全 文 ： 一
胡萝 卜细胞培养产胡萝 卜素的研究
杨 宁 郭 勇 (华南理工大季否蕊 精三石 广州510641) | 2
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摘 要 从鲜红胡萝 h主根部选取外植体，用 MS型培养基诱导出愈伤组织，继代 培养，周期 22
d，接着进行细胞的液体悬浮培养．液体培养 20 d时，测定 胡萝 h紊含量达 41．7 mg／L， 占细
胞干重的0，35％-培养细胞中含胡萝卜素是胡萝卜根部的3．38倍，色素比 窭提高15．4倍。
关键词墅堂垡墅； 塑翌 室：愈伤组织；固体培养：悬浮培养古阿碧7L
Studies on the formation of t-carotene in cell
suspension cultures of Daucus carota
Yang Ning Guo Yong
(Coleg~o]FoodF．~gineering andBio oec[~nology，SouthCfiinaUniversityofTecfinology，Gnangzhou 51064
Abstract The calus was derived from the explants
． selected from the main root of Da“ “ carota．
in M S medium-One growth period was about 22 days for proliferation
． and then calus was
subcultured into suspension culture．The optimum pe riod of harvesting in cel suspe nsion culture
was 20 day＆The result showedthatthe content of脚 rotene carl reach 41．7mg／L andis0．35％
of dry cell weight．The pigment content of moist cell in suspension culture is 3．38 times of that of
main rootofD “c“ carota and _carotene yieldincrease 15．4fo】d
Key words Cell culture ； -carotene；calus；callus o~lture；suspe nsion culture
胡萝 卜素又称维生素 A原 (Provitamin A)，理论上，一十分子的 胡萝 h素可转化为两个分
子 的维生素 A。
c H5 +2H2O 盟 8 2C∞H H2O
而维生素 A对人体有很好的保健作用和治疗作用，可作为营养增补荆。同时也是一种天然着色剂，
能产生 自然醒目的黄一橙一红色。在一般食品的pH值范围内能稳定保存 。
目前，天然胡萝 卜素产品 (主要是 一胡萝 卜素 )的制法有：从植物，如胡萝 h、盐生杜氏藻等
含天然胡萝 卜素高的植物中提取．由于生产成本高， 目前市场上天然 一胡萝 卜素的价格较高．
国外在用胡萝 h细胞培养产生次级代谢物的研究有：有霉菌菌丝体细胞作刺激剂，可诱导壳多糖
1998-95—22收稿
第一作者简开：机 宁、男，1964~出生，工学硕士、工程师．发酵工程专业 现工作在广东省生产力促进中-￡
国家 自然科学基金资助项日
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1期 杨 宁等： 胡萝 h细胞培养产胡萝 h索的研究 8 5
酶的产生 蚰 ．胡萝 卜细胞悬浮培养产生花色苷、蔗糖酶等方面的研究 ∞ 。本文研究了从胡萝 卜培
养生长期的主根部诱导出愈伤组织，经液体悬浮培养到产生胡萝 卜索的整个过程．试图用植物细胞培
养方法探索出高产胡萝 卜素的一条新途径，降低生产成本．以适应当今国内外市场发展之需求
1 材料与方法
I．1 材料
生长接近成熟的鲜胡萝
I。2 愈伤组织诱导方法
MS型愈伤组织培养基，液体悬浮培养基，生长调节剂等。
表 l 胡萝 不同部位薛导出寂伤组磐l
无菌条件下，从胡萝 h主根部选取 2 mm
厚 4 mm见方的外植体，接种于固体培养基表
面。在 25℃、黑暗条件下培养。
1。3 悬浮培井方法
无菌条件下，取培养 18 d种龄的愈伤组
织．每瓶 1 g接种于 25 mL培养 液中 (i00
mL三角瓶)．25℃ ，黑暗条件下，100 rpm
振荡培养。
1．4 细胞生长凸线的测定 “
每批以 18 d为细胞生长周期，每隔鹌 h
取出其中一瓶测细胞生长的干重。湿重 (g／L)
1．5 色素定量测定‘
Table 1 Situation ofcalus induction from diferent
imrLs ofD aucus carota
对培育时间作图
样品测定时 ，称取 l g湿细胞，避光情况下，65℃烘干 4h，除部分水份，将细胞浸泡于 】OmL
三氯甲烷巾，用超声波破碎仪破碎细胞，然后将其静置 8 h，得收集滤液，用 721型分光光度计测定
值，并与标准曲线比较．用分光光度法可计算出胡萝 卜索的浓度。
2 结果与讨论
2．1 外揎
分别从胡萝 h的茎切段．根部的皮层、木
质部及韧皮部选取外植体，在 MS固体培养
基上做诱导愈伤组织的试验，结果如下：
由表 1知，从韧皮部诱导出的愈伤组织有
较好的生长效果，可作为继代培养的细胞．
2l 2 -EIt0影响
本试验采用生长素 2．4_D 和分裂素 KT
配合使用，作以下系列试验 (表 2)，并观察
生长结 果。
结果显示：胡萝 h的愈伤组织增殖培养中
表2 增殖培养中调节剂的用量试验
TabLe2 U~．getestofg~owLh rcgulator~ so Lid
proliferation culture
表中说明 。卅 。为愈伤组虮生 k惜 最抒．量多． 表面突出特．随黄色．均
匀：。+ 生 妊量 尚可 ．表而妾 出状． 黄 色： +’都分 增殖．厢 }立状 ．不均匀，
’_-基术无增 瞠．干枯．’— 培养一段时甸后． 危伤组虮不生长．壁黄褐 色．
Note： 卅 ’tbe E~s-t situation of~mgus g~wth． 1 臼e mum~ r,pfo dm&
light州 bw．’-H-’fair~good sit~tion ofgrowt~p|o ．1i#ty o 、 +
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调节剂用量：2，4-D 0．5mg／L，KTO．2mg／L为合适。
2．3 高产胡萝 细胞的选育
试验用二次继代培养后的愈伤组织，采用优化法连续继代培养 8次．优选含胡萝 卜素量高的细胞
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