全 文 ：广 西 植 物 Ｇｕｉｈａｉａ　３２（３）：２９３－２９７　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ２０１２年 ５ 月 　
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－３１４２．２０１２．０５．００２
中国板栗ＥＳＴ－ＳＳＲ分子标记
在栲树中的通用性分析
李　春１，２，孙　晔１，３＊
（１．中国科学院 华南植物园，广州５１０６５０；２．中国科学院 研究生院，北京１０００４９；３．中国科学院
华南植物园 植物资源保护与可持续利用重点实验室，广州５１０６５０）
摘　要：简单重复序列也称为微卫星分子标记，不仅在同属近缘种间具有良好的通用性，甚至在近缘属间也
具有一定的通用性。本研究利用壳斗科基因组信息数据库中公布的中国板栗１２４对多态的ＥＳＴ－ＳＳＲ引物在
栲树中进行跨属（栗属到栲属）通用性研究，结果显示中国板栗ＥＳＴ－ＳＳＲ引物在栲树中通用性和多态性分别
为４２．７％和５６．６％；使用１９对多态的ＥＳＴ－ＳＳＲ引物对４个栲树自然居群的遗传多样性进行初步分析，结果
显示栲树自然居群具有较高的遗传多样性（Ｎａ＝６．１０５，Ｈｏ＝０．５６３，Ｈｅ＝０．６２１）。这些引物为栲树群体遗传
学的深入研究提供了有力工具。
关键词：中国板栗；栲树；ＥＳＴ－ＳＳＲ；通用性
中图分类号：Ｑ９４３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１０００－３１４２（２０１２）０３－０２９３－０５
＊ Ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＥＳＴ－ＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｏｆ
Ｃａｓｔａｎｅａ　ｍｏｌｉｓｓｉｍａｔｏ　Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓ　ｆａｒｇｅｓｉ
ＬＩ　Ｃｈｕｎ１，２，ＳＵＮ　Ｙｅ１，３＊
（１．Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ｂｏｔａｎｉｃａｌ　Ｇａｒｄｅｎ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０６５０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｇｒａｄｕａｔｅ　Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００４９，Ｃｈｉｎａ；３．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ
Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ　Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ｂｏｔａｎｉｃａｌ　Ｇａｒｄｅｎ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０６５０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔｓ（ＳＳＲ），ａｌｓｏ　ｋｎｏｗｎ　ａｓ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒｓ，ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｃｒｏｓｓ－ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙ　ｉｎ　ｃｌｏｓｅｌｙ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｇｅｎｕｓ　ａｎｄ　ｅｖｅｎ　ａｃｒｏｓｓ　ｇｅｎｅｒａ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｆａｍｉｌｙ．Ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ
ｓｔｕｄｙ，１２４ｐｒｉｍｅｒ　ｐａｉｒｓ　ｏｆ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＥＳＴ－ＳＳＲ　ｏｒｉｇｉｎａｌｙ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｆｒｏｍＣａｓｔａｎｅａ　ｍｏｌｌｉｓｓｉｍａ　ｗｅｒｅ　ｃｒｏｓｓ－ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ｉｎ　Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓ　ｆａｒｇｅｓｉｉ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　４２．７％ｏｆ　Ｃａｓｔａｎｅａ　ｍｏｌｌｓｓｉｍａ　ＥＳＴ－ＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙ
ｃｒｏｓｓ－ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｉｎ　Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓ　ｆａｒｇｅｓｉｉ　ａｎｄ　５６．６％ ｗｅｒｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ．Ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　４ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｃ．
