乙素最佳[10]。
本研究对课题组分离到的五味子科 30 种木脂
素类化合物进行抗氧化活性测定,筛选具有显著抗
氧化活性的木脂素。为了全面评价五味子科木脂素
的抗氧化活性,本研究采用两种体外模拟体系,包
括总抗氧化能力和 DPPH 自由基清除能力,研究木
脂素的体外抗氧化能力,为研究和开发有效的天然
抗氧化剂及具有预防疾病作用的功能药物奠定理论
基础。
1 材料与方法
1. 1 木脂素种类 见表 1。
表 1 五味子科 30 种木脂素名称
编号 木脂素 编号 木脂素
1 新南五味子素 16 五味子酯甲
2 内南五味子酯丙 17 戈米辛 S
3 异型南五味子丁素 18 五味子酚乙
4 内南五味子乙素 19 当归酰基戈米辛 H
5 异型南五味子辛素 20 五味子甲素
(续表1)
6 内南五味子素 21 五脂素 A2
7 仁昌南五味子甲素 22 (+)-戈米辛 M2
8 仁昌南五味子乙素 23 表戈米辛 O
9 仁昌南五味子丙素 24 戈米辛 O
10 仁昌南五味子丁素 25 五味子酚
11 (+)-安五脂素 26 翼梗五味子酯
12 内消旋二氢愈创木脂酸 27 五味子酯乙
13 戈米辛 B 28 五味子醇甲
14 (-)-戈米辛 L1 29 前五味子素
15 前戈米辛 30 (±)-戈米辛 M1
1. 2 仪器与试剂 722 可见分光光度计 (上海菁华
科技仪器有限公司) ,AB135-S 型分析天平 (MET-
TLER TOLEDO) ,电热恒温水浴锅 (北京长风仪器
仪表公司) ,PHS-3C 酸度计 (成都市方舟科技开发
公司) ,TD3 低速离心机 (长沙湘仪离心机有限公
司) ,KH-100E型超声仪 (昆山禾创超声仪器有限
公司)。
磷酸二氢钾,磷酸氢二钠,氯化钠,氯化钾,
氯化铁,三氯乙酸,铁氰化钾,DPPH,无水乙醇。
以上试剂均为分析纯。
1. 3 实验方法
1. 3. 1 总抗氧化能力测定[11] 取 0. 1mg. ml-1 试样
1ml (空白组溶剂 1ml 做对照) ,加 pH6. 6 的磷酸盐
缓冲液 2. 5ml和 1%铁氰化钾溶液 2. 5ml,混合后在
50℃放置 20min,加入 10%三氯乙酸溶液 2. 5ml 混
合,取混合液 2. 5ml,加入 2. 5ml 蒸馏水和 0. 1%氯
化铁溶液 2. 5ml,混匀,静置 10min,在 700nm 处测
定吸光度 (A) ,以溶剂代替试样作为空白对照吸光
度 Ao。则总抗氧化能力 (△A)= A样 -A空。A样表示
含样品溶液的吸光度;A空表示不含样品溶液的吸光
度。
1. 3. 2 DPPH自由基清除能力测定[12-13] 用无水乙
醇将 DPPH配制成 6. 5×10-4mol. L-1 的溶液,置于冰
箱中冷藏备用,使用时用无水乙醇稀释为 1. 3 ×10-4
mol. L-1。实验共分 3 组,每组总体积为 6ml,第 1 组
在试管中加入 5mlDPPH溶液 (1. 3×10-4 mol. L-1)和
1ml无水乙醇 (试样的溶剂) ,混匀后在 517nm 波长
处测吸光度值,记为 Ao;第 2 组加入 5mlDPPH溶液
(1. 3×10-4 mol. L-1)和 1ml试样,摇匀,在室温下避
光反应 30min 后测吸光度值,记为 Ai;第 3 组加入
5ml无水乙醇 (DPPH 溶液的溶剂)和 1ml 试样混
匀,测定吸光度值记为 Aj。化合物样品质量浓度:
0. 1mg. ml-1。则清除率% = [1 - (Ai -Aj) /Ao] ×
100%。Ao 为 DPPH 溶液与无水乙醇混合液吸光度;
Ai 为 DPPH溶液与待测试液混合液吸光度;Aj 为无
水乙醇与待测试液混合液吸光度。
2 结 果
2. 1 总抗氧化能力测定 30 种木脂素的总抗氧化能
力有很大差异,化合物 11、12、14、15、16、17、
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Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine
18、21、22、24、25、29 和 30 共 13 个化合物具有
较明显的总抗氧能力,其吸光度 ΔA 在 0. 15 以上,
其中 (+)-安五脂素 (11)、内消旋二氢愈创木脂
酸 (12)、(-)-戈米辛 L1 (14)、五味子酯甲 (16)、
五味子酚乙 (18)、五脂素 A2 (21)、(+) -戈米辛
M2 (22)、前五味子素 (29)和 (±) -戈米辛 M1
(30)的吸光度 ΔA 在 0. 2 以上,其中化合物五味子
酯甲的活性最强,高于 Vc,内消旋二氢愈创木脂酸
和前五味子素的活性其次,其余几个化合物在总抗
氧化活性上表现出相当的水平。见图 1。
图 1 不同木脂素总抗氧化能力 (0. 1mg. ml-1)
2. 2 DPPH自由基清除能力测定 (+)-安五脂素
(11)、内消旋二氢愈创木脂酸 (12)和五味子酯甲
(16)均表现出较强的活性。化合物 (+) -安五脂
素的 DPPH 自由基清除率为 35. 07% ± 1. 07%,
化合物内消旋二氢愈创木脂酸和五味子酯甲的 DP-
PH自由基清除率分别为 77. 50% ±1. 64%和 77. 39%
±2. 47%,与对照品 Vc 的接近。其他大多数化合物
表现出了较弱的 DPPH 自由基清除能力,或者未表
现出 DPPH自由基清除能力。见图 2。
图 2 不同木脂素 DPPH自由基的清除能力 (0. 1mg. ml-1)
3 讨 论
总抗氧化能力测试中,活性最强的依次为:五
味子酯甲 >内消旋二氢愈创木脂酸 >前五味子素 >
(+)-安五脂素。五味子酯甲的活性最强,高于 Vc。
其结构特点为联苯环上具有亚甲二氧基结构,八元
