全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 31(5)：684— 689 2011年 9月
DOI：10．3969／j．issn．1000-3142．2011．05．022
观赏凤梨高效离体快繁影响因素的研究
龚明霞1，张志胜2，黎杨辉0，方锋学4，何铁光1，董文斌1
(1．广西农科院 蔬菜研究所 ，南宁 530007；2．华南农业大学 广东省植物分子育种重点实验室 ，广州
510642；3．广州花卉研究 中心 ，广州 510360；4．广西甘蔗研究所，南宁 530007)
摘 要：以侧芽为外植体材料，对其组织培养的各个阶段进行了研究。结果表明：品种对外植体的污染率、褐
变率 、芽诱导率及丛生芽增殖倍数均有显著影响；外源激素的种类和浓度在芽诱导分化、增殖、生根等各个 阶
段都是主要的影响因素 ；外植体在 1／2MS+NAA0．2 mg·L一1+6-BA2 mg·L 1上 ，48 d后芽开始分化 ，诱导
率为 4O ，平均芽分化数为 6个 ，诱导分化效果最好；芽增殖培养 阶段 ，若培养基 中仅含 6-BA，且浓度在 0～4
mg·L-a之间 ，芽增殖倍数随其浓度增大而增大；若培养基 中仅含 NAA，且其浓度为 0．2 mg·L 1时 ，增殖倍数
最大；培养基中同时添加 6-BA和 NAA，比单独添加 6-BA或 NAA时，芽的增殖效果好 ，且在 6-BA3 mg·L一1
+NAA0．5 mg·L 的 MS培养基上 ，G．dissitisflora和 G．‘Claret’增殖倍数最大，分别为 5．24和 3．84；在任
何相同的培养基上 ，G．dissitisflora的增殖倍 数显著高 于 G．‘Claret’；小 苗在含有 NAA 0．5 mg·L一1+
IBA0．5 mg·L- 的生根培养基上生长，生根率可达 91．O3 ，平均根数为 5．3条／株，生根效果较好。
关键词 ：观赏凤梨 ；离体快繁；影响因素
中图分类号 ：Q943 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—3142(2011)05—0684—06
Influencing factors of efficient and
，
rapid
propagation in vitro of Brom eliads
GONG Ming-Xia ，ZHANG Zhi-Sheng ，LI Yang-Hui0，
FANG Feng-Xue ，HE Tie-Guang1，DONG Wen_Bin1
(1．[nstitute of Vegetable Research，Guangxi Academy of Agricultural Sciences，Nanning 530007，China；
2．Guangdong Provincial Key Laboratory of Plant Molecular Breeding，South China Agricultural
University，Guangzhou 510642，China；3．Guangzhou Flower Research Center，Guangzhou 510360，
China；4．Guangxi Research Institute of Chem ical Industry，Nanning 530001，China)
Abstract：This paper，every stage was studied by using lateral buds as explants．The results showed that the variety
had remarkable influence on the contamination rate and the browning rate of explants，and the induction rate and the
proliferation multiple of tufty buds．The variety and concentration of exogenous hormone were the major influencing
factors in every stage such as the bud induction，proliferation and the root induction．In the bud induction stage，it got
the best result of induction differentiation，which occured after 48 days with 40 induction rate and average six buds