ｆａｒｇｅｓｉｉ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＥＳＴ－ＳＳＲｓ，ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　Ｃ．ｆａｒｇｅｓｉｉ　ｐｏｓｓｅｓｓｅｄ　ｈｉｇｈ
ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａ＝６．１０５，Ｈｏ＝０．５６３，Ｈｅ＝０．６２１）．Ｔｈｅｓｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＥＳＴ－ＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｗｏｕｌｄ　ｐｒｏ－
ｖｉｄｅ　ａ　ｐｏｗｅｒｆｕｌ　ｔｏｏｌ　ｆｏｒ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｃ．ｆａｒｇｅｓｉｉ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃａｓｔａｎｅａ　ｍｏｌｌｉｓｓｉｍａ；Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓ　ｆａｒｇｅｓｉｉ；ＥＳＴ－ＳＳＲ；ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ
　　简单重复序列（Ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔｓ，ＳＳＲ）
是一类广泛分布在真核生物基因组的编码区和非编
码区中，由１～６个核苷酸的重复单元组成的串联重
复序列（Ｍｏｒｇａｎｔｅ　＆Ｏｌｉｖｉｅｒｉ，１９９３），它们被认为是
＊ 收稿日期：２０１１－１２－２８　　修回日期：２０１２－０２－２６
基金项目：国家自然科学基金（３０８７１９５９，３１１７０５１２）；中国科学院生命科学领域基础前沿研究专项（ＫＳＣＸ２－ＥＷ－Ｊ－２８）；大科学装置工程项目（２００９－
ＬＳＦＧＢＯＷＳ－０１）［Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ（３０８７１９５９，３１１７０５１２）；Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ　Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＫＳＣＸ２－ＥＷ－Ｊ－２８）；Ｌａｒｇｅ－Ｓｃａｌｅ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｆａｃｉｌｉｔｉｅｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｊｅｃｔ（２００９－ＬＳＦＧＢＯＷＳ－０１）］
作者简介：李春（１９８６－），男（苗），湖南龙山人，硕士研究生，研究方向为保育遗传学，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｌｃｈａｒｒｙ＠ｑｑ．ｃｏｍ。
＊通讯作者：孙晔，男，博士，从事进化植物学研究，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｓｕｎ－ｙｅ＠ｓｃｉｂ．ａｃ．ｃｎ。
动植物研究中最强大、信息含量最丰富的一种分子
标记，也称为微卫星分子标记（Ｐｅａｋａｌ 等，１９９８）。
在众多的分子标记中，微卫星分子标记以其多态性
高、共显性遗传、广泛分布、模板ＤＮＡ需求少等优
点在遗传多样性和遗传作图研究中得以广泛应用
（Ｅｓｔｏｕｐ等，１９９５；Ｇｕｐｔａ　＆ Ｖａｒｓｈｎｅｙ，２０００；Ｌｉｕ
等，２０００；Ｊａｒｎｅ　＆Ｌａｇｏｄａ，１９９６；Ｐｏｗｅｌ 等，１９９６）。
表达序列标签（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｔａｇｓ，ＥＳＴ）来源
于某一组织总ｍＲＮＡ所构建的ｃＤＮＡ，是从一个随
机选择的ｃＤＮＡ克隆进行５′端或３′端单一次测序
获得的短的ｃＤＮＡ部分序列，代表一个完整基因的
一小部分（Ｓｅｍａｇｎ等，２０１０）。ＥＳＴ－ＳＳＲ就是基于
ＥＳＴ序列开发的ＳＳＲ，与功能基因具有直接或者间
接地联系，因此它与传统的基因组ＳＳＲ相比，在适
应性进化和关联遗传学分析等方面具有更为广阔的
应用前景（Ｏｅｔｊｅｎ　＆ Ｒｅｕｓｃｈ，２００７；Ｖａｒｓｈｎｅｙ等，
２００５；Ｂａｒｂａｒá等，２００７）。ＥＳＴ－ＳＳＲ的侧翼序列比
较保守，因而引物在近缘种间可能具有通用性
（Ｂａｒｂａｒá 等，２００７，Ｚａｎｅ 等，２００２）。杨 彦 伶 等
（２００８）研究了杨树ＳＳＲ标记在柳树中的通用性，包
括ＥＳＴ－ＳＳＲ标记和基因组标记，通用性分别为５４．
２％和１０．４％。胥猛等（２００８）研究了鹅掌楸ＥＳＴ－
ＳＳＲ引物的通用性，在同属的中国马褂木和同科不
同属的白玉兰中的通用性分别为８５％和５４％。使
用近缘种的ＳＳＲ引物，省略了ＳＳＲ序列测序和引
物设计过程，具有快捷和经济的特点，在非模式物种
的研究中运用广泛。
壳斗科基因组信息数据库（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆａ－
ｇａｃｅａｅ．ｏｒｇ）是美国为恢复受到栗疫病侵害而致濒
的美洲栗种群而建立数据库，公布了大量的壳斗科
植物特别是板栗和橡树的基因组数据信息，目前已
公布中国板栗８４７　９５２个ＥＳＴ序列，其中２４　６５５个
含有ＳＳＲ序列，３　２２６个已设计ＰＣＲ引物，其中１２４
对引物已证实具有多态性。如此大量的ＥＳＴ－ＳＳＲ
序列为我国壳斗科植物遗传学研究提供大量的分子
标记。中国板栗（Ｃａｓｔａｎｅａ　ｍｏｌｌｉｓｓｉｍａ）属于壳斗科
栗属，栲属和栗属属于姊妹群，具有极密切的亲缘关
系（李建强，１９９６）。本研究使用该数据库中已证实
