全 文 ：注射ＣＵＬＰ和游离ＣＡ后，ＣＵＬＰ组大鼠血清过氧
化氢下降速度和程度均明显快于游离ＣＡ组大鼠。
与游离ＣＡ相比，ＣＵＬＰ表现出较高的活性，更有效
降低高过氧化氢大鼠模型血清的过氧化氢水平。由
本文提供的ＣＵＬＰ的理化性质及药效学评价，可以
为ＣＵＬＰ的进一步研究提供依据。
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［收稿日期］２０１４－０７－０９
［基金项目］辽宁医学院校长基金项目（编号：ＸＺＪＪ２０１３０１０３）　［作者简介］郭梦鸿，女，硕士在读，研究方向：新型中药制剂，电话：
１８８４１６１０８６５，Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｍｈｌｕ１３＠１２６．ｃｏｍ　［通讯作者］孙玉琦，男，副教授，电话：０４１６－４６７３４３９，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｐｕｓｙｑ＠１６３．ｃｏｍ
葫芦科植物药材中葫芦素类成分的含量差异
郭梦鸿，孙玉琦，刘影，魏文杨　 （辽宁医学院，辽宁 锦州１２１００１）
［摘要］　目的：分别测定６种葫芦科植物药材中总葫芦素、葫芦素Ｂ、葫芦素Ｅ的含量，比较不同药材中葫芦素类成分的含量
差异。方法：建立 ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度法测定总葫芦素含量，显色剂：５％香草醛－冰醋酸－浓硫酸溶液，检测波长：５４３　ｎｍ。采用
ＨＰＬＣ同时测定葫芦素Ｂ、葫芦素Ｅ的含量，流动相：乙腈－０．１％冰醋酸水溶液（４９∶５１），检测波长２３０　ｎｍ。结果：总葫芦素含
量以木鳖子、栝楼最高，南瓜蒂最低；葫芦素Ｂ含量以甜瓜蒂最高，雪胆、栝楼、南瓜蒂均较低；葫芦素Ｅ含量以栝楼、甜瓜蒂最
高，雪胆、南瓜蒂较低。结论：所建立ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度法测定总葫芦素含量，简便、可靠、准确、重复性好。不同药材中葫芦素
类成分含量有一定差异，可作为葫芦科植物药材质量评价、新药组方药材选择、中药药效机理研究的基本依据。
［关键词］　葫芦科植物；总葫芦素；葫芦素Ｂ；葫芦素Ｅ；含量差异
［中图分类号］Ｒ９２７．２　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１－５２１３（２０１５）１７－１５５４－０５　ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１５．１７．０７
Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎｓ　ｉｎ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ　ｐｌａｎｔｓ
ＧＵＯ　Ｍｅｎｇ－ｈｏｎｇ，ＳＵＮ　Ｙｕ－ｑｉ，ＬＩＵ　Ｙｉｎｇ，ＷＥＩ　Ｗｅｎ－ｙａｎｇ （Ｌｉａｏｎｉｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ　Ｊｉｎｚｈｏｕ
１２１００１，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎｓ，ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｂ　ａｎｄ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｅ　ｉｎ　６　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ
ｐｌａｎｔｓ，ａｎｄ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅｉｒ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒａｗ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ　ＵＶ－Ｖｉｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ
ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｏｔａｌ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎｓ．Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ　ａｇｅｎｔ　ｗａｓ　５％ ｖａｎｉｌｉｎ－ｇｌａｃｉａｌ　ａｃｅｔｉｃ－ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ　ｓｕｌｆｕｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