per explant when they were cultured on 1／2MS basal media supplemented with NAA 0．2 mg·L- and 6-BA 2 mg·
． In the bud proliferation stage．when the concentration of 6-BA solely supplemented in the media between 0— 4
mg·L- was higher，the proliferation multiple was higher．W hen the concentration of NAA solely supplemented in
the media was 0．2 mg·L- ，the proliferation multiple was the highest．It got better proliferation on the media sup一
收稿 日期：2010一ll一29 修回日期 ：2011—04—30
基金项目：广东省科技攻关项 目2007]3020801003)；广西农业科学院基本科研业务专项[200916(基)]；广州市招标项 目(GZCQ0702FGO6054)
[Supported by Key Science and Technology Program of Guangm Pro~nce(2007B020801003)；the Special Item of Basic Research of Guangm Agriculture
Academy of Agricultural Sciences 200916(basic)；Bidding Program of Guangzhou City(GZCQ0702FG06054)]
作者简介：龚明霞(1979一)，女，湖北黄冈市人，硕士，主要从事组织培养 、生物技术育种和栽培等研究，(E—mail)ff9903@126．corn。
5期 龚明霞等：观赏凤梨高效离体快繁影响因素的研究 685
Dlemented with both 6-BA and NAA than that on the media supplemented with 6-BA or NAA solely．On MS media
supplemented with 3 mg·L 6-BA and 0．5 mg·L NAA，the proliferation multiple of G．dissitisflora and G．
‘Claret’both got to the top，which was 5．24，3．84 respectively．On any the same media，the proliferation multiple of
G．dissitisflora was remarkable higher than that of G．‘Claret’．It was better to root when the plantlets grew on 1／
2MS media containing 0．5 mg· NAA and 0．5 mg·L- IBA，and the rooting rate could reach 91．03 ，and the
average number of the roots W3S 5．3 piece per plant．
Key words：Bromeliads；rapid propagation in vitro；influencing factors
观赏凤梨是 以叶或花作 观赏用单 子叶凤梨科
(Bromeliaceae)植 物的泛称 ，多 年生 常绿草本 。其
株型优美 ，叶片富有色彩 ，花形奇特 ，花序色泽艳丽 ，
是集观花 、观叶和观果于一身、美化环境和净化空气
于一体的时尚花卉，观赏期长达数个月乃至一年，是
我国年宵花市场主打盆栽花卉之一。目前市场上最
受欢迎 的 是果 子蔓 属 (Guzmania)和莺 歌 属凤 梨
(Vriesea)，需求量特别大。但市场上销售的观赏凤
梨中仅有少数是原生种 ，大多数为杂交 种或选育 出
来 的品种 ，不能使 用播种法繁殖 ，而扦插 繁殖速度
慢 ，不利于规模化生产。在这种形势下 进行观赏凤
梨离体培养快速繁殖研究，对我国工厂化生产观赏
凤梨种苗以满足市场需求具有重要意义，同时也是
选育新种质 、优 良种质 的推广和保存 的一条有效途
径 。至今虽有少量关于果子蔓属凤梨的组织培养的
研究报道(郑淑萍等 ，2005；桂意云等，2005)，但果子
蔓属凤梨品种繁多，已经建立起高效的离体快速繁
殖体系的品种还不多。根据前人的研究结果，可用
作观赏凤梨离体快速繁殖外植体材料的主要有顶芽
(Arrabal等，2002)、侧芽(Alves等，2001；徐立等，