具有多态性的１２４对中国板栗ＥＳＴ－ＳＳＲ标记，检测
这些标记在栲树（Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓ　ｆａｒｇｅｓｉｉ）中的通用
性，以期为栲树居群遗传学、适应性进化和物种形成
等研究提供有力的工具。
１　材料与方法
１．１材料
本研究所用４个栲树居群均来自江西省（表
１）。每个居群随机选取２２－２４个个体，每两个个体
间的距离大于２５ｍ。采集新鲜嫩叶用变色硅胶保
存，使用改良的ＣＴＡＢ法提取植物基因组总ＤＮＡ
（Ｓｕｎ等，２０１０）。
表１　栲树居群信息
Ｔａｂｌｅ　１　Ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓ　ｆａｒｇｅｓｉｉ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
居群编号
Ｃｏｄｅ
采样点
Ｌｏｃａｔｉｏｎ
纬度（Ｎ）
Ｌａｔｉｔｕｄｅ
经度（Ｅ）
Ｌｏｎｇｉｔｕｄｅ
海拔 （ｍ）
Ａｌｔｉｔｕｄｅ
个体数
Ｎｕｍｂｅｒｓ
ＬＳ 庐山 ２９．５２２　 １１５．９０１　 ２３９　 ２４
ＤＧＳ 大岗山 ２７．５８５　 １１４．５６１　 ３４５　 ２４
ＪＧＳ 井冈山 ２６．５３３　 １１４．１９２　 ５２８　 ２２
ＪＬＳ 九连山 ２４．５３２　 １１４．４６２　 ６４６　 ２４
１．２ＥＳＴ－ＳＳＲ引物通用性和多态性分析
从壳斗科基因组数据库（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆａｇａｃｅ－
ａｅ．ｏｒｇ）下载中国板栗ＥＳＴ－ＳＳＲ文件包（ＣＣａｌ＿ｖ２＿
ｓｓｒＲｅｐｏｒｔ），包含了３　２２６条已经设计引物的ＥＳＴ
序列，１２４对已证实具有多态性。本实验选取这１２４
对ＥＳＴ－ＳＳＲ引物，由上海生物工程有限公司合成，
在栲树居群中扩增并进行多态性分析。ＰＣＲ扩增
反应体系为１０μＬ，包括：１×Ｂｕｆｆｅｒ（１０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ，ｐＨ８．３，５００ ｍｍｏｌ／Ｌ　ＫＣｌ，２ ｍｍｏｌ／Ｌ
ＭｇＣｌ２），２００μｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰ，１．５ｍｍｏｌ／Ｌ　ＭｇＣｌ２，
正反向引物各０．２ｍｍｏｌ／Ｌ，０．４ＵＴａｑ　ＤＮＡ聚合
酶（上海申能博彩），约２０ｎｇ　ＤＮＡ模板。扩增程
序：９４℃预变性３ｍｉｎ；然后９４℃变性４５ｓ、５０～６０
℃（引物退火温度见表２）退火４５ｓ、７２℃延伸４５ｓ，
共３５个循环；最后７２℃延伸１０ｍｉｎ。扩增产物使
用６％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，后进行银
染显色（Ｓａｎｇｕｉｎｅｔｔｉ等，１９９４）。先从４个居群中各
取两个个体进行ＥＳＴ－ＳＳＲ的预筛选实验。经检测
有清晰条带出现，即确认该引物可以在栲树中有效
扩增；如果８个个体扩增出来的条带为单态，将个体
数适当增加，结果仍为单态即确认该引物在栲树中
为单态引物。
１．３栲树遗传多样性分析
引物筛选完成后，选择了１９对多态引物进行荧
光标记（表２），对４个栲树居群进行基因分型。在
开展多重荧光标记实验时，为了尽量保证分型的准
确性，我们根据目的片段大小进行有效组合（最好保
４９２ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３２卷
表２　１９对引物信息
Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　１９ＥＳＴ－ＳＳＲ　ｌｏｃｉ
引物编号
Ｐｒｉｍｅｒ　ｃｏｄｅ
引物序列（５′－３′）
Ｐｒｉｍｅｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ（５′－３′）
荧光标记
Ｌａｂｅｌｉｎｇ　ｄｙｅ
Ｔｍ Ｎａ Ｎｅ Ｈｏ Ｈｅ ＦＩＳ
ＣＣ７３７８ ＣＡＣＴＣＴＣＴＣＣＧＧＴＣＣＡＴＧＡＴ　 ＴＡＭＲＡ　 ５７　 ４．０００　 ２．０４３　 ０．４７９　 ０．５１０　 ０．０６８
ＡＡＴＧＴＧＧＣＧＡＧＴＴＣＧＧＴＡＡＣ
ＣＣ７０４ ＣＡＴＣＡＴＧＧＣＡＣＧＡＡＣＴＣＡＴＣ　 ＨＥＸ　 ５６　 ３．０００　 １．０６６　 ０．０４３　 ０．０６２　 ０．３２１
ＧＡＡＧＣＡＡＧＧＣＡＴＧＡＧＴＧＡＣＡ
ＣＣ５２２３ ＡＧＡＡＡＡＡＧＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡ　 ＲＯＸ　 ６０　 ２．０００　 １．９７３　 ０．５００　 ０．４９３ －０．００９
ＡＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＡＣＡＡＣＡＣＣＡ
ＣＣ４３２３ ＴＣＧＧＴＡＣＡＡＣＴＴＣＴＧＧＧＴＣＣ　 ＦＡＭ　 ６０　 ６．０００　 ３．８９１　 ０．６９１　 ０．７４３　 ０．０７５
ＡＧＣＣＴＣＴＴＣＴＣＣＡＣＡＡＣＧＡＡ
ＣＣ４２８６０ ＴＴＧＴＣＣＡＴＡＧＣＣＡＡＡＧＣＡＡＡ　 ＨＥＸ　 ５９　 ５．０００　 ２．０２３　 ０．４６８　 ０．５０６　 ０．０８０
ＧＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＴＡＡＣＣＣＡＡＡ
ＣＣ４１００４ ＴＧＣＡＴＡＣＡＴＡＣＣＡＡＣＣＣＣＡＧ　 ＲＯＸ　 ６０　 １２．０００　 ７．６９０　 ０．６８１　 ０．８７０　 ０．２２２＊
ＧＧＴＣＴＴＣＴＣＣＴＣＧＣＴＣＣＴＴＴ
ＣＣ４０３ ＧＡＡＧＡＡＣＴＴＧＴＴＧＡＡＧＧＣＣＧ　 ＴＡＭＲＡ　 ５７　 ９．０００　 ３．５６０　 ０．６７７　 ０．７１９　 ０．０６３
ＣＡＣＣＡＴＴＣＣＡＡＴＴＧＧＴＧＡＣＡ
ＣＣ３７５４ ＣＡＡＡＡＣＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＡＧＡ　 ＲＯＸ　 ５７　 １０．０００　 ５．５０７　 ０．５８５　 ０．８１８　 ０．２９０＊