·４５５１· 中国医院药学杂志２０１５年９月第３５卷第１７期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｓｅｐ　２０１５，Ｖｏｌ　３５，Ｎｏ．１７
ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　５４３　ｎｍ．ＨＰＬＣ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｂ　ａｎｄ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｅ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ．Ｍｏｂｉｌｅ
ｐｈａｓｅ　ｗａｓ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－ｗａｔｅｒ　ｗｉｔｈ　０．１％ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ（４９∶５１）ａｎｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　２３０　ｎｍ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ　ｃｏ－
ｃｈｉｎｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓ　ｋｉｒｉｌｏｗｉ　ｗｅｒｅ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎｓ　ｗｈｉｌｅ　ｐｅｄｉｃｅｌｕｓ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｌｏｗ－
ｅｓｔ．Ｐｅｄｉｃｅｌｕｓ　ｍｅｌｏ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｂ　ｗｈｉｌｅ　ｈｅｍｓｌｅｙａ　ａｍａｂｉｌｉｓ，ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓ　ｋｉｒｉｌｏｗｉ　ａｎｄ　ｐｅｄｉｃｅｌｕｓ
ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　ａｌ　ｗｅｒｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｌｏｗｅｒ．Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓ　ｋｉｒｉｌｏｗｉ　ａｎｄ　ｐｅｄｉｃｅｌｕｓ　ｍｅｌｏ　ｗｅｒｅ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｅ
ｗｈｉｌｅ　ｈｅｍｓｌｅｙａ　ａｍａｂｉｌｉｓ　ａｎｄ　ｐｅｄｉｃｅｌｕｓ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　ｗｅｒｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｌｏｗｅｒ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　ＵＶ－Ｖｉｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ
ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ，ｒｅｌｉａｂｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｈａｓ　ｇｏｏｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ　ｉｎ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎｓ．Ｔｈｅｒｅ　ａｒｅ　ｓｏｍｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｉｎ
ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎｓ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒａｗ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ　ｐｌａｎｔｓ，ｓｅｌｅｃｔ