2000)、茎尖 (Pierik& Sprenkels，1991；林思诚等 ，
2005)、叶片 (Vinterhalter& Vinterhatter，1994)、
实生苗(Rech等，2005)、花柄(Daquinta等，1998)。
本研究以观赏性状好 的果子蔓属种类 为材料 ，以侧
芽为外植体，系统地研究品种、外源激素等因素对丛
生芽分化诱导 、丛生芽增殖和芽苗生根 的影响 ，为优
质的观赏凤梨种苗高效的规模化大生产积累资料。
1 材料与方法
1．1实验材料
供试材料为 G．‘Claret’、G．‘Luna’和 G．dis—
sitisflora，由广州花卉研究中心提供 。
1．2实验方法
1．2．1芽的诱 导 从观赏凤梨母株 上切取 5 em 以
下的侧芽，在洗洁精溶液中洗去芽体外表的泥土及
老化的组织 ，在 自来水下冲洗 15 rain。去除外层叶
片，在自来水下冲洗 30 rain以上。放入超净工作
台，用 75 酒精浸泡 30 S，再用 0．1 9／6 HgC1 消毒
10 min，不时振荡 。倒去升汞溶液后 ，用无菌水冲洗
4～5次。将消毒好的蘖芽短缩茎纵切成 2～4块，
保证每个切块都含有茎尖组织 。然后将切块放入无
菌 0．1 PVP水溶液中浸泡 30 min，在无菌吸水纸
上吸干水分，接种到芽诱导培养基上，每瓶接种 1个
切块。30瓶为 1个重复，每个处理设 3个重复。先
在黑暗下培养 10～15 d，再在散射光下培养 ，光周期
为光照8 h·d。／黑暗 16 h·d～，培养温度为 25±1
℃。按下列公式计算污染率、褐变率和诱导率。
污染率(％)一(污染的外植体数／接种的外植体
总数)×100％；褐变率( )一(褐变的外植体数／接
种的无污染的外植体总数)×100 ；诱导率( )一
(诱导出芽的外植体数／接种的无污染的外植体总
数)×100 ，平均芽分化数一分化的总芽数／分化 出
芽的外植体总数。
1．2．2芽的增殖 将从外植体诱导出的芽进行切
割，使之成为单芽，在各种增殖培养基上培养，每瓶
接种 2～5个芽 ，30个芽作为 1个重 复，重复 3次。
设计 3个实验 ，分别研究培养 中单独添加 6-BA、单
独添加 NAA 以及 同时添加 6一BA 和 NAA 对两个
品种丛生芽增殖的影响。各实验的设计如下 ：
6一BA浓度实验 ：设 4种浓度，分别为 1、2、3、4
mg·L ，以 0 mg·L 作对照 。NAA浓度实验：设
5种浓度 ，分别为 0．05、0．1、0．2、0．5、1．0 mg·L 。
NAA与 6-BA配比实验 ：设 5种配 比，每种 配方 中
6-BA浓度均为 3 mg·L ，NAA浓度分别为 0、1、
2、3、4 mg ·L 。
以上所有培养基均以 MS培养基作为基本培养
基，其余成分均为：蔗糖30 g·L- 、卡拉粉 8 g·L- 、
15 CW(椰子汁)，pH5．8。转接后置恒温箱 25。C
中培养 ，光周期为光照 8 h·d ／黑暗 16 h·d～，40
d后统计增殖后 的总芽数 ，并计算增殖倍数 。增 殖
倍数 一增殖后丛生芽总数／接种的丛生芽总数 。
686 广 西 植 物 31卷
1．2．3芽苗生根 将芽进行切 割，使之成为单株芽
苗，接进不同的生根培养基 中诱导生根 ，每瓶接种 3
～ 5个芽，30个芽作为 1个重复，重复 3次 ，并观察
根 的生长状况 。置恒温箱 25℃中培养 ，光周期为光
照 8 h·d ／黑暗 16 h·d～，40 d后统计生根率及生
根数 。
1．2．4统计分析 统计分析以 SPSS软件进行 ，平均
数据以“平均数 ±标准误(S．E．)”表示 ，多重 比较采
用邓肯 氏新 复极差检 验法 (Duncan’S Multiple
Ranger Test，DMRT)。
2 结果与分析
2．1诱导芽分化的发生过程
观赏凤梨侧芽短缩茎切块接种到培养基上，经
过一段时间的培养，切块上部包裹茎尖生长点 的叶
片开始伸长生长，且叶片颜色由嫩 白色逐渐变成黄
绿色至绿色 ，通常可看到外层叶片基部膨大 ，叶基颜
色比叶片中上部稍浅 ，随后从叶基处形成数个小突
起 ，并逐渐形成不定芽(图版 I：A，E)，或是直接从
叶腋处长 出芽 (图版 I：B)。
2．2影响观赏凤梨芽分化诱导的因素
2．2．1品种对外植体污染和褐 变的影响 三个 品种
G．‘Claret’、G．‘Luna’和 G．dissitisflora的侧芽短
缩茎切块 ，在芽诱 导培养基 1／2MS+NAA0．5 mg
· L。+6-BA2 mg·L。上培养 40 d后 ，发生 了不 同
程度 的污染和褐变 。从表 1中可以看到 ，三个 品种
的短缩茎切块在相同的培养基上，污染率有显著的
差异，G．dissitisflora的污染率最高，为 42．37 ；
另一方面 3个品种 的褐变率差异也达到显著水平 ，