ＧＴＡＧＡＧＧＣＣＡＣＡＧＡＧＧＣＡＡＧ
ＣＣ３３０７９ ＣＴＣＴＣＣＣＧＡＧＴＣＡＣＧＡＡＧＡＣ　 ＲＯＸ　 ５６　 ４．０００　 ２．２１１　 ０．４７９　 ０．５４８　 ０．１３１
ＣＧＡＡＡＣＣＣＴＡＧＧＡＡＧＧＡＡＧＧ
ＣＣ２９８４６ ＧＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＴＡＴＣＴＧＴＧＡ　 ＦＡＭ　 ５７　 ５．０００　 １．８６０　 ０．４６８　 ０．４６２ －０．００７
ＡＣＴＴＣＴＣＣＡＡＡＡＧＧＣＴＧＣＡＡ
ＣＣ　２４４８ ＡＴＴＴＣＣＣＡＴＧＴＧＣＴＣＡＡＡＣＣ　 ＴＡＭＲＡ　 ５６　 ３．０００　 ２．２１７　 ０．６２８　 ０．５４９ －０．１３８
ＧＧＣＡＴＴＧＧＡＧＴＴＣＡＣＣＴＴＧＴ
ＣＣ　２０９１ ＴＴＴＧＣＡＡＡＡＧＡＴＧＴＧＧＴＧＧＡ　 ＨＥＸ　 ６０　 １１．０００　 ５．６２２　 ０．７９３　 ０．８２２　 ０．０４０
ＴＡＣＡＡＡＧＣＣＡＣＣＣＴＡＴＴＧＧＣ
ＣＣ２０３０３ ＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＴＴＴＣＣＣＡＡＡＧ　 ＴＡＭＲＡ　 ５８　 ５．０００　 １．５３４　 ０．２９８　 ０．３４８　 ０．１４９
ＡＧＡＡＧＡＧＣＴＴＣＣＴＴＣＣＣＣＴＧ
ＣＣ２０２２３ ＧＧＣＡＡＴＧＣＡＧＴＧＡＣＡＡＡＡＧＡ　 ＲＯＸ　 ５７　 ７．０００　 ５．１５１　 ０．６０６　 ０．８０６　 ０．２５３＊
ＡＧＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＴＴＣＣＧＡＴ
ＣＣ１９４４ ＴＴＣＡＧＡＡＡＴＣＡＧＡＧＣＡＧＣＧＡ　 ＨＥＸ　 ５７　 ９．０００　 ４．４５４　 ０．７８５　 ０．７７５ －０．００７
ＴＣＣＡＣＡＣＣＡＡＧＡＡＡＴＣＣＣＴＣ
ＣＣ１９３２２ ＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＡＡＴＧＧＴＡＴＡＧＡ　 ＲＯＸ　 ５５　 ５．０００　 ２．７９６　 ０．７１０　 ０．６４２ －０．１００
ＧＴＴＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＡＧＣＧＴＴＧ
ＣＣ１７３５４ ＣＧＡＡＡＧＧＡＧＡＧＣＡＧＧＡＡＡＴＧ　 ＲＯＸ　 ５７　 ４．０００　 ３．１３２　 ０．５２１　 ０．６８１　 ０．２３９＊
ＴＣＴＣＡＡＣＧＣＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＴ
ＣＣ１４８２６ ＧＡＡＡＣＡＡＣＡＧＧＣＴＣＴＧＣＣＴＣ　 ＨＥＸ　 ５７　 ５．０００　 ２．６６８　 ０．６４１　 ０．６２５ －０．０２０
ＣＴＧＧＧＡＡＡＡＴＣＣＧＡＡＣＴＣＡＡ
ＣＣ１２５ ＣＣＧＴＴＣＴＣＣＴＣＡＣＴＣＣＴＣＡＧ　 ＴＡＭＲＡ　 ５４　 ７．０００　 ５．４５１　 ０．６４９　 ０．８１７　 ０．２１０＊
ＣＣＣＡＴＴＴＧＧＡＴＡＡＡＣＡＡＣＡＣＡ
　　平均值 Ｍｅａｎ　ｖａｌｕｅ　 ６．１０５　 ３．４１３　 ０．５６３　 ０．６２１　 ０．０９８
　注：Ｔｍ为退火温度；Ｎａ为观测等位基因；Ｎｅ为有效等位基因；Ｈｏ为观测杂合度；Ｈｅ为期望杂合度；ＦＩＳ为固定指数；＊显著偏离哈温
平衡（Ｐ＜０．０５）。下同。
　Ｎｏｔｅ：Ｔｍ，ａｎｎｅａｌ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ；Ｎａ，ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ａｌｅｌｅｓ；Ｎｅ，ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ａｌｅｌｅｓ；Ｈｏ，ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ；Ｈｅ，ｅｘｐｅｃｔｅｄ　ｈｅｔｅｒｏｚｙ－
ｇｏｓｉｔｙ；ＦＩＳ，ｆｉｘａｔｉｏｎ　ｉｎｄｅｘ；＊ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｅｐａｒｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｅｌｏｗ．
证不同荧光的目的片段有５０ｂｐ的间隔），减少引物
间的相互影响。同时为了避免影子带（Ｓｔｕｔｔｅｒ）可能
产生的干扰，所以只选择了这１９对带型非常清晰的
引物进行了群体的基因分型。ＰＣＲ条件同上所述，
ＰＣＲ产物使用ＡＢＩ３７７测序仪电泳分离，内标使用
ＬＩＺ５００。用 ＧｅｎｅＭａｒｋｅｒ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｏｆｔｇｅｎｅｔ－
ｉｃｓ．ｃｏｍ／ＧｅｎｅＭａｒｋｅｒ．ｈｔｍｌ）确定各位点上的等位
基因；用ＧｅｎＡｌＥｘ　６（Ｐｅａｋａｌ　＆Ｓｍｏｕｓｅ，２００６）计算
观测等位基因数（Ｎａ）、有效等位基因数（Ｎｅ）、观测
杂合度（Ｈｏ）、期望杂合度（Ｈｅ）；用ＦＳＴＡＴ　２．９．３
（Ｇｏｕｄｅｔ，２００１）计算固定指数（ＦＩＳ），并检测哈迪－
温伯格平衡和连锁不平衡。
５９２３期　　　　　　　　 李春等：中国板栗ＥＳＴ－ＳＳＲ分子标记在栲树中的通用性分析
表３　栲树居群遗传多样性
Ｔａｂｌｅ　３　Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ　Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓ　ｆａｒｇｅｓｉｉ
居群编号Ｃｏｄｅ　 Ｎａ　 Ｎｅ　 Ｈｏ　 Ｈｅ　 ＦＩＳ
九连山ＪＬＳ　 ４．８４２　 ３．０２６　 ０．４９８　 ０．５６２　 ０．１１４
大岗山ＤＧＳ　 ４．９３９　 ３．０９４　 ０．５１６　 ０．５６９ －０．０２６