ｍａｊｏｒ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｎｇ　ｈｅｒｂｓ　ｆｏｒ　ｎｅｗ　ｄｒｕｇ　ａｎｄ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈｅｒｂａｌ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ　ｐｌａｎｔｓ；ｔｏｔａｌ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎｓ；ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｂ；ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｅ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ
　　葫芦科植物分布广泛，全世界约１２５个属，９６０
个种［１］。葫芦素是从葫芦科植物中分离的一类高度
氧化的四环三萜类化合物，具有抗肿瘤、保肝、抗炎、
抗菌、治疗糖尿病与心血管疾病等功效。其中，葫芦
素抗肿瘤作用日益受到关注，可显著诱导癌细胞凋
亡，抑制癌细胞的增殖和扩散，限制肿瘤转移，细胞
毒作用等［２－４］。葫芦素Ｂ能够抑制宫颈癌细胞的活
性，通过抑制低氧诱导因子－１α（ＨＩＦ－１α）表达，抑制
肿瘤生长及细胞侵袭转移［３］，葫芦素Ｅ则能诱导细
胞凋亡、抑制细胞增殖及分化，表现细胞毒性，可用
于口腔鳞状癌的治疗［５］。目前，４０多个葫芦素成分
及上百种衍生物已被分离出来，根据其结构特点划
分为１２大类［６－７］，其中葫芦素Ｂ、Ｅ是最广泛用于体
内外抗肿瘤研究的成分。由于葫芦素Ｂ具有醇酮
结构性质不稳定，有自动氧化倾向，能被氧化成葫芦
素Ｅ［８］（图１），特别在加热或溶液状态曝光久置时
更甚，而葫芦素Ｅ性质较为稳定［９］。为全面了解葫
芦科植物药材质量控制和葫芦素类成分的含量差
异，实验中建立了总葫芦素含量测定方法考察几种
葫芦科植物药材（甜瓜蒂、雪胆、木鳖子、栝楼、天花
粉、南瓜蒂），同时测定葫芦素Ｂ、Ｅ的含量，能够更
好的对药材进行评价。
图１　葫芦素类成分结构（１）及转化过程（２）
Ｆｉｇ　１　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎｓ（１）ａｎｄ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ（２）
１　材料
ＵＶ－２５５０型ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度计（日本岛津公
司）；Ｌ－２０００　Ｅｌｉｔｅ高效液相色谱仪，配有Ｌ－２１３０
高压恒流泵，ＤＡＤ 二极管阵列检测器，Ｅｌｉｔｅ－２０００
色谱数据处理工作站（日立高新技术集团）；ＲＥ－５２Ａ
旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；ＡＬ２０４电子天
平［梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司］。
甜瓜蒂（产地：河北）、雪胆（产地：四川）、木鳖子
（产地：广西）、南瓜蒂（产地：河北）、栝楼（产地：河
北）、天花粉（产地：河北），经实验室郭伟英教授鉴定
均为葫芦科植物药材。葫芦素 Ｂ 对照品（批号
１１１９４５－２０１３０１，中国食品药品检定研究院）；葫芦素
Ｅ对照品（批号 ＭＵＳＴ－１１０９２８０３，成都曼斯特生物
科技有限公司）；香草醛（上海瀚思化工有限公司）；
乙腈为色谱纯；其他化学试剂均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度法测定总葫芦素含量
２．１．１　对照品溶液的制备　精密称取葫芦素Ｂ对
照品１０．０ｍｇ，置５０　ｍｌ量瓶中，甲醇溶解并定容至
刻度，摇匀，即得葫芦素 Ｂ对照品溶液（０．２　ｍｇ·
ｍｌ－１）。
２．１．２　供试品溶液的制备　取甜瓜蒂、雪胆、木鳖
子、栝楼、南瓜蒂、天花粉各药材粗粉约１．０ｇ，精密
称定，２５　ｍｌ甲醇回流提取３次，１　ｈ／次，过滤，合并
滤液并减压浓缩至适量，移至５０　ｍｌ量瓶中，甲醇定
容，摇匀，即得供试品溶液。
２．１．３　最大吸收波长的选择　精确量取０．５　ｍｌ葫
芦素Ｂ对照品溶液于１０　ｍｌ量瓶中，依次加入新配
制的５％香草醛－冰醋酸溶液２．０ｍｌ、浓硫酸１．０ｍｌ，
摇匀，于７０℃水浴中恒温反应３０　ｍｉｎ，冷却至室
温，冰醋酸定容，摇匀，静置１０　ｍｉｎ。ＵＶ－Ｖｉｓ分光
光度计４００～８００　ｎｍ进行全波长扫描，确定检测波
长。结果显示，葫芦素Ｂ对照品在５４３　ｎｍ处有最
大吸收。
２．１．４　线性关系考察　分别量取葫芦素Ｂ对照品