G．dissitisflora的褐 变率最高 ，为 62．88 。这说
明，在外植体初培养的过程中，品种对其污染和褐变
的影响显著。
2．2．2品种对 芽分化诱 导的影 响 G．‘Claret’、G．
‘Luna’、G．dissitisflora 在 培 养 基 1／2MS+
NAA0．5 mg·L。+6-BA2 mg·L。上培养得 到的
无菌 成 活 的 外 植 体 ，转 接 到 培 养 基 1／2MS+
NAA0．2 mg·L。+6-BA2 mg·L。上继续诱导分
化培养 80 d，40 d转一次瓶。从表 2看 出，不同品种
的外植体丛生芽诱导率有差异 ，G．‘Claret’的诱导
率最高，达到 40 ；G．‘Luna’的诱导率最低，只有
6．25 。这说明，品种对芽的诱导有影响 ，不同品种
的芽诱导率不一样。
2．2．3激素对芽分化诱导的影响 将 G．‘Claret’侧
芽外植体消毒后 ，接种到 6-BA与 NAA不同浓度组
合的四种芽诱导培养基中培养 120 d，40 d转一次
瓶 。从表 3可知 ，培养基 中同时添加 6-BA 和 NAA
与仅添加 6-BA相比，芽诱导率升高。当NAA浓度
为 0．2 mg·L- 或 0．5 mg·L。时，芽分化的起始时
问缩短 ，平均芽分化数增加 ，但当培养基中 NAA浓
度为 1 mg·L ，平均芽分化数减少和芽分化的起始
时间推迟。在培养基 1／2MS+NAA0．2 mg·L 4-6一
BA2 mg·L- 上接种后 48 d分化出芽，而在培养基 1／
2MS4-NAA1 mg·L- +6-BA2 mg·L 上需要培养
113 d。因此 ，综合 几个因素考虑 ，培养基 1／2MS+
NAA0．2 mg·L。+6-BA 2 mg·L 为 G．‘Claret’
侧芽外植体的诱导芽起始分化的最佳培养基。
2．3影响观赏凤梨丛生芽增殖的因素
2．3．1品种和 6一BA对丛生芽增 殖的影响 方差分
析结果表明，品种对丛生芽增殖的影 响极显著 (F一
128．25，F 一8．1)，6-BA对丛生芽增殖的影响
极显著(F一115．03，F ⋯．2n一4．43)，品种和 6一BA
互作对丛 生 芽增 殖 的影 响也极 显 著 (F一 18．99，
F 1-4．20—4．43)。从表 4可知 ：G．dissitiflora的平
均增殖倍数极显著地高于 G．‘Claret’的平均增殖
倍数 ，且 6-BA浓 度越高 ，丛生 芽增 殖倍数越大 ；当
6一BA浓度为 4 mg·L。时 ，G．dissitiflora增殖倍数
达到最大 ，为 3．82；当 6-BA浓度 为 3 mg·L 时，
G．‘Claret增殖倍数达到最大 ，为 3．24。
6-BA不仅影响丛生芽增殖速度 ，还影响增殖芽
的质量 。培养 过程 中发现 ，在高浓度 6 BA 的培养
基上 ，G．dissitiflora单 芽基部形成大量 的不定芽 ，
细小而密集，而 G．‘Claret’分化出的丛生芽相对疏
松 ，而在低浓度 6-BA培养基上 ，两 品种分化出的芽
都较粗壮。在不含激素的培养基上 ，丛生 芽不再大
量分化 ，而主要进行伸长生长 。
2．3．2品种和 NAA对丛生芽增 殖的影响 G．dis—
sitisflora和 G．‘Claret’单 芽在 含不 同浓度 NAA
的培养基中，芽可 以伸长变壮，且能增殖 ，G．‘Clar—
et’在 NAA浓度为 0．5 mg·I 。和 1 mg·L。的培
养基 中有较 多的根生成。方差分 析表明 ，NAA对
丛生芽 增殖 的影 响极 显 著 (F一 6．95，F 。 一
3．9)，品 种 对 丛 生 芽增 殖 的影 响 也 极 显 著 (F一
241．54，F。 一7．82)，但 NAA和品种之 间的互
作对丛生芽增殖 的影 响不显 著 (F一0．44，F 。
一 2．62)。从表 5可知 ，当培养基中 NAA浓度从 0

688 广 西 植 物 31卷
析表明 ，当 6-BA浓度为 3 mg·L 时 ，NAA在 O～1
mg·L。之 间，NAA／6-BA值对丛生芽增 殖的影响
极显著(F一39．05，F。．。15m一3．9)；品种对丛 生芽
增殖的影响极显著 (F一307．90，F 1．1 一7．82)；
NAA／6一BA值和品种之间 的互作对丛 生芽 的增殖
影响也极显著 (F一19．83，F 一3．9)。从 表 6
可以看出 ，当 NAA／6一BA值≤ 1／6时 ，丛生芽 的增
殖倍数随着 NAA／6一BA值的增大而增大，且 6-BA
和 NAA配合使用比单独使用 6-BA或 NAA，对促
进丛生芽增殖 的效果 明显好 ；G．dissitisflora丛生
芽的平均增殖倍数极显著地大于 G．‘Claret’丛生
芽的平均增殖倍数；当 NAA／6一BA值等于 1／6时，
G．dissitisfl0 和 G．‘Claret’丛生芽的增殖倍数均