井冈山ＪＧＳ　 ５．０９４　 ３．２０２　 ０．５４１　 ０．５９７　 ０．０２６
庐山ＬＳ　 ５．２５７　 ３．２６６　 ０．５４７　 ０．６０３ －０．００６
平均 ｍｅａｎ　 ５．０３３　 ３．１４７　 ０．５２６　 ０．５８３　 ０．０２７
２　研究结果
２．１ＥＳＴ－ＳＳＲ引物的通用性和多态性
引物筛选实验结果表明在１２４对中国板栗
ＥＳＴ－ＳＳＲ引物中，有５３对能在栲树上扩增出清晰
的条带，其中３０对具有多态性，２３对为单态引物，
通用性（通用性＝有效扩增引物数量÷引物总数×
１００％）和多态性（多态性＝有效扩增的多态引物数
量÷有效扩增引物数量×１００％）分别为４２．７％和
５６．６％。
２．２栲树物种及居群遗传多样性
１９个位点共检测到１１６个等位基因，每个位点
上等位基因数目为２～１２个，平均６．１０５；有效等位
基因数（Ｎｅ）为１．０６６～７．６９０，平均３．４１３；观测杂
合度（Ｈｏ）为０．０４３～０．７９３，平均０．５６３；期望杂合
度（Ｈｅ）为０．０６２～０．８７０，平均０．６２１；使用Ｂｏｎｆｅｒ－
ｒｏｎｉ校正后，有５个位点显著偏离哈迪－温伯格平衡
（Ｐ＜０．０５），但未检测到连锁不平衡现象（Ｒｉｃｅ，
１９８９）（表２）。
４个居群的等位基因数（Ｎａ）为４．８４２～５．２５７，
平均５．０３３；有效等位基因数（Ｎｅ）为 ３．０２６～
３．２６６，平均３．１４７；平均观测杂合度（Ｈｏ）为０．５２６，
平均期望杂合度（Ｈｅ）为０．５８３。观测杂合度（Ｈｏ）
庐山居群最高，九连山居群最小；固定指数（ＦＩＳ）大
岗山居群最小，九连山居群最高；４个居群均符合哈
迪－温伯格平衡（表３）。
３　结论与讨论
ＳＳＲ标记的引物常在属内种间、以及亲缘关系
较近的属间具有保守性，这一特点使得ＳＳＲ标记可
以在种间，甚至是属间可转移使用（Ｐｅａｋａｌ 等，
１９９８）。与传统引物开发方法相比，ＳＳＲ引物在近
缘种属间的可转移性应用大大地降低了ＳＳＲ引物
的开发成本。Ｂａｒｂａｒá等（２００７）统计了１９９７～２００６
年发表在 Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｅｃｏｌｏｇｙ和 Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｅｃｏｌｏｇｙ
Ｎｏｔｅｓ等期刊上有关ＳＳＲ引物的６４篇文章，结果显
示引物在种间通用性的高低与２个物种亲缘关系远
近具有相关性，亲缘关系越近，引物的通用性越高。
Ｕｅｎｏ等（２００９）研究了栲属植物Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓ　ｓｉｅｂｏｌ－
ｄｉｉ的１６对ＥＳＴ－ＳＳＲ引物在水青冈属（Ｆａｇｕｓ）、柯
属（Ｌｉｔｈｏｃａｒｐｕｓ）、栗属（Ｃａｓｔａｎｅａ）和栎属（Ｑｕｅｒｃｕｓ）
４属８个种中的通用性，结果在３７．５％～８７．５％之
间。本研究和上述研究结果接近。１２４对中国板栗
引物中筛选得到５３对（４２．７％）引物能在栲树上有
效扩增，其中３０对（５５．６％）具有多态性。
徐立安等（２００１）利用核基因组ＳＳＲ研究了福
建省４个栲树居群的遗传多样性，Ｎａ＝９，Ｈｏ＝
０．６９，Ｈｅ＝０．６５。本研究利用１９个ＥＳＴ－ＳＳＲ标记
揭示栲树具有较高的遗传多样性。在江西省的４个
栲树居群中，Ｎａ＝６．１０５，Ｈｏ＝０．５６３，Ｈｅ＝０．６２１。
与徐立安等（２００１）的研究结果相比，本研究中ＥＳＴ－
ＳＳＲ揭示的遗传多样性相对偏低。ＥＳＴ是基因转
录序列，因受到功能的约束而具有较强的保守性。
已有研究证实在一些木本树种如杨树和欧洲板栗中
ＥＳＴ－ＳＳＲ多态性较Ｇｅｎｏｍｉｃ－ＳＳＲ偏低（宋跃朋等，
２０１０；Ｍａｒｔｉｎ等，２０１０）。更有证据表明 ＥＳＴ－ＳＳＲ
具有功能上的重要性（Ｌｉ等，２００４；Ｒｏｏｒｋｉｗａｌ　＆
Ｓｈａｒｍａｌ，２０１１）。
１９个ＥＳＴ－ＳＳＲ位点中有５个位点偏离哈温平
衡。经ＦｒｅｅＮＡ（Ｃｈａｐｕｉｓ　＆Ｅｓｔｏｕｐ　２００７）检测，这
５个位点的零等位基因频率偏高（数据未显示），因
此可能是零等位基因频率偏高或者样本量偏少导致
这些位点偏离了哈温平衡。
近年来，随着测序技术的发展及费用的降低，各
个数据库公布的ＥＳＴ序列呈爆炸式增长。壳斗科
植物基因组信息数据库公布的大量ＥＳＴ序列，为壳
斗科植物的分子生物学研究提供了宝贵的资源。栲
树是我国亚热带常绿阔叶林的建群种，广泛分布于
我国长江以南各地，具有重要的经济与生态价值。
我国栲树遗传多样性的研究有利于对栲树生物资源
保护和合理的开发利用提供科学依据。本研究获得
的３０对多态的ＥＳＴ－ＳＳＲ引物不仅为栲树居群遗传
学研究提供了有力的工具，另外，由于ＥＳＴ－ＳＳＲ是
与功能基因直接或者间接相关的，本研究筛选得到
的ＥＳＴ－ＳＳＲ引物为栲树的适应性进化和物种形成
６９２ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３２卷
研究提供了合适的工具。
参考文献：
ＢａｒｂａｒáＴ，Ｐａｌｍａ－Ｓｉｌｖａ　Ｃ，Ｐａｇｇｉ　ＧＭ，ｅｔ　ａｌ．２００７．Ｃｒｏｓｓ－ｓｐｅｃｉｅｓ
ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ　ｍａｒｋｅｒｓ：ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ａｎｄ　ｌｉｍｉｔａ－
ｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｅｃｏｌ，１６（１８）：３　７５９－３　７６７
Ｂｕｒｎｈａｍ　ＣＲ．１９８８．Ｔｈｅ　ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　ｃｈｅｓｔｎｕｔ：
ｍｅｎｄｅｌｉａｎ　ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ｍａｙ　ｓｏｌｖｅ　ａ　ｐｒｏｂｌｅｍ　ｔｈａｔ　ｈａｓ　ｒｅｓｉｓｔｅｄ　ｏｔｈｅｒ
ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ［Ｊ］．Ａｍ　Ｓｃｉ，７６（５）：４７８－４８７
Ｃｈａｐｕｉｓ　ＭＰ，Ｅｓｔｏｕｐ　Ａ．２００７．Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ　ｎｕｌ　ａｌｅｌｅｓ　ａｎｄ　ｅｓｔｉ－
ｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　Ｅｖｏｌ，２４（３）：
６２１－６３１
Ｅｓｔｏｕｐ　Ａ，Ｇａｒｎｅｒｙ　Ｌ，Ｓｏｌｉｇｎａｃ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．１９９５．Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ　ｖａｒｉ－
ａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｈｏｎｅｙ　ｂｅｅ（Ａｐｉｓ　ｍｅｌｌｉｆｅｒａ　Ｌ．）ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ：ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ
ｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｆｉｎｉｔｅ　ａｌｅｌｅ　ａｎｄ　ｓｔｅｐｗｉｓｅ　ｍｕｔａ－
ｔｉｏｎ　ｍｏｄｅｌｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１４０（２）：６７９－６９５
Ｇｏｕｄｅｔ　Ｊ．２００１．ＦＳＴＡＴ：Ａ　ｐｒｏｇｒａｍ　ｔｏ　ｅｓｔｉｍａｔｅ　ａｎｄ　ｔｅｓｔ　ｇｅｎｅ　ｄｉ－
ｖｅｒｓｉｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｆｉｘａｔｉｏｎ　ｉｎｄｉｃｅｓ［Ｒ］．Ｖｅｒｓｉｏｎ　２．９．３．Ｆｒｏｍ　ｈｔｔｐ：／／
ｗｗｗ．ｕｎｉｌ．ｃｈ／ｉｚｅａ／ｓｏｆｔｗａｒｅｓ／ｆｓｔａｔ．ｈｔｍｌ
Ｇｕｐｔａ　ＰＫ，Ｖａｒｓｈｎｅｙ　ＲＫ．２０００．Ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｍｉｃ－
ｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｆｏｒ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｗｉｔｈ
ｅｍｐｈａｓｉｓ　ｏｎ　ｂｒｅａｄ　ｗｈｅａｔ［Ｊ］．Ｅｕｐｈｙｔｉｃａ，１１３（３）：１６３－１８５
Ｊａｒｎｅ　Ｐ，Ｌａｇｏｄａ　ＰＪＬ．１９９６．Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅｓ，ｆｒｏｍ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ｔｏ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｂａｃｋ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉ，１１（１０）：４２４－４２９
Ｌｉ　ＹＣ，Ｋｏｒｏｌ　ＡＢ，Ｆａｈｉｍａ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．２００４．Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅｓ　Ｗｉｔｈ－
ｉｎ　Ｇｅｎｅｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ　Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ
Ｅｖｏｌ，２１（６）：９９１－１　００７
Ｌｉｕ　Ｓ，Ｃａｎｔｒｅｌ　ＲＧ，ＭｃＣａｒｔｙ　ＪＣ，ｅｔ　ａｌ．２０００．Ｓｉｍｐｌｅ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｒｅ－
ｐｅａｔ－ｂａｓｅｄ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎ　Ｃｏｔｔｏｎ　ｒａｃｅ　ｓｔｏｃｋ
ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｃｒｏｐ　Ｓｃｉ，４０：１　４５９－１　４６９
Ｌｉ　ＪＱ（李建强）．１９９６．Ｔｈｅ　ｏｒｉｇｉｎ　ａｎｄ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆａｍｉｌｙ
Ｆａｇａｃｅａｅ（山毛榉科植物的起源和地理分布）［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｐｈｙｔｏｔ－
ａｘｏｎ　Ｓｉｎ（植物分类学报），３４（４）：３７６－３９６
Ｌｉ　ＭＦ（李明芳），Ｚｈｅｎｇ　ＸＱ（郑学勤）．２００４．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｏｆ
ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（开发ＳＳＲ引物方法之研
究动态）［Ｊ］．Ｈｅｒｅｄｉｔａｓ（遗传），２６（５）：７６９－７７６
Ｍａｒｔｉｎ　ＭＡ，Ｍａｔｔｉｏｎｉ　Ｃ，Ｃｈｅｒｕｂｉｎｉ　Ｍ．２０１０．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎ
Ｅｕｒｏｐｅａｎ　ｃｈｅｓｔｎｕｔ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ａｎｄ　ｇｅｎｉｃ
ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ　ｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．Ｔｒｅｅ　Ｇｅｎｅｔ　Ｇｅｎｏｍｅｓ，６（５）：７３５－７４４
Ｍｏｒｇａｎｔｅ　Ｍ，Ｏｌｉｖｉｅｒｉ　ＡＭ，１９９３．ＰＣＲ－ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅｓ　ａｓ
ｍａｒｋｅｒｓ　ｉｎ　ｐｌａｎｔ　ｇｅｎｅｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｊ，３（１）：１７５－１８２
Ｏｅｔｊｅｎ　Ｋ，Ｒｅｕｓｃｈ　ＴＢＨ．２００７．Ｇｅｎｏｍｅ　ｓｃａｎｓ　ｄｅｔｅｃｔ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ
ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ａｍｏｎｇ　ｓｕｂｔｉｄａｌ　ｖｓ．ｉｎｔｅｒｔｉｄａｌ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
ｏｆ　ｔｈｅ　ｍａｒｉｎｅ　ａｎｇｉｏｓｐｅｒｍ　Ｚｏｓｔｅｒａ　ｍａｒｉｎａ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｅｃｏｌ，１６
（２４）：５　１５６－５　１５７
Ｐｅａｋａｌ　Ｒ，Ｇｉｌｍｏｒｅ　Ｓ，Ｋｅｙｓ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．１９９８．Ｃｒｏｓｓ－ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｍ－
ｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｏｙｂｅａｎ（Ｇｌｙｃｉｎｅ　ｍａｘ）ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔｓ
（ＳＳＲｓ）ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｌｅｇｕｍｅ　ｇｅｎｅｒａ：ｉｍｐｌｉｃａ－
ｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ＳＳＲｓ　ｉｎ　ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ
Ｅｖｏｌ，１５（１０）：１　２７５－１　２８７
Ｐｅａｋａｌ　Ｒ，Ｓｍｏｕｓｅ　ＰＥ．２００６．ＧｅｎＡｌＥｘ　６：ｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｉｎ　Ｅｘ－
ｃｅｌ．Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｏｆｔｗａｒｅ　ｆｏｒ　ｔｅａｃｈｉｎｇ　ａｎｄ　ｒｅｓｅａｒｃｈ［Ｊ］．
Ｍｏｌ　Ｅｃｏｌ　Ｎｏｔｅｓ，６（１）：２８８－２９５
Ｐｏｗｅｌ　Ｗ，Ｍａｃｈｒａｙ　ＧＣ，Ｐｒｏｖａｎ　Ｊ．１９９６．Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｂｙ
ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉ，１（７）：２１５－２２２
Ｒａｙｍｏｎｄ　Ｍ，Ｒｏｕｓｓｅｔ　Ｆ．１９９５．ＧＥＮＥＰＯＰ（ｖｅｒｓｉｏｎ　１．２）：ｐｏｐｕｌａ－
ｔｉｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ｓｏｆｔｗａｒｅ　ｆｏｒ　ｅｘａｃｔ　ｔｅｓｔｓ　ａｎｄ　ｅｃｕｍｅｎｉｃｉｓｍ［Ｊ］．Ｊ
Ｈｅｒｅｄ，８６（３）：２４８－２４９
Ｒｉｃｅ　ＷＲ．１９８９．Ａｎａｌｙｚｉｎｇ　ｔａｂｌｅｓ　ｏｆ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｔｅｓｔｓ［Ｊ］．Ｅｖｏｌｕ－
ｔｉｏｎ，４３（１）：２２３－２２５
Ｒｏｏｒｋｉｗａｌ　Ｍ，Ｓｈａｒｍａ１ＰＣ．２０１１．Ｍｉｎｉｎｇ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌ－
ｌｉｔｅｓ　ｉｎ　ｌｅｇｕｍｅ　ｕｎｉｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｍｅｄ　Ｉｎｆｏｒｍ，２５（１１）：４９０－４９８
Ｓａｎｇｕｉｎｅｔｔｉ　ＣＪ，Ｄｉａｓ　ＮＥ，Ｓｉｍｐｓｏｎ　ＡＪ．１９９４．Ｒａｐｉｄ　ｓｉｌｖｅｒ　ｓｔａｉｎｉｎｇ
ａｎｄ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ＰＣＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｏｎ　ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ　ｇｅｌｓ
［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１７（５）：９１４－２１
Ｓｅｍａｇｎ　Ｋ，Ｂｊｒｎｓｔａｄ，Ｎｄｊｉｏｎｄｊｏｐ　ＭＮ．２０１０．Ａｎ　ｏｖｅｒｖｉｅｗ　ｏｆ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ａｆｒ　Ｊ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，５
（２５）：２　５４０－２　５６８
Ｓｏｎｇ　ＹＰ（宋跃朋），Ｊｉａｎｇ　ＸＢ（江锡兵），Ｚｈａｎｇ　Ｍ（张曼），ｅｔ　ａｌ．