溶液０．３，０．６，０．９，１．２，１．５　ｍｌ置１０　ｍｌ量瓶中，按
“２．１．３”项下方法制备样品，于５４３　ｎｍ处测定吸光
度，以测得的吸光度为纵坐标（Ｙ），以其对应的葫芦
素Ｂ浓度为横坐标（Ｃ）进行线性回归，回归方程为：
·５５５１·中国医院药学杂志２０１５年９月第３５卷第１７期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｓｅｐ　２０１５，Ｖｏｌ　３５，Ｎｏ．１７
Ｙ＝０．０２８　６Ｃ＋０．００９　４（ｒ＝０．９９９　６），葫芦素Ｂ在
６～３０μｇ·ｍｌ
－１范围内呈良好线性关系。
２．１．５　精密度试验　精密量取葫芦素Ｂ对照品溶
液０．９　ｍｌ于１０　ｍｌ量瓶中，按“２．１．３”项下方法制备
样品，于５４３　ｎｍ处测定吸光度，连续测定６次，计
算ＲＳＤ为１．１３％。结果表明本方法的精密度良好。
２．１．６　稳定性试验　精密量取“２．１．２”项下甜瓜蒂
供试品溶液１．０ｍｌ于１０　ｍｌ量瓶中，按“２．１．３”项下
方法制备样品，于５４３　ｎｍ处测定吸光度，测定时间
为６０　ｍｉｎ，时间间隔为１０　ｍｉｎ。结果显示在６０　ｍｉｎ
内吸光度的ＲＳＤ为５．１３％，而在１０～３０　ｍｉｎ内的
ＲＳＤ为１．４１％。表明此方法在３０　ｍｉｎ后稳定性开
始下降，应在显色后３０　ｍｉｎ内测定吸光度。
２．１．７　重复性试验　精密量取“２．１．２”项下甜瓜蒂
供试品溶液１．０ｍｌ于１０　ｍｌ量瓶中，平行６份，按
“２．１．３”项下方法制备样品，于５４３　ｎｍ处测定吸光
度，测得总葫芦素平均含量（以葫芦素 Ｂ 计）为
１．７８％，ＲＳＤ为０．８２％，结果表明重复性良好。
２．１．８　加样回收率试验　精密量取“２．１．２”项下甜
瓜蒂供试品溶液１．０ｍｌ于１０　ｍｌ量瓶中，平行９份，
分别加入低、中、高浓度葫芦素Ｂ对照品溶液，按
“２．１．３”项下方法制备样品，于５４３　ｎｍ处测定吸光
度。计算加样回收率，结果见表１。由结果可知，加
样回收率试验符合含量测定要求。
表１　加样回收率试验结果 （ｎ＝９）
Ｔａｂ　１　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｓｐｉｋｅｄ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔ（ｎ＝９）
加入量／μｇ 测得总量／μｇ 回收率／％ 平均回收率／％ ＲＳＤ／％
１２．６０　 ２８．２４±０．２８　 ９９．５０
１５．７０　 ３１．２７±０．１１　 ９９．１９　 ９９．４５　 １．０４
１８．８５　 ３４．４８±０．４７　 ９９．６５
２．２　ＨＰＬＣ同时测定葫芦素Ｂ与葫芦素Ｅ的含
量［１０］
２．２．１　色谱条件与系统适用性试验　色谱柱：Ｄｉａ－
ｍｏｎｓｉｌ　Ｃ１８柱（２００　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５μｍ）；流动相：
乙腈－０．１％冰醋酸水溶液（４９∶５１）；检测波长：２３０
ｎｍ；流速：１．０ｍｌ·ｍｉｎ－１；进样量：２０μｌ；理论塔板数
按葫芦素Ｂ、葫芦素Ｅ计均不低于５　０００。
２．２．２　线性关系考察　配制一系列含有葫芦素Ｂ
和葫芦素Ｅ的混合对照品溶液，所含葫芦素Ｂ的质
量浓度为４．０，８．０，２０．０，８０．０，３２０．０μｇ·ｍｌ
－１，葫芦
素Ｅ的质量浓度为０．４，０．８，２．０，８．０，３２．０μｇ·
ｍｌ－１，按“２．２．１”项下色谱条件进行测定，绘制高效
液相色谱（ＨＰＬＣ）图见图２。以质量浓度为横坐标，
峰面积为纵坐标，得到葫芦素Ｂ和葫芦素Ｅ的回归
方程 分 别 为：Ｙ１ ＝９　８０６．７　Ｃ１ －１８０　０００ （ｒ＝
０．９９９　５），线性范围４．０～３２０．０μｇ·ｍｌ
－１；Ｙ２ ＝
４　６５５．６Ｃ２＋２４　４８８（ｒ＝０．９９９　６），线性范围０．４～
３２．０μｇ·ｍｌ
－１。
Ａ．空白溶液；Ｂ．对照品溶液；１－葫芦素Ｂ；２－葫芦素Ｅ
Ａ．ｂｌａｎｋ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ；Ｂ．ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ；１－ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｂ；２－ｃｕｃｕｒ－
ｂｉｔａｃｉｎ　Ｅ
图２　葫芦素Ｂ、Ｅ对照品 ＨＰＬＣ图
Ｆｉｇ　２　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｏｆ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｂ
ａｎｄ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｅ
２．２．３　精密度试验　取“２．２．２”项下线性关系考察
混合对照品溶液，含葫芦素Ｂ、葫芦素Ｅ的质量浓度
分别为２０，２μｇ·ｍｌ
－１，在上述色谱条件下连续进样
３次，记录葫芦素Ｂ、葫芦素Ｅ峰面积，计算ＲＳＤ分
别为０．５７％，０．６１％，表明方法精密度良好。
２．２．４　稳定性试验　取其中同一供试品溶液，每隔
２　ｈ进样，记录峰面积，计算葫芦素Ｂ、葫芦素Ｅ的
ＲＳＤ分别为０．６４％、０．７６％，表明供试品溶液在２４
ｈ内稳定。
２．２．５　重复性试验　取其中同一药材６份，按
“２．１．２”项下方法制备供试品溶液，进样分析测定。
结果葫芦素 Ｂ、葫芦素 Ｅ的 ＲＳＤ分别为０．８９％、
０．９７％，说明方法重复性良好。
２．２．６　回收率试验　精密称取已知含量同一药材
９份，按“２．１．２”项下方法制备样品溶液，分别加入
适量对照品溶液，制得含低、中、高浓度对照品的供
试品溶液。进样分析测定，计算回收率，结果葫芦素
Ｂ、葫芦素 Ｅ 平均回收率分别为９９．３３％ （ＲＳＤ
０．８６％），９９．６９％（ＲＳＤ１．１３％），表明该方法准确
性良好。
２．３　样品的测定　分别量取“２．１．２”项下甜瓜蒂、
雪胆、木鳖子、栝楼、南瓜蒂、天花粉供试品溶液
０．１　ｍｌ置１０　ｍｌ量瓶中，按“２．１”项下方法，于５４３
ｎｍ处测定吸光度，计算总葫芦素含量（以葫芦素Ｂ
计）。另精确量取各供试品溶液１　ｍｌ置１０　ｍｌ量瓶
中，甲醇定容至刻度，摇匀，按“２．２．１”项下条件进行
测定，各药材ＨＰＬＣ图谱如图３，计算葫芦素Ｂ和葫
芦素Ｅ的含量，结果见表２。
由含量测定结果可知，总葫芦素含量木鳖子、栝
楼含量较高，甜瓜蒂次之，天花粉、雪胆较低，南瓜蒂
最低。葫芦素Ｂ含量为甜瓜蒂最高，木鳖子、天花
粉相当，雪胆、栝楼、南瓜蒂均较低。葫芦素Ｅ含量
为栝楼与甜瓜蒂相当，木鳖子、天花粉较低，雪胆、南
瓜蒂很低。
·６５５１· 中国医院药学杂志２０１５年９月第３５卷第１７期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｓｅｐ　２０１５，Ｖｏｌ　３５，Ｎｏ．１７
表２　样品含量测定结果（ｎ＝３，珚ｘ±ｓ，％）
Ｔａｂ　２　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅｓ（ｎ＝３，珚ｘ±ｓ，％）
样品 甜瓜蒂 雪胆 木鳖子 南瓜蒂 栝楼 天花粉
总葫芦素（以葫芦素Ｂ计） １．８１±０．５６　 １．５３±０．３６　 ３．９２±０．１８　 ０．４１±０．３８　 ２．９９±０．５１　 １．６５±０．４９
葫芦素Ｂ　 ０．８２±０．１７　 ０．０６±０．０２　 ０．２３±０．１０　 ０．０４±０．０１　 ０．０９±０．０３　 ０．３１±０．０５
葫芦素Ｅ　 ０．３２±０．２４　 ０．０３±０．０１　 ０．１７±０．０５　 ０．０７±０．０２　 ０．３９±０．０４　 ０．１０±０．０２
ａ．甜瓜蒂；ｂ．雪胆；ｃ．木鳖子；ｄ．栝楼；ｅ．南瓜蒂；ｆ．天花粉；１－葫芦素
Ｂ；２－葫芦素Ｅ
ａ．ｐｅｄｉｃｅｌｕｓ　ｍｅｌｏ；ｂ．ｈｅｍｓｌｅｙａ　ａｍａｂｉｌｉｓ；ｃ．ｍｏｍｏｒｄｉｃａ　ｃｏｃｈｉｎｃｈｉｎｅｎ－
ｓｉｓ；ｄ．ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓ　ｋｉｒｉｌｏｗｉ；ｅ．ｐｅｄｉｃｅｌｕｓ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａ；ｆ．ｒａｄｉｘ　ｒｉｃｈｏ－
ｓａｎｔｈｉｓ；１－ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｂ；２－ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｅ
图３　６种药材 ＨＰＬＣ图
Ｆｉｇ　３　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｓｉｘ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｈｅｒｂｓ
３　讨论
对不同葫芦科植物药材中总葫芦素、葫芦素Ｂ、
葫芦素Ｅ含量进行分析，结果如图４，表明总葫芦
素、葫芦素Ｂ、Ｅ含量有一定差异，且总葫芦素含量
与葫芦素Ｂ、Ｅ含量不成线性关系。
图４　不同植物药材总葫芦素、葫芦素Ｂ、葫芦素Ｅ含量差异
Ｆｉｇ　４　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎｓ，ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｂ　ａｎｄ
ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｅ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｈｅｒｂｓ
　　甜瓜蒂中葫芦素Ｂ含量大于其他药材，而总葫
芦素含量却低于木鳖子、栝楼，产生差异的原因可能
与木鳖子含有齐墩果酸、三萜皂苷、番茄红素及其衍
生物［１１－１２］有关。而栝楼也含有许多葫芦烷化合物，
葫芦素Ｄ含量较高［１３］。另外，两者均含有一种大分
子核糖体失活蛋白（ｃｏｃｈｉｎｉｎ　Ｂ），其结构可能与显色
剂某种成分作用［１２］。雪胆含葫芦素Ｂ、Ｅ很低，总葫
芦素含量却与甜瓜蒂相当，这是由于雪胆含雪胆甲、
乙素及其他葫芦素成分较多［１４］。南瓜蒂中葫芦素
类成分含量均较低，可能存在于南瓜植物的其他部
位［１５］，果实、种子、根茎也含有大量活性化合物，具
体存在部位需进一步研究［１６］。不同葫芦科植物药
材的不同成分含量比较结果说明，总葫芦素含量与
葫芦素Ｂ、葫芦素Ｅ含量无相关关系，因此，评价葫
芦科植物的质量应以总葫芦素的含量为基础综合考
察葫芦素Ｂ、葫芦素Ｅ等多指标成分的含量。
实验过程中建立ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度法测定总葫
芦素的含量，经对显色剂５％香草醛－冰醋酸－高氯酸
溶液、５％香草醛－冰醋酸－浓硫酸溶液优化，确定最
佳显色剂为后者。通过对各影响因素的考察，确定
最终显色条件和制备条件。该显色方法受试剂用
量、反应温度、显色时间等条件影响较显著，需注意
反应后在３０　ｍｉｎ中内进行测定，以免颜色变化影响
结果。
葫芦素类成分是体内外有效的抗癌天然药物，
在抗癌方面的应用成为研究的热点。常用于原发性
肝癌的辅助治疗，对单纯型、硬化型肝癌均有较好的
疗效。另外对宫颈癌［１７］、白血病［１８］、黑色素瘤［１９］等
多种肿瘤疾病有良好的作用。可见，葫芦素类成分
具有巨大潜在价值，对葫芦科植物药材值得深入研
究。
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２９（２）：１６２－１６７．
［收稿日期］２０１４－１２－１２
［基金项目］福建省中青年教师教育科研基金资助项目（编号：ＪＡ１３１５１）　［作者简介］张志强，男，博士，助理研究员，研究方向：药理学，Ｅ－
ｍａｉｌ：ｚｚｑ＠ｆｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　［通讯作者］许建华，男，教授，研究方向：肿瘤药理学，电话：０５９１－２２８６２０２９，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｊｈ＠ｍａｉｌ．ｆｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
雷公藤红素通过活性氧诱导结肠癌ＳＷ６２０细胞凋亡
张志强，高体云，李暐，许建华　 （福建医科大学药学院，福建 福州３５０１０８）
［摘要］　目的：探讨雷公藤红素（ｃｅｌｅｓｔｒｏｌ）诱导ＫＲＡＳ驱动的结肠癌ＳＷ６２０细胞产生凋亡的作用和机制。方法：四甲基偶氮
唑蓝（ＭＴＴ）法和台盼蓝拒染法检测细胞增殖；免疫印迹法检测蛋白表达；流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡、细胞周期、
线粒体膜电位；荧光显微镜检测细胞内活性氧水平（ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）。结果：雷公藤红素明显抑制ＳＷ６２０细胞的
增殖活性；雷公藤红素下调ＳＷ６２０胞内的ｐ－Ａｋｔ、ＮＦ－κＢ、Ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达，激活ｃａｓｐａｓｅ－７、ｃａｓｐａｓｅ－３和ＰＡＲＰ；雷公藤红素增加
ＳＷ６２０细胞内的ＲＯＳ、降低线粒体膜电位、阻滞细胞周期于Ｇ２／Ｍ期和诱导凋亡。抗氧化剂Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡＣ）抑制雷
公藤红素引起的上述作用。结论：通过诱导细胞内ＲＯＳ的累积导致细胞内线粒体膜电位的下降进而触发细胞发生凋亡是雷
公藤红素诱导ＳＷ６２０细胞凋亡的作用机制之一。
［关键词］　雷公藤红素；结肠癌；活性氧；细胞周期；细胞凋亡
［中图分类号］Ｒ９６１．１　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１－５２１３（２０１５）１７－１５５８－０６　ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１５．１７．０８