达最大，分别为 5．24和 3．84。可见，培养基中含 3
mg·L。6-BA 和 0．5 mg·L NAA 时对丛 生芽的
增殖效果最好 。
2．4影响芽苗生根的因素
将高 2 cm以上小苗进行生根培养(图版 工：D，
G)。方差分析表明，培养基对芽苗生根率的影响不
显著 (F一2．36，F。lo 52，6—5．14)，对平均根数的影 响
显著 (F一17．71，F。．。 。一5．14)。从表 7看到 ，G．
dissitisflora小苗在培养基 1／2MS+NAA0．5 mg
· L一 和 1／2MS+NAA0．5 mg·L。+IBA0．5 mg·
L 上平均根数显著大于在 1／2MS不添加任何激素
的培 养 基 上 的平 均 根 数 ，而 在 培 养 基 1／2MS+
NAA0．5 mg·L。+IBA0．5 mg·L。上的平均根数
为 5．26条／株，为最 大，且平 均生根率也 高，为
91．03 ，此培养基为最佳生根培养基 。
表 4 品种和 6-BA对丛生芽增殖的影响
Table 4 Effect of variety and 6-BA on bud proliferation
培养基其它成分：MS+15 cw十蔗糖 30 g·L +琼脂粉 8 g·
L ，pH5．8。下 同。
表 5 品种和 NAA对丛生芽增殖的影响 *
Table 5 Effect of variety and NAA on bud proliferation
表 6 品种和 NAA／6一BA值对丛生芽增殖的影响
Table 6 Effect of variety and NAA／6一BA value on bud proliferation
2．5移 栽
将 已生根 的单株无菌苗置室外遮阳炼苗 3～5 d
后 ，再揭开培养瓶盖炼苗 3 d，最后从培养瓶中取出，
在 自来水下洗净苗根部培养基后 ，移栽到育苗盘中。
育苗基质为 80 腐殖质+20 珍珠岩，移栽后立即
浇灌无菌的 1／2MS营养液，并加盖薄膜小拱棚，随
后逐渐揭棚放风降低湿度，3周后完全揭棚，成活率
可达 90 以上。
3 讨论
在观赏凤梨的侧芽外植体初培养过程中，常常
5期 龚明霞等：观赏凤梨高效离体快繁影响因素的研究 689
表 7 培养基对 G．dissitisflora芽苗生根的影响
Table 7 Effect of media on shoot induction
of G．dissitisflola
生根率
Rooting
rate
( )
平均根数(条／株)
Average number
of root(piece
per plant)
培养基其它成分：1／2MS+蔗糖 30 g·L- +琼脂粉 8 g·L- ，
pH5．8。
会发生较严重的褐化现象 ，且与品种特性有很大 的
关系，不同的品种褐变程度不一样 ，本实验 中在培养
基中添加 了 0．4 g·L- PVP和 1 g·L- AC，褐变严
重的仍会高达 62．88 ，观赏凤梨其它的防褐方法
有待进一步研究 。
外源激素的种类和浓度的搭配是诱导植物产生
芽、根、愈伤组织的关键因素(苏钛等，2009)。本研
究中，在诱导观赏凤梨侧芽切块外植体芽分化阶段，
发现外源激素的种类和浓度对芽诱 导的时间、诱导
率和芽分化数有明显影响 ，与林思诚等(2005)的研
究结果一致 。George(1996)认 为高浓度 的细胞分
裂素很可能产生不定芽，而低浓度的细胞分裂素诱
导分生组织产生腋芽，本实验中外植体芽分化结果
与之相似。一般来说，高浓度的细胞分裂素和低浓
度的生长素有利 于丛生芽 的生长 (李群等 ，2004)。
桂意云等(2005)也认为 6-BA与 NAA组合，其对比
浓度相近丛生芽增殖倍数大 。本研究 中，6-BA对促
进丛生芽增殖作用显著，浓度越高丛生芽的增殖倍
数越大；少量 NAA也能够促进丛生芽增殖，提高
NAA浓度 到 1 mg·L。时，则抑制丛 生芽的增殖 ，
且 6-BA和 NAA配合的比值为 1／6时，对促进丛生
芽增殖效果最好，与郑 淑萍等 (2005)对星花风梨 的
快速繁殖研究结果相似。可见，芽的分化、增殖与细
胞分裂素和生长素的动态平衡有关。
Annete等(2005)研究表明在三种培养基 中，
． 户o∞6“rg越和 V．g~gantea每个实生苗平
均增殖 的芽数分别 是 0．72和 4．3，这种差异 极显
著 。本研究也表明品种对丛生芽增殖 的影响显著，
不论是在单独含有 6一BA或 NAA的培养基上，还是
在同时含有 6-BA和 NAA的培养基上，G．dissitis一
0rn丛生芽 的增殖倍数明显高于 G．‘Claret’，这种
差异可能与品种本身的内源激素水平不同有关。
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