２０１０．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｂｙ　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＳＳＲ　ａｎｄ　ＥＳＴ－
ＳＳＲ　ｉｎ　ｐｏｐｌａｒ（杨树Ｇｅｎｏｍｉｃ－ＳＳＲ与ＥＳＴ－ＳＳＲ分子标记遗传
差异性分析）［Ｊ］．Ｊ　Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｆｏｒｅ　Ｕｎｉｖ（北京林业大学学报），
３２（５）：１－７
Ｓｕｎ　Ｙ，Ｗｅｎ　ＸＹ，Ｈｕａｎｇ　ＨＷ．２０１０．Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉ－
ａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ａｎｄ　Ｓ．ｓｐｈｅｎａｎｔｈｅｒａａｓ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｂｙ
ＩＳＳＲ　ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｓｙｓｔ　Ｅｃｏｌ，１（１）：１１９－１２１
Ｔａｕｔｚ　Ｄ，Ｒｅｎｚ　Ｍ．１９８４．Ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｒｅ　ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ　ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ
ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｇｅｎｏｍｅｓ［Ｊ］．Ｎｕｃｌ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ，１２
（１０）：４　１２７－４　１３８
Ｕｅｎｏ　Ｓ，Ａｏｋｉ　Ｋ，Ｔｓｕｍｕｒａ　Ｙ．２００９．Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｔａｇｓ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｆｏｒ
Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓ　ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ　ｖａｒ．ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ（Ｆａｇａｃｅａｅ）［Ｊ］．Ａｎｎ　Ｆｏｒ
Ｓｃｉ，６６（５）：５０９
Ｖａｒｓｈｎｅｙ　ＲＫ，Ｇｒａｎｅｒ　Ａ，Ｓｏｒｒｅｌｓ　ＭＥ．２００５．Ｇｅｎｉｃ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ
ｍａｒｋｅｒｓ　ｉｎ　ｐｌａｎｔｓ：ｆｅａｔｕｒｅｓ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ　Ｐｌａｎｔ
Ｓｃｉ，２３（１）：４８－５５
Ｘｕ　ＬＡ（徐立安），Ｌｉ　ＸＪ（李新军），Ｐａｎ　ＨＸ（潘惠新），ｅｔ　ａｌ．２００１．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｉｎ　Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓ　ｆａｒｇｅｓｉｉ
ｗｉｔｈ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ　ｍａｒｋｅｒｓ（用ＳＳＲ研究栲树群体遗传结构）
［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｂｏｔ　Ｓｉｎ（植物学报），４３（３）：４０９－４１２
Ｘｕ　Ｍ（胥猛），Ｌｉ　ＨＧ（李火根）．２００８．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃ－
ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｆｒｏｍ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｔａｇｓ
ｆｏｒ　Ｌｉｒｉｏｄｅｎｄｒｏｎ（鹅掌楸ＥＳＴ－ＳＳＲ引物开发及通用性分析）
［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｐｌａｎｔ　Ｂｒｅｅｄ（分子植物育种），６（３）：６１５－６１８
Ｙａｎｇ　ＹＬ（杨彦伶），Ｚｈａｎｇ　ＹＤ（张亚东），Ｚｈａｎｇ　ＸＹ（张新叶）．
２００８．Ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｐｏｐｕｌｕｓ　ＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｉｎ　Ｓａｌｉｘ
（杨树ＳＳＲ标记在柳树中的通用性分析）［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｐｌａｎｔ
Ｂｒｅｅｄ（分子植物育种），６（６）：１　１３４－１　１３８
Ｚａｎｅ　Ｌ，Ｂａｒｇｅｌｏｎｉ　Ｌ，Ｐａｔａｒｎｅｌｏ　Ｔ．２００２．Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｆｏｒ　ｍｉｃｒｏｓａｔ－
ｅｌｉｔｅ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ：ａ　ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｅｃｏｌ，１１（１）：１－１６
７９２３期　　　　　　　　 李春等：中国板栗ＥＳＴ－ＳＳＲ分子标记在栲树中的通用性分析