Ｃｅｌａｓｔｒｏｌ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｌｏｎ　ｃａｎｃｅｒ　ＳＷ６２０　ｃｅｌｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ
ＺＨＡＮＧ　Ｚｈｉ－ｑｉａｎｇ，ＧＡＯ　Ｔｉ－ｙｕｎ，ＬＩ　Ｗｅｉ，ＸＵ　Ｊｉａｎ－ｈｕａｎ（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｊｉａｎ
Ｆｕｚｈｏｕ　３５０１０８，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃｅｌａｓｔｒｏｌ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｌｏｎ　ｃａｎｃｅｒ
ＳＷ６２０　ｃｅｌｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＭＴＴ　ｏｒ　ｔｙｐｌａｎ　ｂｌｕｅ　ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ．Ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ，ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．
ＲＯＳ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｃｅｌａｓｔｒｏｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＳＷ６２０　ｃｅｌｓ；ｃｅｌａｓｔｒｏｌ　ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｅｘｐｒｅｓ－
ｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐ－Ａｋｔ，ＮＦ－κＢ，Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃａｓｐａｓｅ　７，ｃａｓｐａｓｅ　３　ａｎｄ　ＰＡＲＰ；ｃｅｌａｓｔｒｏｌ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ＲＯＳ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，
ｄｅｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ａｎｄ　ａｒｒｅｓｔｅｄ　ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｔ　Ｇ２／Ｍ　ｉｎ　ＳＷ６２０　ｃｅｌｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｓｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃｅｌａｓｔｒｏｌ
ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｂｙ　ＮＡＣ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｉｓ　ｄｅｐｏｌａｒｉｚｅｄ　ｂｙ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ＲＯＳ，ａｎｄ
ｔｈｕｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｓ　ｔｒｉｇｇｅｄ　ｗｈｉｃｈ　ｍａｙ　ｂｅ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｆｏｒ　ｃｅｌａｓｔｒｏｌ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ＳＷ６２０　ｃｅｌｓ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ｃｅｌａｓｔｒｏｌ；ｃｏｌｏｎ　ｃａｎｃｅｒ；ＲＯＳ；ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ；ｃｅｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
　　结肠癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＣＲＣ）是最常见 的恶性肿瘤之一，在欧美及中国都有很高的发病率，
·８５５１· 中国医院药学杂志２０１５年９月第３５卷第１７期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｓｅｐ　２０１５，Ｖｏｌ　３５，Ｎｏ．１７