辛烯环上具有羟基和甲氧基。DPPH自由基清除能力
测试中,化合物 (+) -安五脂素、内消旋二氢愈创
木脂酸和五味子酯甲表现出较强的活性,内消旋二
氢愈创木脂酸和五味子酯甲与对照品 Vc 清除率相接
近。对测试的 30 种木脂素,使用 2 种体外抗氧化活
性测试体系进行活性筛选,综合评价,二芳基丁烷
类木脂素 (+)-安五脂素、内消旋二氢愈创木脂酸
和联苯环辛烯类木脂素五味子酯甲表现出较强活性,
其中五味子酯甲活性最强,其余化合物均表现出较
弱或未表现出抗氧化活性。通过初步观察,五味子
科木脂素抗氧化活性与取代基的类型和数目有关。
联苯环辛烯类木脂素的抗氧化活性可能与联苯环、
辛烯环上的取代基都有关,二芳基丁烷类木脂素苯
环上的取代基位置对活性影响很大。亚甲二氧基和
羟基可能对抗氧化活性有较大影响[14 ~ 15]。
五味子作为传统中药,具有抗氧化、保肝利胆、
抗肿瘤、抗菌抑菌、镇静催眠、降血糖[16] 等作用。
由于氧化损伤参与了多种疾病过程,因此,随着对
五味子科植物抗氧化成分及作用机制的研究,对于
筛选研制治疗心脑血管病、衰老及与衰老相关的神
经退行性疾病的药物有重要意义。
参考文献
[1] Marie-Rosee VC,Martine CB,Francois C,et al. Spectro-
spic characterization of crocetin derivatives from crocus sativus and gardenia
jasminoides [J]. J Agric Food Chem,1997,45 (4) :1055 ~ 1061
[2] 刘耕陶. 氧自由基与抗氧化剂 [J]. 中国药理学通报,
1988,4 (6) :324 ~ 327
[3] 王建英,任引哲,王迎新. 氧自由基与人体健康 [J].
化学世界,2006,1:61 ~ 63
[4] 刘耕陶. 氧自由基损伤与抗氧化剂 [J]. 生理科学,
1988,8 (2) :83 ~ 84
[5] 罗成,周达,鲁晓翔. 天然产物抗氧化机理的研究进展
[J]. 食品工业科技,2009,30 (4) :335 ~ 339
[6] Lu H,Liu GT. Anti - oxidant activity of dibenzocyclooctene
lignans isolated from schisandraceae[J]. Planta Medica,1992,58 (4) :
311 ~ 313
[7] Chen N,Chiu PY,Ko KM. Schisandrin B enhances cerebral
mitochondrial antioxidant status and structural integrity,and protects against
cerebral ischemia / reperfusion injury in rats [J]. Biololgical & Pharmaceu-
tical Bulletin,2008,31 (7) :1387 ~ 1391
[8] Xue JY,Liu GT,Wei HL,Pan Y. Antioxidant activity of
two dibenzocyclooctene lignans on the aged and ischemic brain in rats[J].
Free radical Biology & Medicine,1992,12 (2) :127 ~ 135
[9] 黄诒森,何 燕,张均田. 五味子三种成分的抗氧化作用
[J]. 中国药理学与毒理学杂志,1990,4 (4) :275 ~ 277
[10] 谢 宇,陈建光,孙 新. 四种五味子木脂素抗氧化作用
实验研究. 第十届全国心血管药理学术会议暨 2010 (重庆)国际心
血管疾病与药物高峰论坛,2010:151 ~ 153
[11] Prieto P,Pineda M,Aguilar M. Spectrophotometric quanti-
tation of antioxidant capacity through the formation of a phosphomolybdenum
complex:specific application to the determination of vitamin E[J]. Analyt-
ical Biochemistry,1999,269 (2) :337 ~ 341
[12] María E,Alfredo M,Juan C,et al. DPPH and oxygen free
radicals as prooxidant of biomolecules [J]. Toxicology in Vitro,2008,
22:279 ~ 286
[13] 刘胜兰,曾艳波,韩壮,等. 海南粗榧中的木脂素及其
抗氧化活性 [J]. 河南大学学报 (医学版) ,2008,27 (3) :29 ~ 31
[14] 孙友敏,张红雨. 五味子素清除自由基构效关系的理论
解释 [J]. 淄博学院学报,2001,3 (2) :76 ~ 80
[15] 余凌虹,刘耕陶. 五味子联苯环辛烯类木脂素成分的结
构与药理活性关系和药物创新 [J]. 化学进展,2009,21 (1) :66 ~
76
[16] 史琳,王志成,冯叙桥. 五味子化学成分及药理作用的
研究进展 [J]. 药物评价研究,2011,34 (3) :208 ~ 211
(收稿日期 2012-01-07)
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2012 年第 30 卷第 5 期
Vol. 30,No. 5,2012